Immunologisk analyse af lymfeknudevæv efter intralymfatisk immunterapi: et prospektivt case-kontrolstudie (ILIT-FNA)

Dette er et prospektivt, sammenlignende, klinisk åbent pilotstudie. Fra patienter med græspollenallergi, som gennemgår en præ-sæsonbestemt SCIT-ordning med Polvac™ Grass+RyeSCIT på USZ Allergy Unit, vil 30 patienter blive rekrutteret til undersøgelsen.

Fire til seks uger efter afslutning af SCIT-behandling (ved maksimal vedligeholdelsesdosis) vil patienterne blive randomiseret til en ud af to behandlingsgrupper og modtage en ekstra allergeninjektion. Begge behandlingsgrupper modtager det samme lægemiddel, men med forskellige doser og administrationsveje. Femten patienter vil blive allokeret til at modtage endnu en subkutan injektion med 0,5 ml (2000 E) Polvac Grass+Rye. De øvrige 15 patienter vil blive allokeret til at modtage en intralymfatisk injektion af 0,1 ml Polvac Grass+Rye med 400 U allergen. Både SCIT- og ILIT-injektioner udføres ved hjælp af ultralydsvejledning for at sikre injektion i lymfeknuden (ILIT) eller 1 cm ved siden af ​​lymfeknuden (SCIT).

FNA af lymfeknudevæv vil blive udført 2, 6 eller 24 timer efter allergeninjektion. Samtidig vil FNA af kontralaterale lymfeknuder blive udført som baseline. Der vil blive udtaget venøst ​​blod ved alle besøg: ved baseline såvel som efter 2, 6 eller 24 timer, efter 7 dage og efter 28 dage med allergenet ILIT eller SCIT. FNA udføres ved ultralydsvejledning.

Præparat af lægemiddel:

1 ml medicinhætteglasset (4000 U/ml) rystes i 10 sekunder. Hovedet af hætteglasset desinficeres, og 0,5 ml (til SCIT) eller 0,1 ml (til ILIT) af medicinen trækkes ind i en 1 ml sprøjte med 23G injektionskanyle, der sikrer, at der ikke er luft i sprøjten eller kanylen. Medicinen anvendes senest 4 timer efter tilberedning. Replika af dosis laves, hvis mere end én injektion skal udføres. Den resterende medicin kasseres.

Finnålsaspiration (FNA):

FNA er minimalt invasiv og udføres af en erfaren efterforsker. Huden over lymfeknuden vil blive desinficeret, og en steril nål (23-25g), fastgjort til 5 ml sprøjten, fikseret i en FNA-pistol, vil blive indsat i lymfeknudebarken under farve-Doppler ultralydsvejledning, mens vigtige væv undgås. og organer, såsom store blodkar og nerver. Sprøjtestemplet trækkes for at indstille forseglingen til en 2 ml skala for at opretholde undertryk i sprøjten. Efter at have roteret og aspireret sprøjten 5 gange, roteres nålen for at aspirere på en vifteformet måde ved forskellige baner i lymfeknuden. Nålen trækkes tilbage, når ca. 0,1 ml væv er til stede i sprøjten. Indstiksstedet dækkes med steril gaze, og der påføres tryk med passende kraft i 10 min. Patienterne observeres i 30 minutters observation og frigives, når der ikke er nogen bivirkning. FNA-prøven skylles med dimethylsulfoxid (DMSO)-holdigt levende cellefrysemedium (10 % DMSO og 90 % føtalt bovint serum (FBS)), anbringes i et kryorør og fryses i -80°C.

Blodopsamling og konservering af celler og blodserum:

Venøs blodopsamling udføres lige før SCIT/ILIT, 2, 6 eller 24 timer efter SCIT/ILIT og 7 og 28 efter SCIT/SLIT. Hver gang opsamles 25 ml veneblod til fremstilling af PBMC'er, og 5 ml blod opsamles til fremstilling af serum. Begge prøver behandles ved rutinemæssige interne metoder inden for 2 timer til klargøring af serum og celler. Det producerede serum opdeles i 1 ml prøver og fryses ved -20 °C til senere analyse. Fuldblod centrifugeres på Ficoll, og PBMC'erne isoleres og vaskes i PBS før de resuspenderes i DMSO-holdigt levende cellefrysemedium. 1 ml alikvoter af cellerne fryses langsomt i kryorør og opbevares til sidst ved -80 °C før yderligere analyse.