用于快速检测转移性分化型甲状腺癌的甲状腺球蛋白即时检测

方法和材料

假设：新型 POC-Tg 的诊断准确性将与目前用于评估疑似 DTC 转移的宫颈淋巴结的诊断方法相当。

目的

1. 在 FNA 诊所验证 POC-Tg：将使用新型 POC-Tg 和正式评估（Tg 和细胞学的正式免疫测定）评估已知或疑似 DTC 患者的不确定或可疑宫颈淋巴结。
2. 为了在 OR 中验证 POC-Tg：将使用新型 POC-Tg 和正式评估（病理机构的冰冻切片和/或最终组织学）评估 DTC 手术患者的不确定或可疑的宫颈淋巴结。

意义：准确的 POC-Tg 可能会改变目前疑似转移性 DTC 患者的诊断和治疗方法，并改善患者管理。

学习规划：

研究人员将进行一项多中心研究。 所有编码数据将由 Soroka 大学医学中心 (SUMC) 临床研究中心使用电子病例报告表集中管理。 将根据参考（“金”）标准（见下文）回顾性分析新型 POC-Tg 的所有敏感性和特异性评估数据，以及 DTC 宫颈 LN 转移的当前诊断方法。 临床决策将根据目前的指南和公认的评估疑似 DTC 转移的宫颈 LN 的方法做出（在 FNA 诊所，FNAC 和 FNA-Tg 的组合；在 OR，冰冻切片和/或最终组织学）。

详细研究方案

1. FNA 诊所臂：

   所有招募的患者都将使用带有 12.5 MHz 线性相控阵换能器的美国扫描仪对颈部进行美国检查。 根据临床指示，由经验丰富的医生（内分泌学家、耳鼻喉科医生或放射科医生）对可疑或不确定的 LN 进行超声引导下的 FNA。 如果存在以下任何影像特征，LN 将被归类为可疑：钙化、囊性改变、高回声，或彩色多普勒成像上的外周或弥漫性血管分布增加。 当未发现明确的良性或可疑影像特征时（在没有可疑发现的情况下既没有回声肺门也没有肺门血管分布），LN 将被归类为不确定可疑。 FNA 程序将在美国指导下使用徒手技术进行，使用连接到 3 至 10 毫升注射器的 22 至 25 号针头，正如每个医疗中心常规执行的那样。 如果技术和临床上可行，每个 LN 将被取样两次：一次用于细胞学，一次用于 FNA-Tg 洗脱。

   细胞学 FNA (FNAC) - FNAC 标本将从直接涂片和/或液基细胞学制备，如每个医疗中心常规执行的那样。 在 SUMC 的 FNA 诊所，标本将被涂抹在载玻片上，并立即使用直接涂片法固定在 95% 的乙醇中。 通过液基细胞学方法，将使用 ThinPrep PreservCyt®（Hologic Ins.，Marlborough，MA，USA）制备标本。 细胞学结果将由甲状腺细胞学专业的细胞病理学家进行解读。 从感兴趣的 LN 获得的细胞学结果将被分类为：恶性、良性或不确定。

   FNA-Tg 和 POC-Tg- 针头定位到感兴趣的 LN 内后，注射器手柄会产生负压，同时进行向内向外和旋转运动，直到在近端看到血性物质针。 此后，将通过针头将 100 μL 的 0.9%（w/v）盐水吸入注射器中，该注射器将包含 100 μL 来自感兴趣的 LN 的轻度血吸液。 然后通过用于 FNA 程序的相同针将吸出物转移到 Eppendorf 管中。 此时POC-Tg试剂盒的产品袋会被打开。 使用一次性移液器，40 µL 将从 Eppendorf 管中吸出并滴入 POC-Tg 套件样品孔的中间。 然后将两滴缓冲液滴入样品孔的中间。 10 分钟后将获得并记录 POC-Tg 的结果。 为了比较 POC-Tg 试剂盒与每个机构使用的正式 Tg 免疫测定的准确性，将 0.9% 盐水添加到将留在 Eppendorf 管中的抽吸物中，使最终体积为 0.6 mL，然后转移放入装有凝胶的试管中，然后送到进行 Tg 测量的临床实验室。

   参考（“金”）标准——如果 LN 显示恶性 FNA 细胞学检查（Bethesda 6）或至少满足以下标准之一，则 LN 最终将被诊断为转移：（i）根据手术标本（组织学）确认恶性肿瘤，（ ii) 随后重复 FNA 或芯针活检分别报告 Bethesda 6 或 DTC，或 (iii) 一年后影像学随访显示明确的美国转移特征。 良性或不确定的 FNA 细胞学无转移性疾病的相同标准的 LN 将最终诊断为良性。

