Immunologisk analyse av lymfeknutevev etter intralymfatisk immunterapi: en prospektiv kasuskontrollstudie (ILIT-FNA)

Dette er en prospektiv, komparativ, klinisk åpen pilotstudie. Fra pasienter med gresspollenallergi som gjennomgår en pre-sesonal SCIT-ordning med Polvac™ Grass+RyeSCIT ved USZ Allergy Unit, vil 30 pasienter bli rekruttert til studien.

Fire til seks uker etter avsluttet SCIT-behandling (ved maksimal vedlikeholdsdose), vil pasientene bli randomisert til én av to behandlingsgrupper og få en ekstra allergeninjeksjon. Begge behandlingsgruppene får samme legemiddel, men med forskjellige doser og administreringsveier. Femten pasienter vil bli tildelt en ny subkutan injeksjon med 0,5 ml (2000 U) Polvac Grass+Rye. De andre 15 pasientene vil bli tildelt en intralymfatisk injeksjon av 0,1 ml Polvac Grass+Rye med 400 U allergen. Både SCIT- og ILIT-injeksjoner utføres ved hjelp av ultralydveiledning for å sikre injeksjon i lymfeknuten (ILIT) eller 1 cm ved siden av lymfeknuten (SCIT).

FNA for lymfeknutevev vil bli utført 2, 6 eller 24 timer etter allergeninjeksjon. Samtidig vil FNA av kontralaterale lymfeknuter bli utført som baseline. Det vil bli tatt prøver av venøst ​​blod ved alle besøk: ved baseline så vel som etter 2, 6 eller 24 timer, etter 7 dager og etter 28 dager av allergenet ILIT eller SCIT. FNA utføres ved ultralydveiledning.

Legemiddelforberedelse:

1 ml medikamentglasset (4000 U/ml) ristes i 10 sekunder. Hodet på hetteglasset desinfiseres og 0,5 ml (for SCIT) eller 0,1 ml (for ILIT) av medikamentet trekkes inn i en 1 ml sprøyte med 23G kanyle som sikrer ingen luft i sprøyten eller kanylen. Medisinen brukes senest 4 timer etter tilberedning. Replika av dosen lages hvis mer enn én injeksjon skal utføres. Resten av medisinen kasseres.

Finnålaspirasjon (FNA):

FNA er minimalt invasiv og utført av en erfaren etterforsker. Huden over lymfeknuten vil bli desinfisert og en steril kanyle (23-25g), festet til 5 ml sprøyten, festet i en FNA-pistol, vil bli satt inn i lymfeknutebarken under fargedoppler ultralydveiledning samtidig som viktig vev unngås. og organer, som store blodårer og nerver. Sprøytestempelet trekkes for å sette forseglingen i en 2 ml skala for å opprettholde undertrykk i sprøyten. Etter å ha rotert og aspirert sprøyten 5 ganger, roteres nålen for å aspirere på en vifteform ved forskjellige baner i lymfeknuten. Nålen trekkes tilbake når ca. 0,1 ml vev er tilstede i sprøyten. Stikkstedet dekkes med steril gasbind og trykk påføres med passende kraft i 10 min. Pasienter observeres i 30 minutter med observasjon og frigjøres når ingen bivirkning. FNA-prøven skylles med dimetylsulfoksid (DMSO)-holdig frysemedium for levende celler (10 % DMSO og 90 % føtalt bovint serum (FBS)), settes i et kryorør og fryses i -80 °C.

Blodinnsamling og konservering av celler og blodserum:

Venøs blodprøvetaking utføres like før SCIT/ILIT, 2, 6 eller 24 timer etter SCIT/ILIT, og 7 og 28 etter SCIT/SLIT. Hver gang samles det 25 ml veneblod for fremstilling av PBMC og 5 ml blod samles inn for fremstilling av serum. Begge prøvene behandles med rutinemessige interne metoder innen 2 timer for klargjøring av serum og celler. Det produserte serumet fordeles i 1 ml prøver og fryses ved -20 °C for senere analyse. Helblod sentrifugeres på Ficoll og PBMC-ene isoleres og vaskes i PBS før de resuspenderes i DMSO-holdig frysemedium for levende celler. 1 ml alikvoter av cellene blir saktefryst i kryorør og til slutt lagret ved -80 °C før videre analyse.