Thyroglobulin Point of Care-assay til hurtig detektion af metastatisk differentieret skjoldbruskkirtelcarcinom

Metoder og materialer

Hypotese: Den diagnostiske nøjagtighed af det nye POC-Tg vil være sammenlignelig med de nuværende diagnostiske metoder, der anvendes til evaluering af cervikale LN'er, der mistænkes som DTC-metastaser.

Sigte

1. For at validere POC-Tg i FNA-klinikken: Ubestemte eller mistænkelige cervikale LN'er hos patienter med kendt eller mistænkt DTC vil blive vurderet ved hjælp af både den nye POC-Tg og den formelle evaluering (formel immunoassay for Tg og cytologi).
2. For at validere POC-Tg i operationsstuen: Ubestemte eller mistænkelige cervikale LN'er hos patienter opereret for DTC vil blive vurderet ved hjælp af både den nye POC-Tg og den formelle evaluering (frosset snit og/eller endelig histologi i den patologiske institution).

Betydning: En nøjagtig POC-Tg kan ændre nuværende diagnostiske og behandlingsmetoder for patienter med mistanke om metastatisk DTC og forbedre patientbehandlingen.

Studere design:

Efterforskerne vil gennemføre en multicenterundersøgelse. Alle kodede data vil blive administreret centralt ved hjælp af en elektronisk caserapportformular af Soroka University Medical Center (SUMC) Clinical Research Center. Alle data for sensitivitets- og specificitetsevalueringer af den nye POC-Tg og de nuværende diagnostiske metoder til DTC cervikal LN-metastaser vil blive analyseret retrospektivt mod reference- ('guld') standarden (se nedenfor). Kliniske beslutninger vil blive truffet i overensstemmelse med de nuværende retningslinjer og accepterede tilgange til evaluering af cervikal LN, der er mistænkt som DTC-metastaser (i FNA-klinikken, kombinationen af ​​FNAC og FNA-Tg; og i OR, frosset afsnit og/eller endelig histologi).

Detaljeret undersøgelsesprotokol

1. FNA-klinikken:

   Alle rekrutterede patienter vil gennemgå en amerikansk undersøgelse af halsen ved hjælp af en amerikansk scanner med en 12,5 MHz lineær phased-array transducer. USA-guidet FNA af mistænkelig eller ubestemmelig LN vil blive udført af en erfaren læge (en endokrinolog, otolaryngolog eller en radiolog), som klinisk indiceret. LN vil blive klassificeret som mistænkeligt, hvis nogen af ​​følgende billeddannelsestræk er til stede: forkalkning, cystisk forandring, hyperekogenicitet eller perifer eller diffus øget vaskularitet på farvedoppler-billeddannelse. LN vil blive klassificeret som ubestemt mistænkelig, når der hverken er fundet klare godartede eller mistænkelige billeddannende træk (hverken ekkogen hilum eller hilar vaskularitet i fravær af mistænkelige fund). FNA-proceduren vil blive udført under amerikansk vejledning med frihåndsteknikken ved hjælp af en 22 til 25-gauge nål forbundet til en 3 til 10-ml sprøjte, som rutinemæssigt udføres i hvert medicinsk center. Hvis det er teknisk og klinisk muligt, udtages hver LN to gange: en passage til cytologi og en passage til FNA-Tg udvaskning.

   FNA for cytologi (FNAC) - FNAC-prøver vil blive fremstillet ud fra direkte udstrygninger og/eller væskebaseret cytologi, som rutinemæssigt udføres i hvert medicinsk center. I FNA-klinikken på SUMC vil prøver blive smurt på objektglas og straks fikseret i 95 % ethanol ved hjælp af direkte smear-metoden. Med den væskebaserede cytologimetode vil prøver blive forberedt ved hjælp af ThinPrep PreservCyt® (Hologic Ins., Marlborough, MA, USA). Cytologiske fund vil blive fortolket af cytopatologer med speciale i thyreoideacytologi. Cytologiresultaterne opnået fra LN af interesse vil blive kategoriseret som: ondartet, godartet eller ubestemmelig.

