Test de thyroglobuline au point de service pour la détection rapide du carcinome thyroïdien différencié métastatique

Méthodes et matériaux

Hypothèse : La précision diagnostique du nouveau POC-Tg sera comparable aux méthodes de diagnostic actuelles utilisées pour l'évaluation des LN cervicaux suspectés de métastases DTC.

But

1. Pour valider le POC-Tg dans la clinique FNA : les LN cervicaux indéterminés ou suspects chez les patients présentant un DTC connu ou suspecté seront évalués à l'aide du nouveau POC-Tg et de l'évaluation formelle (immunodosage formel pour la Tg et la cytologie).
2. Pour valider le POC-Tg en salle d'opération : les LN cervicaux indéterminés ou suspects chez les patients opérés pour DTC seront évalués à l'aide du nouveau POC-Tg et de l'évaluation formelle (coupe congelée et/ou histologie finale dans l'établissement pathologique).

Importance : Un POC-Tg précis peut modifier les approches actuelles de diagnostic et de traitement des patients chez qui on soupçonne un DTC métastatique et améliorer la prise en charge des patients.

Étudier le design:

Les enquêteurs mèneront une étude multicentrique. Toutes les données codées seront gérées de manière centralisée, à l'aide d'un formulaire de rapport de cas électronique, par le centre de recherche clinique du Soroka University Medical Center (SUMC). Toutes les données pour les évaluations de sensibilité et de spécificité du nouveau POC-Tg et les méthodes de diagnostic actuelles des métastases LN cervicales DTC seront analysées rétrospectivement par rapport à l'étalon de référence («or») (voir ci-dessous). Les décisions cliniques seront prises conformément aux directives actuelles et aux approches acceptées pour l'évaluation des LN cervicaux suspectés de métastases DTC (dans la clinique FNA, la combinaison de FNAC et FNA-Tg ; et dans la salle d'opération, section congelée et/ou histologie finale).

Protocole d'étude détaillé

1. Le bras clinique FNA :

   Tous les patients recrutés subiront un examen américain du cou à l'aide d'un scanner américain avec un transducteur à réseau phasé linéaire de 12,5 MHz. La FNA guidée par échographie d'un LN suspect ou indéterminé sera réalisée par un médecin expérimenté (un endocrinologue, un oto-rhino-laryngologiste ou un radiologue), selon les indications cliniques. Le LN sera classé comme suspect si l'une des caractéristiques d'imagerie suivantes est présente : calcification, changement kystique, hyper-échogénicité ou augmentation de la vascularisation périphérique ou diffuse sur l'imagerie Doppler couleur. Le LN sera classé comme suspect indéterminé lorsqu'aucun élément d'imagerie clair, bénin ou suspect n'est trouvé (ni hile échogène, ni vascularisation hilaire en l'absence de résultats suspects). La procédure FNA sera réalisée sous la direction des États-Unis avec la technique de la main libre à l'aide d'une aiguille de calibre 22 à 25 connectée à une seringue de 3 à 10 ml, comme cela est couramment effectué dans chaque centre médical. Si techniquement et cliniquement possible, chaque LN sera échantillonné deux fois : un passage pour la cytologie et un passage pour le lavage FNA-Tg.

   FNA pour la cytologie (FNAC) - Les échantillons de FNAC seront préparés à partir de frottis directs et/ou de cytologie en milieu liquide, comme cela est régulièrement effectué dans chaque centre médical. Dans la clinique FNA du SUMC, les échantillons seront étalés sur des lames et immédiatement fixés dans de l'éthanol à 95 % en utilisant la méthode de frottis direct. Avec la méthode de cytologie en milieu liquide, les échantillons seront préparés à l'aide du ThinPrep PreservCyt® (Hologic Ins., Marlborough, MA, USA). Les résultats cytologiques seront interprétés par des cytopathologistes spécialisés en cytologie thyroïdienne. Les résultats de cytologie obtenus à partir du LN d'intérêt seront classés comme : malins, bénins ou indéterminés.

