Analiza immunologiczna tkanki węzłów chłonnych po immunoterapii wewnątrzlimfatycznej: prospektywne badanie kliniczno-kontrolne (ILIT-FNA)

Jest to prospektywne, porównawcze, kliniczne, otwarte badanie pilotażowe. Spośród pacjentów z alergią na pyłki traw, którzy przejdą przedsezonowy program SCIT z Polvac™ Grass+RyeSCIT w Oddziale Alergicznym USZ, do badania zostanie zrekrutowanych 30 pacjentów.

Cztery do sześciu tygodni po zakończeniu leczenia SCIT (przy maksymalnej dawce podtrzymującej) pacjenci zostaną losowo przydzieleni do jednej z dwóch grup terapeutycznych i otrzymają jedną dodatkową iniekcję alergenu. Obie leczone grupy otrzymują ten sam lek, ale w różnych dawkach i drogach podawania. Piętnastu pacjentów zostanie przydzielonych do kolejnego wstrzyknięcia podskórnego zawierającego 0,5 ml (2000 j.) Polvac Grass+Rye. Pozostałych 15 pacjentów zostanie przydzielonych do wstrzyknięcia dolimfatycznego 0,1 ml Polvac Grass+Rye z 400 U alergenu. Zarówno iniekcje SCIT, jak i ILIT wykonuje się pod kontrolą USG, aby zapewnić iniekcję do węzła chłonnego (ILIT) lub 1 cm obok węzła chłonnego (SCIT).

FNA tkanki węzłów chłonnych zostanie przeprowadzona 2, 6 lub 24 godziny po wstrzyknięciu alergenu. W tym samym czasie jako wyjściową zostanie wykonana FNA przeciwległych węzłów chłonnych. Krew żylna będzie pobierana na wszystkich wizytach: wyjściowo oraz po 2, 6 lub 24 godzinach, po 7 dniach i po 28 dniach od podania alergenu ILIT lub SCIT. FNA jest wykonywana pod kontrolą USG.

Przygotowanie leku:

Fiolkę z lekiem o pojemności 1 ml (4000 U/ml) wstrząsa się przez 10 sekund. Głowicę fiolki dezynfekuje się i pobiera 0,5 ml (dla SCIT) lub 0,1 ml (dla ILIT) leku do 1 ml strzykawki z igłą podskórną 23G, upewniając się, że w strzykawce lub igle nie ma powietrza. Lek stosuje się nie później niż 4 godziny po przygotowaniu. Repliki dawki wykonuje się, jeśli ma być wykonane więcej niż jedno wstrzyknięcie. Pozostały lek jest odrzucany.

Aspiracja cienkoigłowa (FNA):

FNA jest minimalnie inwazyjna i wykonywana przez doświadczonego badacza. Skóra nad węzłem chłonnym zostanie zdezynfekowana, a sterylna igła (23-25 ​​g) dołączona do strzykawki 5 ml, zamocowanej w aparacie FNA, zostanie wprowadzona do kory węzła chłonnego pod kontrolą USG z kolorowym Dopplerem z pominięciem ważnych tkanek oraz narządy, takie jak duże naczynia krwionośne i nerwy. Tłok strzykawki jest odciągany w celu ustawienia uszczelnienia na skali 2 ml w celu utrzymania podciśnienia w strzykawce. Po 5-krotnym obróceniu i zaaspirowaniu strzykawki, igła jest obracana w celu aspiracji w kształcie wachlarza na różnych trajektoriach w węźle chłonnym. Igła jest wycofywana po ok. W strzykawce znajduje się 0,1 ml tkanki. Miejsce nakłucia owija się sterylną gazą i uciska z odpowiednią siłą przez 10 min. Pacjenci są obserwowani przez 30 minut obserwacji i zwalniani, gdy nie wystąpią żadne działania niepożądane. Próbka FNA zostanie przepłukana pożywką do zamrażania żywych komórek zawierającą sulfotlenek dimetylu (DMSO) (10% DMSO i 90% płodowej surowicy bydlęcej (FBS)), umieszczona w krioprobówce i zamrożona w temperaturze -80°C.

Pobieranie krwi i konserwacja komórek i surowicy krwi:

Pobranie krwi żylnej wykonuje się tuż przed SCIT/ILIT, 2, 6 lub 24 godziny po SCIT/ILIT oraz 7 i 28 po SCIT/SLIT. Każdorazowo pobiera się 25 ml krwi żylnej w celu przygotowania PBMC oraz 5 ml krwi w celu przygotowania surowicy. Obie próbki są przetwarzane rutynowymi metodami wewnętrznymi w ciągu 2 godzin w celu przygotowania surowicy i komórek. Otrzymaną surowicę dzieli się na porcje w 1 ml próbkach i zamraża w temperaturze -20°C do późniejszej analizy. Pełną krew odwirowuje się na Ficoll i PBMC izoluje i przemywa PBS przed ponownym zawieszeniem w pożywce do zamrażania żywych komórek zawierającej DMSO. Porcje 1 ml komórek powoli zamraża się w krioprobówkach i na koniec przechowuje w temperaturze -80°C przed dalszą analizą.