Analyse immunologique du tissu ganglionnaire après immunothérapie intralymphatique : étude prospective cas-témoins (ILIT-FNA)

Il s'agit d'une étude pilote prospective, comparative et clinique ouverte. Parmi les patients allergiques au pollen de graminées qui subissent un schéma SCIT pré-saisonnier avec Polvac™ Grass+RyeSCIT à l'USZ Allergy Unit, 30 patients seront recrutés pour l'étude.

Quatre à six semaines après la fin du traitement SCIT (à la dose d'entretien maximale), les patients seront randomisés dans un des deux groupes de traitement et recevront une injection d'allergène supplémentaire. Les deux groupes de traitement reçoivent le même médicament, mais à des doses et des voies d'administration différentes. Quinze patients recevront une autre injection sous-cutanée de 0,5 ml (2000 U) de Polvac Grass+Rye. Les 15 autres patients recevront une injection intralymphatique de 0,1 ml de Polvac Grass+Rye avec 400 U d'allergène. Les injections SCIT et ILIT sont réalisées sous guidage échographique afin d'assurer l'injection dans le ganglion lymphatique (ILIT) ou à 1 cm à côté du ganglion lymphatique (SCIT).

La FNA du tissu ganglionnaire sera réalisée 2, 6 ou 24 heures après l'injection de l'allergène. Dans le même temps, la FNA d'un ganglion lymphatique controlatéral sera réalisée comme ligne de base. Le sang veineux sera prélevé à toutes les visites : au départ ainsi qu'après 2, 6 ou 24 heures, après 7 jours et après 28 jours de l'allergène ILIT ou SCIT. La FNA est réalisée sous guidage échographique.

Préparation du médicament :

Le flacon de médicament de 1 ml (4000 U/ml) est agité pendant 10 secondes. La tête du flacon est désinfectée et 0,5 ml (pour SCIT) ou 0,1 ml (pour ILIT) du médicament est aspiré dans une seringue de 1 ml avec une aiguille hypodermique 23G assurant l'absence d'air dans la seringue ou l'aiguille. Le médicament est utilisé au plus tard 4 heures après la préparation. Des répliques de la dose sont faites si plus d'une injection doit être effectuée. Le médicament restant est jeté.

Ponction à l'aiguille fine (FNA) :

La FNA est peu invasive et réalisée par un enquêteur expérimenté. La peau au-dessus du ganglion lymphatique sera désinfectée et une aiguille stérile (23-25g), attachée à la seringue de 5 ml, fixée dans un pistolet FNA, sera insérée dans le cortex ganglionnaire sous guidage échographique Doppler couleur tout en évitant les tissus importants et les organes, tels que les gros vaisseaux sanguins et les nerfs. Le piston de la seringue est dessiné pour régler le joint à une échelle de 2 ml afin de maintenir une pression négative dans la seringue. Après avoir fait tourner et aspiré la seringue 5 fois, l'aiguille est tournée pour aspirer en forme d'éventail à différentes trajectoires dans le ganglion lymphatique. L'aiguille est retirée lorsque ca. 0,1 ml de tissu est présent dans la seringue. Le site de ponction est recouvert de gaze stérile et une pression est appliquée avec une force appropriée pendant 10 min. Les patients sont observés pendant 30 min d'observation et libérés en l'absence de réaction indésirable. L'échantillon de FNA sera rincé avec un milieu de congélation de cellules vivantes contenant du diméthylsulfoxyde (DMSO) (10 % de DMSO et 90 % de sérum bovin fœtal (FBS)), placé dans un cryotube et congelé à -80 °C.

Prélèvement sanguin et conservation des cellules et du sérum sanguin :

Le prélèvement de sang veineux est effectué juste avant SCIT/ILIT, à 2, 6 ou 24 heures post SCIT/ILIT, et à 7 et 28 post SCIT/SLIT. A chaque fois, 25 ml de sang veineux sont prélevés pour la préparation des PBMC et 5 ml de sang sont prélevés pour la préparation du sérum. Les deux échantillons sont traités par des méthodes internes de routine dans les 2 heures pour la préparation du sérum et des cellules. Le sérum produit est aliquoté dans des échantillons de 1 ml et congelé à - 20 °C pour une analyse ultérieure. Le sang total est centrifugé sur Ficoll et les PBMC sont isolés et lavés dans du PBS avant d'être remis en suspension dans un milieu de congélation de cellules vivantes contenant du DMSO. Des aliquotes de 1 ml des cellules sont congelées lentement dans des cryotubes et finalement stockées à -80 ° C avant une analyse plus approfondie.