   FNA-Tg et POC-Tg - Une fois l'aiguille localisée à l'intérieur du LN d'intérêt, une pression négative sera produite par la poignée de la seringue, tout en effectuant un mouvement d'intérieur vers l'extérieur et de rotation, jusqu'à ce qu'un matériau sanglant soit visible à l'extrémité proximale de l'aiguille. Par la suite, 100 µL de solution saline à 0,9 % (p/v) seront aspirés via l'aiguille dans la seringue qui contiendra 100 µL d'aspiration légèrement sanglante du LN d'intérêt. L'aspiration sera ensuite transférée dans un tube Eppendorf à travers la même aiguille qui a été utilisée pour la procédure FNA. À ce moment, le sac de produit du kit POC-Tg sera ouvert. À l'aide d'une pipette jetable, 40 µL seront aspirés du tube Eppendorf et versés au milieu du puits d'échantillon du kit POC-Tg. Deux gouttes de tampon seront ensuite distribuées au milieu du puits d'échantillon. Les résultats du POC-Tg seront obtenus et documentés après 10 minutes. Pour comparer la précision du kit POC-Tg à l'immunoessai formel de Tg utilisé dans chaque établissement, une solution saline à 0,9 % sera ajoutée à l'aspiration qui sera laissée dans le tube Eppendorf jusqu'à un volume final de 0,6 mL, puis transférée dans un tube contenant du gel et envoyé au laboratoire clinique qui effectue la mesure de la Tg.

   Standard de référence ("or") - Les LN seront finalement diagnostiqués comme métastatiques s'ils présentent une cytologie FNA maligne (Bethesda 6) ou répondent à au moins l'un des critères suivants : (i) confirmation de la malignité sur la base de l'échantillon chirurgical (histologie), ( ii) répétition ultérieure d'une FNA ou d'une biopsie à l'aiguille centrale rapportant Bethesda 6 ou DTC, respectivement, ou (iii) suivi avec imagerie après un an montrant des caractéristiques américaines claires de métastases. Un LN avec une cytologie FNA bénigne ou indéterminée sans maladie métastatique selon les mêmes critères sera finalement diagnostiqué comme bénin.

   Évaluation de routine en laboratoire - Les analytes tels que la Tg plasmatique, les anticorps anti-Tg, l'anti-thyroïde-peroxydase, la TSH, la T4 libre et la T3 libre seront effectués dans le cadre de l'évaluation de routine des patients atteints d'une maladie thyroïdienne suspectée ou connue.

   Données requises (données à saisir) :

   • Données techniques (par centre) : société des États-Unis utilisée dans chaque établissement, type d'immunodosage FNA-Tg (type, société, limite de détection, précision rapportée), évaluation cytologique utilisée (type et société).
   • Données démographiques et cliniques : Date de naissance, date de l'intervention index, âge (années) au moment de l'intervention index, diagnostic antérieur de thyroïdite de Hashimoto (code ICD9 2452), diagnostic antérieur de maladie de Grave (code ICD9 2420), traité avec de la lévothyroxine ou un médicament antithyroïdien, chirurgie thyroïdienne antérieure (non, lobectomie [gauche/droite], thyroïdectomie subtotale, thyroïdectomie complète), dissection cervicale antérieure (centrale [non, droite, gauche], niveau latéral 2-4 [non, droite, gauche], niveau latéral 5 [non, droite, gauche]).
   • Données de laboratoire avant la procédure d'index (chacune sera rapportée avec les unités utilisées par le laboratoire où elle a été réalisée, et comme X limite supérieure de la norme) : TSH, Tg, anticorps anti-Tg-, T4 libre, T3 libre, anti- peroxydase thyroïdienne.
   • En ce qui concerne les découvertes américaines de la glande thyroïde, les informations suivantes seront accessibles pour le nodule le plus suspect : points TIRADS, classe TIRADS, classe de l'American Thyroid Association, trois dimensions et volume.
   • Résultats échographiques du LN à partir duquel la procédure est effectuée (oui/non pour chacun) : hile échogène, vascularisation hilaire, calcification, changement kystique, hyper-échogénicité, augmentation de la vascularisation périphérique ou diffuse sur l'imagerie Doppler couleur, interprétation finale (indéterminé/suspect ).
   • Rapport cytologique du nodule thyroïdien le plus suspect/pertinent : score du système Bethesda.
   • Résultats cytologiques du LN à partir duquel la procédure est effectuée : classés comme bénins, indéterminés ou malins.
   • Unités FNA-Tg telles que rapportées par le laboratoire institutionnel, et X limite supérieure de la norme.
   • POC-Tg- positif ou négatif.
   • Histologie finale
2. Le bras OU :

Chirurgie de la thyroïde / du cou et FNA ex vivo - Tous les patients recrutés seront opérés, selon les indications cliniques, soit dans le cadre du traitement primaire du DTC, soit du DTC persistant ou récurrent. Les chirurgies de dissection de la thyroïde et du cou seront dirigées par des oto-rhino-laryngologistes ou des chirurgiens endocriniens expérimentés. Chaque fois qu'un LN indéterminé ou suspect est trouvé et qu'il est estimé qu'un rapport de section gelée du LN peut modifier l'étendue de la chirurgie, le LN sera disséqué et évalué à la fois par la section gelée d'évaluation formelle et le POC-Tg. Après la dissection du LN, l'ex-vivo FNA-Tg et POC-Tg seront menées comme indiqué ci-dessus (sous la section « FNA-Tg et POC-Tg »).

