淋巴内免疫治疗后淋巴结组织的免疫学分析：前瞻性病例对照研究 (ILIT-FNA)

这是一项前瞻性、比较性、临床开放标签试点研究。 从在 USZ 过敏科接受 Polvac™ Grass+RyeSCIT 季节前 SCIT 计划的草花粉过敏患者中，将招募 30 名患者参与该研究。

SCIT 治疗（最大维持剂量）结束后四到六周，患者将被随机分配到两个治疗组中的一组，并接受额外的过敏原注射。 两个治疗组都接受相同的药物，但剂量和给药途径不同。 15 名患者将被分配接受另一次皮下注射 0.5 ml (2000 U) Polvac Grass+Rye。 另外 15 名患者将被分配接受 0.1 ml 含有 400 U 过敏原的 Polvac Grass+Rye 淋巴内注射。 SCIT 和 ILIT 注射均通过超声引导进行，以确保注射到淋巴结 (ILIT) 或淋巴结旁边 1 厘米 (SCIT)。

淋巴结组织的FNA将在注射过敏原后2、6或24小时进行。 同时，将进行对侧淋巴结的 FNA 作为基线。 每次就诊时都会采集静脉血样本：基线时以及过敏原 ILIT 或 SCIT 2、6 或 24 小时后、7 天后和 28 天后。 FNA 通过超声引导进行。

药物制剂：

将 1 ml 药瓶 (4000 U/ml) 摇动 10 秒。 对小瓶的头部进行消毒，并将 0.5 ml（对于 SCIT）或 0.1 ml（对于 ILIT）药物吸入带有 23G 皮下注射针头的 1 ml 注射器中，确保注射器或针头中没有空气。 药物配制后不迟于4小时使用。 如果要进行多次注射，则复制剂量。 剩余的药物被丢弃。

细针穿刺活检 (FNA)：

FNA 是微创手术，由经验丰富的研究者进行。 对淋巴结上方的皮肤进行消毒，并将无菌针头（23-25克）连接到5毫升注射器上，固定在FNA枪中，在彩色多普勒超声引导下插入淋巴结皮质，同时避开重要组织以及器官，例如大血管和神经。 拉动注射器柱塞以将密封设置在 2 ml 刻度，以保持注射器中的负压。 旋转抽吸注射器5次后，旋转针头在淋巴结的不同轨迹上以扇形方式抽吸。 大约时针被撤回。注射器中有 0.1 ml 组织。 穿刺部位用无菌纱布覆盖，适当用力施压10分钟。 观察患者30分钟，无不良反应后出院。 FNA 样品将用含有二甲基亚砜 (DMSO) 的活细胞冷冻培养基（10% DMSO 和 90% 胎牛血清 (FBS)）冲洗，放入冷冻管中并在 -80°C 下冷冻。

细胞和血清的血液采集和保存：

静脉血采集在 SCIT/ILIT 之前、SCIT/ILIT 后 2、6 或 24 小时以及 SCIT/SLIT 后 7 和 28 小时进行。 每次采集25ml静脉血用于制备PBMC，采集5ml血液用于制备血清。 两个样品均在 2 小时内通过常规内部方法处理，以制备血清和细胞。 将产生的血清等分成 1 ml 样品并冷冻在 - 20 °C 下以供后续分析。 全血在 Ficoll 上离心，分离 PBMC，并在 PBS 中洗涤，然后重悬于含有 DMSO 的活细胞冷冻培养基中。将 1 ml 等份细胞缓慢冷冻在冷冻管中，最后在进一步分析之前储存在 -80 °C 下。