Imusolmukekudoksen immunologinen analyysi intralymfaattisen immunoterapian jälkeen: mahdollinen tapauskontrollitutkimus (ILIT-FNA)

Tämä on prospektiivinen, vertaileva, kliininen avoin pilottitutkimus. Potilaista, joilla on ruohon siitepölyallergia ja jotka käyvät läpi kausia edeltävän SCIT-ohjelman Polvac™ Grass+RyeSCIT:llä USZ-allergiayksikössä, 30 potilasta rekrytoidaan tutkimukseen.

Neljästä kuuteen viikkoa SCIT-hoidon päättymisen jälkeen (maksimi ylläpitoannoksella) potilaat satunnaistetaan yhteen kahdesta hoitoryhmästä ja saavat yhden ylimääräisen allergeeniruiskeen. Molemmat hoitoryhmät saavat samaa lääkettä, mutta eri annoksilla ja antoreitillä. Viidelletoista potilaalle annetaan toinen ihonalainen injektio, jossa on 0,5 ml (2000 U) Polvac Grass+Rye. Muut 15 potilasta saavat intralymfaattisen 0,1 ml:n Polvac Grass+Rye -injektion, jossa on 400 U allergeenia. Sekä SCIT- että ILIT-injektiot suoritetaan ultraääniohjauksella, jotta varmistetaan injektio imusolmukkeeseen (ILIT) tai 1 cm imusolmukkeen viereen (SCIT).

Imusolmukekudoksen FNA suoritetaan 2, 6 tai 24 tunnin kuluttua allergeeniruiskeesta. Samanaikaisesti kontralateraalisten imusolmukkeiden FNA suoritetaan lähtötilanteena. Laskimoverinäytteet otetaan kaikilla käynneillä: lähtötilanteessa sekä 2, 6 tai 24 tunnin kuluttua, 7 päivän kuluttua ja 28 päivän kuluttua allergeenista ILIT tai SCIT. FNA suoritetaan ultraääniohjauksella.

Lääkkeiden valmistus:

1 ml:n lääkepulloa (4000 U/ml) ravistellaan 10 sekuntia. Injektiopullon pää desinfioidaan ja 0,5 ml (SCIT) tai 0,1 ml (ILIT) lääkettä vedetään 1 ml:n ruiskuun, jossa on 23G-injektioneula, jotta ruiskuun tai neulaan ei jää ilmaa. Lääke tulee käyttää viimeistään 4 tunnin kuluttua valmistuksesta. Annoksesta tehdään kopio, jos on määrä antaa useampi kuin yksi injektio. Loput lääkkeet heitetään pois.

Hieno neulan imu (FNA):

FNA on minimaalisesti invasiivinen ja sen suorittaa kokenut tutkija. Imusolmukkeen yläpuolella oleva iho desinfioidaan ja 5 ml:n ruiskuun kiinnitetty, FNA-pistooliin kiinnitetty steriili neula (23-25g) työnnetään imusolmukkeen aivokuoreen väridoppler-ultraääniohjauksella välttäen tärkeitä kudoksia. ja elimet, kuten suuret verisuonet ja hermot. Ruiskun mäntä vedetään tiivisteen säätämiseksi 2 ml:n asteikolle, jotta ruiskussa pysyy alipaine. Kun ruiskua on käännetty ja aspiroitu 5 kertaa, neulaa käännetään imemään viuhkamaisesti imusolmukkeen eri liikeradalla. Neula vedetään pois, kun n. Ruiskussa on 0,1 ml kudosta. Pistokohta peitetään steriilillä sideharsolla ja painetaan sopivalla voimalla 10 minuutin ajan. Potilaita tarkkaillaan 30 minuutin ajan ja vapautetaan, kun ei ole haittavaikutuksia. FNA-näyte huuhdellaan dimetyylisulfoksidia (DMSO) sisältävällä elävien solujen jäädytyselatusaineella (10 % DMSO:ta ja 90 % naudan sikiön seerumia (FBS)), laitetaan kryoputkeen ja pakastetaan -80 °C:ssa.

Veren kerääminen ja solujen ja veriseerumin säilytys:

Laskimoverenotto suoritetaan juuri ennen SCIT/ILIT:tä, 2, 6 tai 24 tuntia SCIT/ILIT:n jälkeen ja 7 ja 28 SCIT/SLIT:n jälkeen. Joka kerta kerätään 25 ml laskimoverta PBMC:iden valmistusta varten ja 5 ml verta seerumin valmistusta varten. Molemmat näytteet käsitellään rutiininomaisin talon menetelmin 2 tunnin sisällä seerumin ja solujen valmistamiseksi. Tuotettu seerumi jaetaan 1 ml:n näytteisiin ja pakastetaan -20 °C:seen myöhempää analyysiä varten. Kokoveri sentrifugoidaan Ficollilla ja PBMC:t eristetään ja pestään PBS:ssä ennen kuin ne uudelleensuspendoidaan DMSO:ta sisältävään elävien solujen jäädytysalustaan. 1 ml:n alikvootit soluista jäädytetään hitaasti kryoputkissa ja säilytetään lopuksi -80 °C:ssa ennen lisäanalyysiä.