   FNA-Tg og POC-Tg- Efter at nålen er lokaliseret inde i det relevante LN, vil et undertryk blive produceret af sprøjtehåndtaget, mens der udføres indad-udad og roterende bevægelse, indtil et blodigt materiale ses i den proksimale ende af nålen. Derefter trækkes 100 µL 0,9 % (vægt/volumen) saltvand via nålen ind i sprøjten, der vil indeholde 100 µL mildt blodig aspirat fra det relevante LN. Aspiratet vil derefter blive overført til et Eppendorf-rør gennem den samme nål, som blev brugt til FNA-proceduren. På dette tidspunkt vil produktposen til POC-Tg-sættet blive åbnet. Ved hjælp af en engangspipette vil 40 µL blive aspireret fra Eppendorf-røret og dryppet ind i midten af ​​prøvebrønden i POC-Tg-kittet. To dråber af bufferen vil derefter blive dispenseret i midten af ​​prøvebrønden. Resultater af POC-Tg vil blive opnået og dokumenteret efter 10 minutter. For at sammenligne nøjagtigheden af ​​POC-Tg-kittet med det formelle immunoassay for Tg, der anvendes i hver institution, tilsættes 0,9 % saltvand til aspiratet, der efterlades i Eppendorf-røret til et slutvolumen på 0,6 ml, og derefter overføres i et gel indeholdende rør og sendt til det kliniske laboratorium, der udfører Tg-måling.

   Reference ('guld') Standard-LN vil endelig blive diagnosticeret som metastatisk, hvis de viser ondartet FNA-cytologi (Bethesda 6) eller opfylder mindst et af følgende kriterier: (i) malignitetsbekræftelse baseret på den kirurgiske prøve (histologi), ( ii) efterfølgende gentagen FNA- eller kerne-nål-biopsi-rapportering, henholdsvis Bethesda 6 eller DTC, eller (iii) opfølgning med billeddannelse efter et år, der viser tydelige US-træk ved metastase. LN med godartet eller ubestemt FNA-cytologi fri for metastatisk sygdom efter samme kriterier vil endelig blive diagnosticeret som benign.

   Rutinemæssig laboratorievurdering - Analytter som plasma-Tg, anti-Tg-antistoffer, anti-thyroid-peroxidase, TSH, fri T4 og fri T3 vil blive udført som en del af den rutinemæssige evaluering af patienter med mistanke om eller kendt skjoldbruskkirtelsygdom.

   Nødvendige data (data, der skal registreres):

   • Tekniske data (pr. center): Det amerikanske firma, der anvendes i hver institution, type FNA-Tg-immunoassay (type, firma, detektionsgrænse, rapporteret nøjagtighed), anvendt cytologisk evaluering (type og firma).
   • Demografiske og kliniske data: Fødselsdato, dato for indeksproceduren, alder (år) på tidspunktet for indeksproceduren, tidligere diagnose af Hashimoto thyroiditis (ICD9-kode 2452), tidligere diagnose af Graves sygdom (ICD9-kode 2420), behandlet med levothyroxin eller et anti-thyreoidea-lægemiddel, forudgående skjoldbruskkirteloperation (nej, lobektomi [venstre/højre], subtotal thyreoidektomi, komplet thyreoidektomi), tidligere nakkedissektion (central [nej, højre, venstre], lateralt niveau 2-4 [nej, højre, venstre], lateral niveau 5 [nej, højre, venstre]).
   • Laboratoriedata før indeksproceduren (hver vil blive rapporteret med enheder brugt af laboratoriet, hvor den blev udført, og som X øvre normgrænse): TSH, Tg, anti-Tg- antistoffer, fri T4, fri T3, anti- thyroidperoxidase.
   • Med hensyn til amerikanske fund af skjoldbruskkirtlen, vil følgende oplysninger blive tilgået for den mest mistænkelige knude: TIRADS-point, TIRADS-klasse, American Thyroid Association-klasse, tre dimensioner og volumen.
   • Amerikanske fund af det LN, hvorfra proceduren udføres (ja/nej for hver): ekkogen hilum, hilar vaskularitet, forkalkning, cystisk forandring, hyperekogenicitet, perifer eller diffus øget vaskularitet på farvedoppler-billeddannelse, endelig fortolkning (ubestemt/mistænkeligt) ).
   • Cytologisk rapport om den mest mistænkelige/relevante skjoldbruskkirtelknolde: Bethesda system score.
   • Cytologiske fund af LN, hvorfra proceduren udføres: klassificeret som godartet, ubestemt eller ondartet.
   • FNA-Tg-enheder rapporteret af det institutionelle laboratorium og X øvre grænse for norm.
   • POC-Tg- positiv eller negativ.
   • Endelig histologi
2. ELLER-armen:

Skjoldbruskkirtel/halskirurgi og Ex-vivo FNA- Alle rekrutterede patienter vil blive opereret, som klinisk indiceret, enten som en del af primær behandling for DTC eller for vedvarende eller tilbagevendende DTC. Skjoldbruskkirtel- og nakkedissektionsoperationer vil blive ledet af erfarne otolaryngologer eller endokrine kirurger. Når et ubestemt eller mistænkeligt LN er fundet, og det vurderes, at en frosset snitrapport af LN kan ændre operationsomfang, vil LN blive dissekeret og evalueret af både det formelle evalueringsfrosne snit og POC-Tg. Efter dissektion af LN vil ex-vivo FNA-Tg og POC-Tg blive udført som beskrevet ovenfor (under afsnittet 'FNA-Tg og POC-Tg').

