Immunologisk analys av lymfkörtelvävnad efter intralymfatisk immunterapi: en prospektiv fallkontrollstudie (ILIT-FNA)

Detta är en prospektiv, jämförande, klinisk öppen pilotstudie. Från patienter med gräspollenallergi som genomgår ett SCIT-schema för säsong med Polvac™ Grass+RyeSCIT vid USZ Allergy Unit, kommer 30 patienter att rekryteras till studien.

Fyra till sex veckor efter avslutad SCIT-behandling (vid maximal underhållsdos) kommer patienterna att randomiseras till en av två behandlingsgrupper och få ytterligare en allergeninjektion. Båda behandlingsgrupperna får samma läkemedel, men med olika doser och administreringsvägar. Femton patienter kommer att tilldelas ytterligare en subkutan injektion med 0,5 ml (2000 U) Polvac Grass+Rye. De övriga 15 patienterna kommer att tilldelas en intralymfatisk injektion av 0,1 ml Polvac Grass+Rye med 400 U allergen. Både SCIT- och ILIT-injektioner utförs med hjälp av ultraljudsvägledning för att säkerställa injektion i lymfkörteln (ILIT) eller 1 cm bredvid lymfkörteln (SCIT).

FNA för lymfkörtelvävnad kommer att utföras 2, 6 eller 24 timmar efter allergeninjektion. Samtidigt kommer FNA för kontralaterala lymfkörtlar att utföras som baslinje. Venöst blod kommer att tas vid alla besök: vid baslinjen såväl som efter 2, 6 eller 24 timmar, efter 7 dagar och efter 28 dagar av allergenet ILIT eller SCIT. FNA utförs genom ultraljudsvägledning.

Läkemedelsberedning:

1 ml medicinflaskan (4000 U/ml) skakas i 10 sekunder. Flaskans huvud desinficeras och 0,5 ml (för SCIT) eller 0,1 ml (för ILIT) av läkemedlet dras upp i en 1 ml spruta med 23G injektionsnål som säkerställer att ingen luft finns i sprutan eller nålen. Läkemedlet används senast 4 timmar efter beredningen. Repliker av dosen görs om mer än en injektion ska utföras. Resterande medicin kasseras.

Finnålsaspiration (FNA):

FNA är minimalt invasivt och utförs av en erfaren utredare. Huden ovanför lymfkörteln kommer att desinficeras och en steril nål (23-25g), fäst vid 5 ml sprutan, fixerad i en FNA-pistol, kommer att föras in i lymfkörtelbarken under färgdoppler ultraljudsvägledning samtidigt som viktiga vävnader undviks. och organ, såsom stora blodkärl och nerver. Sprutans kolv dras för att ställa in förseglingen på en 2 ml skala för att bibehålla undertrycket i sprutan. Efter att ha roterat och aspirerat sprutan 5 gånger, roteras nålen för att aspirera i en solfjäderform vid olika banor i lymfkörteln. Nålen dras ut när ca. 0,1 ml vävnad finns i sprutan. Punkteringsstället täcks med steril gasväv och tryck appliceras med lämplig kraft i 10 min. Patienterna observeras under 30 minuters observation och släpps när inga biverkningar. FNA-provet kommer att sköljas med dimetylsulfoxid (DMSO)-innehållande levande cellfrysmedium (10 % DMSO och 90 % fetalt bovint serum (FBS)), läggas i ett kryorör och frysas i -80°C.

Bloduppsamling och konservering av celler och blodserum:

Venös blodinsamling utförs strax före SCIT/ILIT, 2, 6 eller 24 timmar efter SCIT/ILIT, och 7 och 28 efter SCIT/SLIT. Varje gång samlas 25 ml venöst blod upp för beredning av PBMC och 5 ml blod samlas in för beredning av serum. Båda proverna bearbetas med rutinmässiga interna metoder inom 2 timmar för beredning av serum och celler. Det producerade serumet delas upp i 1 ml prover och fryses vid -20 °C för senare analys. Helblod centrifugeras på Ficoll och PBMC:erna isoleras och tvättas i PBS innan de återsuspenderas i DMSO-innehållande frysmedium för levande celler. 1 ml alikvoter av cellerna fryss långsamt i kryorör och förvaras slutligen vid -80 °C innan ytterligare analys.