リンパ内免疫療法後のリンパ節組織の免疫学的分析:前向き症例対照研究 (ILIT-FNA)

これは前向き、比較、臨床非盲検パイロット研究です。 USZ アレルギー部門で Polvac™ Grass+RyeSCIT による季節前 SCIT 計画を受ける草花粉アレルギーの患者の中から、30 人の患者がこの研究に募集されます。

ＳＣＩＴ治療（最大維持用量）の終了から４〜６週間後、患者は２つの治療群のうちの１つに無作為に割り付けられ、追加のアレルゲン注射が１回行われる。 どちらの治療グループも同じ薬剤を投与されますが、用量と投与経路は異なります。 15 人の患者は、0.5 ml (2000 U) の Polvac Grass+Rye による別の皮下注射を受けるように割り当てられます。 残りの15人の患者は、400Uのアレルゲンを含む0.1mlのPolvac Grass+Ryeのリンパ内注射を受けるように割り当てられる。 SCIT 注射と ILIT 注射は両方とも、リンパ節 (ILIT) またはリンパ節の 1 cm 隣 (SCIT) への注射を確実にするために、超音波ガイドによって実行されます。

リンパ節組織のFNAは、アレルゲン注射の2、6または24時間後に実施されます。 同時に、対側リンパ節の FNA がベースラインとして実行されます。 静脈血はすべての来院時に採取されます：ベースライン時、アレルゲンILITまたはSCITの2、6または24時間後、7日後、および28日後。 FNA は超音波ガイドによって実行されます。

薬剤の調製:

1 ml の薬剤バイアル (4000 U/ml) を 10 秒間振盪します。 バイアルの頭部を消毒し、0.5 ml (SCIT の場合) または 0.1 ml (ILIT の場合) の薬剤を 23G 皮下注射針を備えた 1 ml の注射器に引き込み、注射器または針内に空気がないようにします。 薬は調製後4時間以内に使用してください。 複数回の注射を行う場合には、用量のレプリカが作成されます。 残った薬剤は廃棄されます。

細針吸引 (FNA):

FNA は侵襲性が最小限であり、経験豊富な研究者によって実行されます。 リンパ節上の皮膚を消毒し、FNA ガンに固定された 5 ml 注射器に取り付けられた滅菌針 (23 ～ 25g) が、重要な組織を避けながら、カラードップラー超音波ガイド下でリンパ節皮質に挿入されます。大きな血管や神経などの臓器。 シリンジ内の負圧を維持するために、シリンジ プランジャーを引いてシールを 2 ml スケールに設定します。 シリンジを5回回転させて吸引した後、針を回転させてリンパ節内の異なる軌道で扇形に吸引します。 針は約１０ｃｍの位置で引き抜かれる。シリンジ内には 0.1 ml の組織が入っています。 穿刺部位を滅菌ガーゼで覆い、適切な力で 10 分間圧迫します。 患者は30分間観察され、副作用がなくなったら解放されます。 FNA サンプルは、ジメチルスルホキシド (DMSO) を含む生細胞凍結培地 (10% DMSO および 90% ウシ胎児血清 (FBS)) ですすぎ、クライオチューブに入れて -80°C で凍結します。

採血と細胞および血清の保存:

静脈採血は、ＳＣＩＴ／ＩＬＩＴの直前、ＳＣＩＴ／ＩＬＩＴの２、６または２４時間後、およびＳＣＩＴ／ＳＬＩＴの７および２８時間後に行われる。 毎回、ＰＢＭＣの調製のために２５ｍｌの静脈血が採取され、血清の調製のために５ｍｌの血液が採取される。 両方のサンプルは、血清と細胞の調製のために 2 時間以内に社内の日常的な方法で処理されます。 生成された血清は 1 ml のサンプルに分割され、後の分析のために -20 °C で凍結されます。 全血をFicoll上で遠心分離し、PBMCを単離し、PBSで洗浄した後、DMSOを含む生細胞凍結培地に再懸濁します。細胞の 1 ml アリコートをクライオチューブ中でゆっくり凍結し、最終的にさらなる分析まで -80 °C で保存します。