A nyirokcsomószövetek immunológiai elemzése intralimfatikus immunterápia után: Prospektív eset-kontroll vizsgálat (ILIT-FNA)

Ez egy prospektív, összehasonlító, klinikai nyílt kísérleti tanulmány. Azokból a fűpollenallergiás betegekből, akik az USZ Allergia Osztályán Polvac™ Grass+RyeSCIT-tel előszezonális SCIT-kezelésen estek át, 30 beteget vesznek fel a vizsgálatba.

Négy-hat héttel a SCIT-kezelés befejezése után (maximális fenntartó dózis mellett) a betegeket randomizálják a két kezelési csoport egyikébe, és további egy allergén injekciót kapnak. Mindkét kezelési csoport ugyanazt a gyógyszert kapja, de eltérő dózisban és beadási módban. Tizenöt beteget osztanak ki arra, hogy újabb szubkután injekciót kapjanak 0,5 ml (2000 E) Polvac Grass+Rye oldattal. A többi 15 beteg 0,1 ml 400 U allergént tartalmazó Polvac Grass+Rye intralymphaticus injekciót kap. Mind a SCIT, mind az ILIT injekciókat ultrahang-irányítással hajtják végre, hogy biztosítsák az injekciót a nyirokcsomóba (ILIT) vagy a nyirokcsomó mellett 1 cm-re (SCIT).

A nyirokcsomószövet FNA-ját 2, 6 vagy 24 órával az allergén injekció után kell elvégezni. Ezzel egyidejűleg az ellenoldali nyirokcsomók FNA-ját is elvégzik alapvonalként. Vénás vérmintát vesznek minden vizit alkalmával: a kiinduláskor, valamint 2, 6 vagy 24 óra elteltével, 7 nap után és 28 nap után az ILIT vagy SCIT allergénnel. Az FNA-t ultrahang-irányítással végzik.

Gyógyszer előkészítés:

Az 1 ml-es gyógyszeres injekciós üveget (4000 E/ml) 10 másodpercig rázza. Az injekciós üveg fejét fertőtlenítjük, és 0,5 ml (SCIT esetén) vagy 0,1 ml (ILIT esetén) gyógyszert szívunk egy 1 ml-es fecskendőbe 23G injekciós tűvel, biztosítva, hogy a fecskendőben vagy a tűben ne legyen levegő. A gyógyszert legkésőbb az elkészítést követő 4 órán belül fel kell használni. Ha egynél több injekciót kell végrehajtani, az adag másolatát készítik. A fennmaradó gyógyszert el kell dobni.

Finom tű szívás (FNA):

Az FNA minimálisan invazív, és tapasztalt kutató végzi. A nyirokcsomó feletti bőrt fertőtlenítjük, majd az 5 ml-es fecskendőhöz rögzített steril tűt (23-25g) FNA pisztolyban rögzítve szúrunk be a nyirokcsomók kéregébe színes Doppler ultrahang irányítás mellett, elkerülve a fontos szöveteket. és szervek, például nagy erek és idegek. A fecskendő dugattyúját ki kell húzni, hogy a tömítés 2 ml-es skálára álljon, hogy fenntartsa a fecskendőben a negatív nyomást. A fecskendő 5-szöri elforgatása és leszívása után a tűt elforgatják, hogy a nyirokcsomó különböző pályáinál legyező alakú módon szívjon fel. A tűt kihúzzuk, amikor kb. 0,1 ml szövet van a fecskendőben. A szúrás helyét steril gézzel fedjük le, és 10 percig megfelelő erővel nyomást gyakorolunk rá. A betegeket 30 percig megfigyelik, és elengedik, ha nincs mellékhatás. Az FNA-mintát dimetil-szulfoxidot (DMSO) tartalmazó élősejt-fagyasztó tápközeggel (10% DMSO és 90% magzati szarvasmarha-szérum (FBS)) öblítik, kriocsőbe helyezik és -80 °C-on lefagyasztják.

Vérvétel és sejtek és vérszérum megőrzése:

A vénás vérvétel közvetlenül a SCIT/ILIT előtt, a SCIT/ILIT után 2, 6 vagy 24 órával, valamint a SCIT/SLIT után 7 és 28 órával történik. Minden alkalommal 25 ml vénás vért veszünk PBMC-k készítéséhez, és 5 ml vért szérumkészítéshez. Mindkét mintát rutin házon belüli módszerekkel dolgozzák fel 2 órán belül a szérum és a sejtek elkészítéséhez. Az előállított szérumot 1 ml-es mintákba osztják, és -20 °C-on lefagyasztják későbbi elemzés céljából. A teljes vért Ficoll-on centrifugáljuk, és a PBMC-ket izoláljuk és PBS-ben mossuk, majd DMSO-t tartalmazó élő sejt fagyasztó tápközegben újra szuszpendáljuk. A sejtekből 1 ml-es alikvotokat lassan lefagyasztunk kriocsövekben, és végül -80 °C-on tároljuk a további elemzés előtt.