Frosset snit- Den relevante prøve til frosset snit vil blive dissekeret, behandlet og sendt til patologisk evaluering som klinisk indiceret og rutinemæssigt udført i hvert medicinsk center. Alle kliniske beslutninger under operationen vil blive truffet i henhold til resultaterne af det frosne afsnit eller den kliniske vurdering. Histologiresultaterne af den frosne snitanalyse, opnået fra det relevante LN, vil blive kategoriseret som: ondartet, godartet eller ubestemt/uendeligt.

Reference ('guld') Standard-LN vil endelig blive diagnosticeret som benign eller malign (DTC-metastase) i henhold til den endelige histologiske rapport.

Nødvendige data:

• Tekniske data (pr. center): Frosne snitudstyr, type FNA-Tg immunoassay (type, fast, detektionsgrænse, rapporteret nøjagtighed).
• Demografiske og kliniske data: Fødselsdato, dato for indeksproceduren, alder (år) på tidspunktet for indeksproceduren, tidligere diagnose af Hashimoto thyroiditis (ICD9-kode 2452), tidligere diagnose af Graves sygdom (ICD9-kode 2420), behandlet med levothyroxin eller et anti-thyreoidea-lægemiddel, forudgående skjoldbruskkirteloperation (nej, lobektomi [venstre/højre], subtotal thyreoidektomi, komplet thyreoidektomi), tidligere nakkedissektion (central [nej, højre, venstre], lateralt niveau 2-4 [nej, højre, venstre], lateral niveau 5 [nej, højre, venstre]).
• Laboratoriedata før indeksproceduren (hver vil blive rapporteret med enheder brugt af laboratoriet, hvor den blev udført, og som X øvre normgrænse): TSH, Tg, anti-Tg- antistoffer, fri T4, fri T3, anti- thyroidperoxidase.
• Cytologisk rapport om den mest mistænkelige/relevante skjoldbruskkirtelknolde: Bethesda-systemet.
• Cytologiske fund af det relevante LN: klassificeret som godartet, ubestemt eller ondartet.
• Den planlagte operation: lobektomi [venstre/højre], subtotal thyreoidektomi, komplet thyreoidektomi, nakkedissektion (central [nej, højre, venstre], lateralt niveau 2-4 [nej, højre, venstre], lateralt niveau 5[nej, højre venstre]).
• FNA-Tg-enheder rapporteret af det institutionelle laboratorium og X øvre grænse for norm.
• POC-Tg- positiv eller negativ.
• Det frosne afsnit rapporterer: ondartet, godartet eller ubestemmelig/uendeligt.
• Samlet tid nødvendig til evaluering af den frosne sektion - fra dissektion til rapport (minutter).
• Den handling, der blev udført: som planlagt/forlænget (specificer).
• Endelig histologi

Statistisk analyse:

Estimaterne af sensitivitet og specificitet vil blive beregnet for henholdsvis de positive og negative prøver, mens deres status vil blive defineret ved hjælp af reference ('guld') standarden (diagnostisk procedure afhængig af cytologi og histologiske resultater og anden klinisk information). For at imødekomme hovedformålene med undersøgelsen vil 95 % konfidensintervallet blive konstrueret omkring hver af valideringsparametrene. En designeffekt vil blive taget i betragtning for de prøver taget i operationsstuen, der stammer fra den samme patient, ved hjælp af en sandwich-estimator af standardfejlen. Desuden vil forskerne undersøge potentielle faktorer forbundet med enighed og uenighed om den diagnostiske test med referencen ('guld') standarden. Specifikt vil karakteristika for patienter, hvor diagnosen blev afstemt med referencen ('guld') standard blive sammenlignet med dem med uoverensstemmende resultater. Denne type analyse vil indikere populationer, hvis nogen, som testen ikke bør anvendes til. Sammenligningerne vil blive udført ved brug af standard statistisk metodologi, dvs. Chi-Square eller Fisher's Exact test for kategoriske variable og t-test, ANOVA eller ikke-parametriske alternative tests for kontinuerte parametre. Konfidensintervaller vil blive justeret til grupperede observationer efter behov.