Immunologische Analyse von Lymphknotengewebe nach intralymphatischer Immuntherapie: Eine prospektive Fallkontrollstudie (ILIT-FNA)

Dies ist eine prospektive, vergleichende, klinische Open-Label-Pilotstudie. Von Patienten mit Gräserpollenallergie, die sich an der USZ-Allergieeinheit einem vorsaisonalen SCIT-Programm mit Polvac™ Grass+RyeSCIT unterziehen, werden 30 Patienten für die Studie rekrutiert.

Vier bis sechs Wochen nach Ende der SCIT-Behandlung (bei maximaler Erhaltungsdosis) werden die Patienten randomisiert einer von zwei Behandlungsgruppen zugeteilt und erhalten eine zusätzliche Allergeninjektion. Beide Behandlungsgruppen erhalten das gleiche Medikament, jedoch in unterschiedlichen Dosierungen und Verabreichungswegen. Fünfzehn Patienten erhalten eine weitere subkutane Injektion mit 0,5 ml (2000 U) Polvac Grass+Rye. Die anderen 15 Patienten erhalten eine intralymphatische Injektion von 0,1 ml Polvac Grass+Rye mit 400 U Allergen. Sowohl SCIT- als auch ILIT-Injektionen werden unter Ultraschallführung durchgeführt, um eine Injektion in den Lymphknoten (ILIT) oder 1 cm neben dem Lymphknoten (SCIT) sicherzustellen.

Die FNA des Lymphknotengewebes wird 2, 6 oder 24 Stunden nach der Allergeninjektion durchgeführt. Gleichzeitig wird als Basislinie eine FNA eines kontralateralen Lymphknotens durchgeführt. Venöses Blut wird bei allen Besuchen entnommen: zu Studienbeginn sowie nach 2, 6 oder 24 Stunden, nach 7 Tagen und nach 28 Tagen des Allergens ILIT oder SCIT. Die FNA wird unter Ultraschallführung durchgeführt.

Arzneimittelzubereitung:

Das 1-ml-Medikamentenfläschchen (4000 U/ml) wird 10 Sekunden lang geschüttelt. Der Kopf der Durchstechflasche wird desinfiziert und 0,5 ml (für SCIT) oder 0,1 ml (für ILIT) des Medikaments werden in eine 1-ml-Spritze mit einer 23G-Injektionsnadel aufgezogen, um sicherzustellen, dass sich keine Luft in der Spritze oder Nadel befindet. Das Medikament wird spätestens 4 Stunden nach der Zubereitung eingenommen. Wenn mehr als eine Injektion durchgeführt werden soll, werden Replikationen der Dosis angefertigt. Das restliche Medikament wird verworfen.

Feinnadelaspiration (FNA):

Die FNA ist minimalinvasiv und wird von einem erfahrenen Untersucher durchgeführt. Die Haut über dem Lymphknoten wird desinfiziert und eine sterile Nadel (23–25 g), die an der 5-ml-Spritze befestigt und in einer FNA-Pistole befestigt ist, wird unter Farbdoppler-Ultraschallkontrolle in die Lymphknotenrinde eingeführt, wobei wichtige Gewebe vermieden werden und Organe wie große Blutgefäße und Nerven. Der Spritzenkolben wird herausgezogen, um die Dichtung auf eine 2-ml-Skala einzustellen und so den Unterdruck in der Spritze aufrechtzuerhalten. Nachdem die Spritze fünfmal gedreht und abgesaugt wurde, wird die Nadel gedreht, um fächerförmig auf verschiedenen Flugbahnen im Lymphknoten abzusaugen. Die Nadel wird zurückgezogen, wenn ca. In der Spritze befinden sich 0,1 ml Gewebe. Die Einstichstelle wird mit steriler Gaze abgedeckt und 10 Minuten lang mit entsprechender Kraft Druck ausgeübt. Die Patienten werden 30 Minuten lang beobachtet und entlassen, wenn keine unerwünschten Reaktionen auftreten. Die FNA-Probe wird mit Dimethylsulfoxid (DMSO)-haltigem Einfriermedium für lebende Zellen (10 % DMSO und 90 % fötales Rinderserum (FBS)) gespült, in ein Kryoröhrchen gegeben und bei -80 °C eingefroren.

Blutentnahme und Konservierung von Zellen und Blutserum:

Die venöse Blutentnahme erfolgt unmittelbar vor der SCIT/ILIT, 2, 6 oder 24 Stunden nach der SCIT/ILIT und 7 und 28 Stunden nach der SCIT/SLIT. Es werden jeweils 25 ml venöses Blut zur Herstellung von PBMCs und 5 ml Blut zur Herstellung von Serum entnommen. Beide Proben werden mit routinemäßigen internen Methoden innerhalb von 2 Stunden zur Herstellung von Serum und Zellen verarbeitet. Das produzierte Serum wird in 1-ml-Proben aufgeteilt und zur späteren Analyse bei -20 °C eingefroren. Vollblut wird auf Ficoll zentrifugiert und die PBMCs isoliert und in PBS gewaschen, bevor sie in DMSO-haltigem Einfriermedium für lebende Zellen resuspendiert werden. 1-ml-Aliquots der Zellen werden in Kryoröhrchen langsam eingefroren und schließlich vor der weiteren Analyse bei -80 °C gelagert.