Section congelée - Le spécimen pertinent pour la section congelée sera disséqué, traité et envoyé à une évaluation pathologique comme cliniquement indiqué et effectué de manière routinière dans chaque centre médical. Toutes les décisions cliniques pendant la chirurgie seront prises en fonction des résultats de la section congelée ou du jugement clinique. Les résultats histologiques de l'analyse de coupe congelée, obtenus à partir du LN d'intérêt, seront classés comme : malins, bénins ou indéterminés/non concluants.

Standard de référence ("or") - LN sera finalement diagnostiqué comme bénin ou malin (métastase DTC) selon le rapport histologique final.

Données requises:

• Données techniques (par centre) : équipement de la section congelée, type d'immunodosage FNA-Tg (type, entreprise, limite de détection, précision rapportée).
• Données démographiques et cliniques : Date de naissance, date de l'intervention index, âge (années) au moment de l'intervention index, diagnostic antérieur de thyroïdite de Hashimoto (code ICD9 2452), diagnostic antérieur de maladie de Grave (code ICD9 2420), traité avec de la lévothyroxine ou un médicament antithyroïdien, chirurgie thyroïdienne antérieure (non, lobectomie [gauche/droite], thyroïdectomie subtotale, thyroïdectomie complète), dissection cervicale antérieure (centrale [non, droite, gauche], niveau latéral 2-4 [non, droite, gauche], niveau latéral 5 [non, droite, gauche]).
• Données de laboratoire avant la procédure d'index (chacune sera rapportée avec les unités utilisées par le laboratoire où elle a été réalisée, et comme X limite supérieure de la norme) : TSH, Tg, anticorps anti-Tg-, T4 libre, T3 libre, anti- peroxydase thyroïdienne.
• Rapport cytologique du nodule thyroïdien le plus suspect/pertinent : système Bethesda.
• Résultats cytologiques du LN pertinent : classés comme bénins, indéterminés ou malins.
• L'opération prévue : lobectomie [gauche/droite], thyroïdectomie subtotale, thyroïdectomie complète, curage du cou (central [non, droite, gauche], niveau latéral 2-4 [non, droite, gauche], niveau latéral 5 [non, droite gauche]).
• Unités FNA-Tg telles que rapportées par le laboratoire institutionnel, et X limite supérieure de la norme.
• POC-Tg- positif ou négatif.
• Le rapport de section congelée : maligne, bénigne ou indéterminée/non concluante.
• Temps global nécessaire pour l'évaluation de la section congelée - de la dissection au rapport (minutes).
• L'opération qui a été exécutée : telle que planifiée/prolongée (précisez).
• Histologie finale

Analyses statistiques:

Les estimations de sensibilité et de spécificité seront calculées pour les échantillons positifs et négatifs, respectivement, tandis que leur statut sera défini à l'aide de l'étalon de référence ("or") (procédure de diagnostic en fonction des résultats cytologiques et histologiques, et d'autres informations cliniques). Pour répondre aux principaux objectifs de l'étude, l'intervalle de confiance à 95 % sera construit autour de chacun des paramètres de validation. Un effet de plan sera considéré pour les échantillons prélevés en salle d'opération provenant du même patient, en utilisant un estimateur sandwich de l'erreur type. En outre, les chercheurs exploreront les facteurs potentiels associés à la concordance et à la non-conformité du test de diagnostic avec l'étalon de référence (« or »). Plus précisément, les caractéristiques des patients dont le diagnostic correspondait à l'étalon de référence ("or") seront comparées à celles dont les résultats sont discordants. Ce type d'analyse indiquera les populations, le cas échéant, pour lesquelles le test ne doit pas être utilisé. Les comparaisons seront effectuées à l'aide d'une méthodologie statistique standard, c'est-à-dire Chi-Square ou test exact de Fisher pour les variables catégorielles et test t, ANOVA ou tests alternatifs non paramétriques pour les paramètres continus. Les intervalles de confiance seront ajustés aux observations groupées, le cas échéant.