Immunologische analyse van lymfeklierweefsel na intralymfatische immunotherapie: een prospectieve case-control-studie (ILIT-FNA)

Dit is een prospectieve, vergelijkende, klinische open-label pilotstudie. Van patiënten met graspollenallergie die een pre-seizoens SCIT-schema ondergaan met Polvac™ Grass+RyeSCIT bij de USZ Allergy Unit, zullen 30 patiënten worden gerekruteerd voor de studie.

Vier tot zes weken na het einde van de SCIT-behandeling (bij maximale onderhoudsdosis) worden de patiënten gerandomiseerd naar één van de twee behandelingsgroepen en krijgen ze één extra allergeeninjectie. Beide behandelingsgroepen krijgen hetzelfde medicijn, maar in verschillende doseringen en toedieningswegen. Vijftien patiënten zullen worden toegewezen aan een andere subcutane injectie met 0,5 ml (2000 E) Polvac Grass+Rye. De andere 15 patiënten krijgen een intralymfatische injectie van 0,1 ml Polvac Grass+Rye met 400 E allergeen. Zowel SCIT- als ILIT-injecties worden uitgevoerd door middel van echografie om injectie in de lymfeklier (ILIT) of 1 cm naast de lymfeklier (SCIT) te verzekeren.

De FNA van lymfeklierweefsel wordt 2, 6 of 24 uur na de allergeeninjectie uitgevoerd. Tegelijkertijd wordt een FNA van een contralaterale lymfeklier uitgevoerd als basislijn. Bij alle bezoeken wordt veneus bloed afgenomen: zowel bij baseline als na 2, 6 of 24 uur, na 7 dagen en na 28 dagen van het allergeen ILIT of SCIT. De FNA wordt uitgevoerd door middel van echo-begeleiding.

Geneesmiddelbereiding:

De medicatieflacon van 1 ml (4000 E/ml) wordt gedurende 10 seconden geschud. De kop van de injectieflacon wordt gedesinfecteerd en 0,5 ml (voor SCIT) of 0,1 ml (voor ILIT) van het medicijn wordt opgezogen in een injectiespuit van 1 ml met een 23G-injectienaald, zodat er geen lucht in de spuit of naald komt. Het medicijn wordt uiterlijk 4 uur na de bereiding gebruikt. Er wordt een replica van de dosis gemaakt als er meer dan één injectie moet worden toegediend. De resterende medicatie wordt weggegooid.

Fijne naaldaspiratie (FNA):

De FNA is minimaal invasief en wordt uitgevoerd door een ervaren onderzoeker. De huid boven de lymfeklier wordt gedesinfecteerd en een steriele naald (23-25 ​​g), bevestigd aan de 5 ml-spuit, gefixeerd in een FNA-pistool, wordt in de lymfekliercortex ingebracht onder kleurendoppler-echografie, waarbij belangrijke weefsels worden vermeden en organen, zoals grote bloedvaten en zenuwen. De zuiger van de spuit wordt uitgetrokken om de verzegeling in te stellen op een schaal van 2 ml om een ​​negatieve druk in de spuit te behouden. Na 5 keer draaien en opzuigen van de injectiespuit, wordt de naald geroteerd om op een waaiervormige manier op verschillende trajecten in de lymfeklier te aspireren. De naald wordt teruggetrokken wanneer ca. Er zit 0,1 ml weefsel in de spuit. De prikplaats is bedekt met steriel gaas en er wordt gedurende 10 minuten met de juiste kracht druk uitgeoefend. Patiënten worden gedurende 30 minuten geobserveerd en vrijgelaten wanneer er geen bijwerking optreedt. Het FNA-monster wordt gespoeld met dimethylsulfoxide (DMSO)-bevattend bevriezingsmedium voor levende cellen (10% DMSO en 90% foetaal runderserum (FBS)), in een cryobuis gedaan en ingevroren bij -80°C.

Bloedafname en conservering van cellen en bloedserum:

Veneuze bloedafname wordt uitgevoerd vlak voor SCIT/ILIT, 2, 6 of 24 uur na SCIT/ILIT en 7 en 28 uur na SCIT/SLIT. Elke keer wordt 25 ml veneus bloed afgenomen voor bereiding van PBMC's en 5 ml bloed voor bereiding van serum. Beide monsters worden binnen 2 uur volgens routinematige interne methoden verwerkt voor de bereiding van serum en cellen. Het geproduceerde serum wordt verdeeld in monsters van 1 ml en ingevroren bij -20 °C voor latere analyse. Volbloed wordt gecentrifugeerd op Ficoll en de PBMC's worden geïsoleerd en gewassen in PBS voordat ze opnieuw worden gesuspendeerd in DMSO-bevattend vriesmedium met levende cellen. Porties van 1 ml van de cellen worden langzaam ingevroren in cryobuisjes en uiteindelijk bewaard bij -80 °C voor verdere analyse.