Иммунологический анализ ткани лимфатических узлов после внутрилимфатической иммунотерапии: проспективное исследование случай-контроль (ILIT-FNA)

Это проспективное сравнительное клиническое открытое экспериментальное исследование. Из пациентов с аллергией на пыльцу трав, которые проходят предсезонную схему SCIT с Polvac™ Grass+RyeSCIT в отделении аллергии USZ, 30 пациентов будут набраны для исследования.

Через четыре-шесть недель после окончания лечения ПКИТ (при максимальной поддерживающей дозе) пациенты будут рандомизированы в одну из двух групп лечения и получат одну дополнительную инъекцию аллергена. Обе группы лечения получают один и тот же препарат, но в разных дозах и способах введения. Пятнадцать пациентов получат еще одну подкожную инъекцию 0,5 мл (2000 ЕД) Polvac Grass+Rye. Остальным 15 пациентам будет назначена внутрилимфатическая инъекция 0,1 мл Polvac Grass+Rye с 400 ЕД аллергена. Инъекции как ПКИТ, так и ВЛИТ выполняются под ультразвуковым контролем, чтобы обеспечить инъекцию в лимфатический узел (ВЛИТ) или на 1 см рядом с лимфатическим узлом (ПКИТ).

FNA ткани лимфатических узлов будет проводиться через 2, 6 или 24 часа после инъекции аллергена. В то же время в качестве исходного уровня будет выполняться FNA контралатеральных лимфатических узлов. Забор венозной крови будет производиться при всех посещениях: исходно, а также через 2, 6 или 24 часа, через 7 дней и через 28 дней после аллергена ILIT или SCIT. ФНА проводится под контролем УЗИ.

Препарат препарата:

Флакон с лекарством объемом 1 мл (4000 ЕД/мл) встряхивают в течение 10 секунд. Головку флакона дезинфицируют и 0,5 мл (для ПКИТ) или 0,1 мл (для ВЛИТ) препарата набирают в шприц объемом 1 мл с иглой для подкожных инъекций 23G, следя за тем, чтобы в шприце или игле не было воздуха. Препарат применяют не позднее, чем через 4 часа после приготовления. Копия дозы делается, если необходимо выполнить более одной инъекции. Оставшееся лекарство выбрасывается.

Тонкоигольная аспирация (ТАП):

FNA является минимально инвазивной и выполняется опытным исследователем. Кожа над лимфатическим узлом будет продезинфицирована, и стерильная игла (23-25 ​​г), прикрепленная к 5-миллилитровому шприцу, закрепленному в пистолете FNA, будет введена в кору лимфатического узла под ультразвуковым контролем цветного доплера, избегая важных тканей. и органы, такие как крупные кровеносные сосуды и нервы. Поршень шприца вытягивается, чтобы установить уплотнение на шкале 2 мл, чтобы поддерживать отрицательное давление в шприце. После поворота и аспирации шприца 5 раз иглу поворачивают для аспирации веерообразно по разным траекториям в лимфатическом узле. Иглу извлекают, когда ок. В шприце имеется 0,1 мл ткани. Место пункции закрывают стерильной марлей и прижимают с соответствующей силой в течение 10 мин. Больных наблюдают в течение 30 мин наблюдения и отпускают при отсутствии побочных реакций. Образец FNA будет промыт средой для замораживания живых клеток, содержащей диметилсульфоксид (ДМСО) (10% ДМСО и 90% фетальной телячьей сыворотки (ФБС)), помещен в криопробирку и заморожен при температуре -80°C.

Сбор крови и сохранение клеток и сыворотки крови:

Сбор венозной крови проводят непосредственно перед ПКИТ/ВЛИТ, через 2, 6 или 24 часа после ПКИТ/ВЛИТ и через 7 и 28 часов после ПКИТ/СЛИТ. Каждый раз берут 25 мл венозной крови для приготовления РВМС и 5 мл крови для приготовления сыворотки. Оба образца обрабатываются обычными внутренними методами в течение 2 часов для подготовки сыворотки и клеток. Полученную сыворотку делят на аликвоты по 1 мл и замораживают при -20°С для последующего анализа. Цельную кровь центрифугируют на фиколле, и РВМС выделяют и промывают в PBS перед ресуспендированием в среде для замораживания живых клеток, содержащей ДМСО. Аликвоты клеток объемом 1 мл медленно замораживают в криопробирках и, наконец, хранят при -80°C перед дальнейшим анализом.