   常规实验室评估——血浆 Tg、抗 Tg 抗体、抗甲状腺过氧化物酶、TSH、游离 T4 和游离 T3 等分析物将作为疑似或已知甲状腺疾病患者常规评估的一部分进行。

   所需数据（要捕获的数据）：

   • 技术数据（每个中心）：每个机构使用的美国公司、FNA-Tg 免疫测定的类型（类型、公司、检测限、报告的准确性）、使用的细胞学评估（类型和公司）。
   • 人口统计学和临床​​数据：出生日期、指数手术日期、指数手术时的年龄（岁）、桥本甲状腺炎的既往诊断（ICD9 代码 2452）、格雷夫氏病的既往诊断（ICD9 代码 2420）、治疗使用左旋甲状腺素或抗甲状腺药物，既往甲状腺手术（无，肺叶切除术[左/右]，甲状腺次全切除术，甲状腺全切除术），既往颈部清扫术（中央[无，右，左]，侧2-4级[不，右，左]，横向水平 5 [不，右，左]）。
   • 索引程序之前的实验室数据（每项数据都将使用执行该程序的实验室使用的单位进行报告，并作为正常值的 X 上限）：TSH、Tg、抗 Tg-抗体、游离 T4、游离 T3、抗-甲状腺过氧化物酶。
   • 关于甲状腺的超声检查结果，对于最可疑的结节，将访问以下信息：TIRADS 点、TIRADS 等级、美国甲状腺协会等级、三维度和体积。
   • 进行手术的淋巴结的美国发现（每个是/否）：肺门回声、肺门血管分布、钙化、囊性改变、高回声、彩色多普勒成像上的外周或弥漫性增加的血管分布、最终解释（不确定/可疑） ).
   • 最可疑/相关甲状腺结节的细胞学报告：Bethesda 系统评分。
   • 进行手术的 LN 的细胞学发现：分类为良性、不确定或恶性。
   • FNA-Tg- 机构实验室报告的单位，以及 X 标准上限。
   • POC-Tg- 阳性或阴性。
   • 最终组织学
2. 手术室手臂：

甲状腺/颈部手术和体外 FNA - 所有招募的患者都将根据临床指示进行手术，作为 DTC 或持续性或复发性 DTC 主要治疗的一部分。 甲状腺和颈部清扫手术将由经验丰富的耳鼻喉科医生或内分泌外科医生领导。 每当发现不确定或可疑的LN，并认为LN的冰冻切片报告可能改变手术范围时，将通过正式评估-冰冻切片和POC-Tg对LN进行解剖和评估。 解剖 LN 后，将按照上文详述（在“FNA-Tg 和 POC-Tg”部分下）进行体外 FNA-Tg 和 POC-Tg。

冰冻切片- 冰冻切片的相关标本将根据临床指征进行解剖、处理并送往病理学评估，并在每个医疗中心常规进行。 手术过程中的所有临床决策将根据冰冻切片结果或临床判断做出。 从感兴趣的 LN 获得的冰冻切片分析的组织学结果将被归类为：恶性、良性或不确定/不确定。

参考（'金'）标准-根据最终组织学报告，LN 将最终被诊断为良性或恶性（DTC 转移）。

所需数据：

• 技术数据（每个中心）：冰冻切片设备、FNA-Tg 免疫测定类型（类型、公司、检测限、报告的准确性）。
• 人口统计学和临床​​数据：出生日期、指数手术日期、指数手术时的年龄（岁）、桥本甲状腺炎的既往诊断（ICD9 代码 2452）、格雷夫氏病的既往诊断（ICD9 代码 2420）、治疗使用左旋甲状腺素或抗甲状腺药物，既往甲状腺手术（无，肺叶切除术[左/右]，甲状腺次全切除术，甲状腺全切除术），既往颈部清扫术（中央[无，右，左]，侧2-4级[不，右，左]，横向水平 5 [不，右，左]）。
• 索引程序之前的实验室数据（每项数据都将使用执行该程序的实验室使用的单位进行报告，并作为正常值的 X 上限）：TSH、Tg、抗 Tg-抗体、游离 T4、游离 T3、抗-甲状腺过氧化物酶。
• 最可疑/相关甲状腺结节的细胞学报告：Bethesda 系统。
• 相关 LN 的细胞学发现：分类为良性、不确定或恶性。
• 计划手术：肺叶切除术[左/右]、甲状腺次全切除术、甲状腺全切除术、颈部清扫术（中央[无、右、左]、外侧2-4级[无、右、左]、外侧5级[无、右左]）。
• FNA-Tg- 机构实验室报告的单位，以及 X 标准上限。
• POC-Tg- 阳性或阴性。
• 冰冻切片报告：恶性、良性或不确定/不确定。
• 冰冻切片评估所需的总时间 - 从解剖到报告（分钟）。
• 执行的操作：按计划/扩展（指定）。
• 最终组织学

统计分析：

将分别计算阳性和阴性样本的敏感性和特异性估计值，同时使用参考（“金”）标准（诊断程序取决于细胞学和组织学结果以及其他临床信息）定义它们的状态。 为了解决研究的主要目标，将围绕每个验证参数构建 95% 的置信区间。 将使用标准误差的三明治估计量，对源自同一患者的 OR 中采集的样本考虑设计效果。 此外，研究人员将探索与诊断测试与参考（“金”）标准一致和不一致相关的潜在因素。 具体来说，诊断与参考（“金”）标准一致的患者特征将与结果不一致的患者进行比较。 这种类型的分析将指出不应使用测试的人群（如果有的话）。 比较将使用标准统计方法进行，即 分类变量的卡方或 Fisher 精确检验和连续参数的 t 检验、方差分析或非参数替代检验。 置信区间将酌情调整为聚类观察。