림프절내 면역요법 후 림프절 조직의 면역학적 분석: 전향적 증례 대조 연구 (ILIT-FNA)

이것은 전향적, 비교, 임상 오픈 라벨 파일럿 연구입니다. USZ Allergy Unit에서 Polvac™ Grass+RyeSCIT로 계절 전 SCIT 계획을 진행하는 잔디 꽃가루 알레르기가 있는 환자 중에서 30명의 환자가 연구를 위해 모집됩니다.

SCIT 치료 종료 후 4-6주(최대 유지 용량)에 환자는 두 치료 그룹 중 하나로 무작위 배정되고 추가 알레르겐 주사를 한 번 받습니다. 두 치료 그룹 모두 동일한 약물을 투여받았지만 투여량과 투여 경로가 다릅니다. 15명의 환자가 0.5ml(2000U) Polvac Grass+Rye로 또 다른 피하 주사를 받도록 할당됩니다. 다른 15명의 환자는 400U 알레르겐과 함께 0.1ml Polvac Grass+Rye를 림프내 주사하도록 할당됩니다. SCIT 및 ILIT 주사는 모두 림프절(ILIT) 또는 림프절 옆 1cm(SCIT)에 주사할 수 있도록 초음파 유도에 의해 수행됩니다.

림프절 조직의 FNA는 알레르겐 주입 후 2, 6 또는 24시간에 수행됩니다. 동시에 반대측 림프절의 FNA가 기준선으로 수행됩니다. 정맥혈은 모든 방문 시에 샘플링될 것입니다: 베이스라인에서 뿐만 아니라 알레르겐 ILIT 또는 SCIT의 2, 6 또는 24시간 후, 7일 후 및 28일 후. FNA는 초음파 유도에 의해 수행됩니다.

약물 준비:

1ml 약물 바이알(4000U/ml)을 10초 동안 흔듭니다. 바이알의 헤드를 소독하고 약물 0.5ml(SCIT의 경우) 또는 0.1ml(ILIT의 경우)를 23G 피하 바늘이 있는 1ml 주사기로 뽑아 주사기 또는 바늘에 공기가 없도록 합니다. 약물은 준비 후 4시간 이내에 사용됩니다. 1회 이상의 주사가 수행되는 경우 용량의 복제가 이루어집니다. 나머지 약물은 폐기됩니다.

미세 바늘 흡인(FNA):

FNA는 최소 침습적이며 숙련된 조사자가 수행합니다. 림프절 위의 피부를 소독하고 FNA gun에 고정된 5ml 주사기에 부착된 멸균 바늘(23-25g)을 중요한 조직을 피하면서 컬러 도플러 초음파 유도하에 림프절 피질에 삽입합니다. 및 큰 혈관 및 신경과 같은 기관. 주사기 플런저는 주사기의 부압을 유지하기 위해 2ml 눈금으로 밀봉을 설정하도록 당겨집니다. 주사기를 5회 회전 흡인한 후 바늘을 회전시켜 림프절의 서로 다른 궤적에서 부채꼴 방식으로 흡인합니다. 바늘은 ca. 0.1ml 조직이 주사기에 있습니다. 천자 부위를 멸균 거즈로 덮고 적절한 힘으로 10분 동안 압력을 가한다. 환자를 30분 동안 관찰하고 부작용이 없으면 퇴원한다. FNA 샘플은 DMSO(dimethyl sulfoxide) 함유 생세포 동결 배지(10% DMSO 및 90% 태아 소 혈청(FBS))로 헹구고, 저온 튜브에 넣고 -80°C에서 동결합니다.

세포 및 혈청의 채혈 및 보존:

정맥 채혈은 SCIT/ILIT 직전, SCIT/ILIT 후 2, 6 또는 24시간, SCIT/SLIT 후 7 및 28시에 수행됩니다. 매번 PBMC 준비를 위해 25ml의 정맥혈을 수집하고 혈청 준비를 위해 5ml의 혈액을 수집합니다. 두 샘플 모두 혈청 및 세포 준비를 위해 2시간 이내에 일상적인 사내 방법으로 처리됩니다. 생성된 혈청은 1ml 샘플에 분주되고 추후 분석을 위해 -20°C에서 동결됩니다. 전혈을 Ficoll에서 원심분리하고 PBMC를 분리하고 PBS에서 세척한 후 DMSO 함유 생세포 동결 배지에 재현탁합니다. 세포의 1ml 분취량은 극저온 튜브에서 천천히 동결되고 최종적으로 추가 분석 전에 -80°C에서 저장됩니다.