Prostaglandiinin ja typpioksidin synteesin merkitys apikaalisessa parodontiittissa

• Tutkimuksen suunnittelu Tämä havainnollinen, analyyttinen, poikkileikkaustutkimus suoritettiin yhdessä keskustassa. Suunnitellun otoskoon saavuttamiseksi noin 1 200 potilasta, jotka hakivat kesäkuun 2021 ja toukokuun 2022 välisenä aikana xxxx-yliopiston endodontian osastolle apikaalisen parodontiitin (AP) ja/tai kroonisen parodontiitin (CP) vuoksi, rekisteröitiin suunsisäinen tutkimus ja Demografiset ominaisuudet. Tutkimuksen tuloksena tutkimukseen osallistui 85 potilasta, joilla oli vain AP (AP-ryhmä) ja 50 potilasta, joilla oli vain CP (CP-ryhmä), joiden diagnoosi varmistui. Potilaat, joilla oli sekä AP että P, suljettiin pois tutkimuksesta. Potilaat, jotka olivat käyttäneet antibiootteja ja/tai anti-inflammatorisia lääkkeitä viimeisen 6 kuukauden aikana, sekä ne, jotka olivat raskaana tai imettäneet, jätettiin myös pois. Lisäksi ne, jotka ovat käyttäneet steroideja tai ei-steroidisia tulehduskipulääkkeitä ja suuriannoksisia biotiinivitamiinia viimeisen 48 tunnin aikana, suljettiin pois tutkimuksesta, koska tämä saattaa vaikuttaa tuloksiin. Tutkimukseen otettiin mukaan terve 50 vapaaehtoisen kontrolliryhmä, jolla ei ollut parodontaalista patologiaa sekä akuutteja/kroonisia sairauksia (lihas-/nivel-/luusairaus, tulehduksellinen suolistosairaus, paikallinen tai yleistynyt infektio, vakava elinsairaus, sydän- ja verisuonisairaus ja diabetes mellitus). . Tutkimusryhmiin kuuluvat; valittu satunnaisesti ihmisistä, joilla on samanlainen sukupuoli, ikä ja paino.
• Demografinen ja kliininen historia Kaikkien tutkimukseen osallistuneiden potilaiden sukupuoli, ikä, painoindeksi (BMI), komorbiditeettitila kirjattiin. Potilaiden juurihoito (RCT), hammaskruunu, komposiitti/amalgaamitäytteet (CF), puuttuvien hampaiden lukumäärä (NMT) saatiin intraoraalisen tutkimuksen tuloksena.
• Periapical ja parodontaalisairauksien pisteytys Kaikista suuontelossa olevista hampaista otettiin röntgenkuva, ja periapikaaliseen alueeseen ja radiografiseen luun katoamiseen liittyvien radioluento-kuvien läsnäolo arvioitiin. Panoraamaröntgenkuvat tutkimuksessa saatiin käyttämällä digitaalista panoraamayksikköä (VistaPano S, Durr Dental AG, Saksa), joka toimi 73 kVp:llä ja 10 mA:lla 13500 millisekunnin valotusajalla vakiotilassa. Periapikaalisissa röntgenkuvissa käytettiin Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) -järjestelmää röntgenyksikön kanssa, asetus 70 kV, 8 mA. Puolittauskulmatekniikkaa sovellettiin periapikaalisten kuvien saamiseksi. Sitten röntgenkuvat analysoitiin Kodak Dental Imaging Software -ohjelmistolla. Hampaiden radiologisen arvioinnin perusteella periapikaalisen radioluenssin olemassaoloa ilman parodontaalista sairautta pidettiin riittävänä AP-diagnoosissa. Paisepisteytys (AS-PAI), joka perustuu periapikaaliseen indeksiin, suoritettiin indikaattorina taudin etenemisestä AP-ryhmässä. Tätä pisteytystä varten käytettiin periapikaalisen indeksin (PAI) pisteytysjärjestelmää10, joka on apikaalisen parodontiitin radiografisen arvioinnin pisteytysjärjestelmä. Vastaavasti AP-ryhmä jaettiin 3 alaryhmään. AS-PAI 1 (lievä): niillä, joilla on vähintään 1 hammas, jolla on joko PAI 3 tai PAI 4, AS-PAI 2 (kohtalainen): niillä, joilla on vain 1 hammas, jolla on PAI 5, AS-PAI 3 (vakava): niillä, joilla on PAI 3 tai PAI 4 kaksi tai useampi hammas, joissa on PAI 5.

Tutkimusta varten saadut periodontaaliset mittaukset koostuivat korkeimmasta mittaussyvyydestä (milimetreinä), jotka mitattiin noin kuudella valitulla hampaalla osallistujaa kohti. Tässä tutkimuksessa CP-ryhmä jaettiin 4 alaryhmään parodontiitin staging-järjestelmän (PSS) (Tonetti) mukaan. Tämä järjestelmä luokittelee parodontiitti I:stä IV:een hampaiden välisen kliinisen kiinnittymisen menetyksen (CAL), radiografisen luukadon (RBL) ja hampaiden menetyksen mukaan. Tämä pisteytys on seuraava: Vaihe 1: CAL 1 - 2 mm, RBL on koronaalisessa kolmanneksessa (<15 %) ja ei hampaiden irtoamista, Vaihe 2: CAL 3 - 4 mm, RBL on koronaalisessa kolmanneksessa (15 % - 33 % ) ja ei hampaiden menetystä, Vaihe 3: CAL > 5 mm, RBL ulottuu juuren puoliväliin ja sen ulkopuolelle ja hampaiden häviäminen < 4 hammasta, ja vaihe 4: CAL > 5 mm, RBL ulottuu juuren puoliväliin ja sen jälkeen ja hampaiden menetys > 5 hammasta. Vaihe 1 ja 2 arvioitiin kuitenkin samassa ryhmässä tapausten vähäisyyden vuoksi. Tämän seurauksena ryhmät suunniteltiin vaiheiksi 1-2: PSS 1-2, vaihe 2: PSS 2 ja vaihe 3: PSS 3.

• Laskimoveren ja Gingival Crevicular Fluidin (GCF) kerääminen Paaston (8-10 tuntia) laskimoverta kaikilta osallistujilta otettiin kyynärvarren kyynärvarren kyynärvarren etuperäisistä suonista. Kun verta oli pidetty huoneenlämpötilassa 30 minuuttia, sitä sentrifugoitiin 2500 xg:ssä 10 minuuttia. Sentrifugoinnin jälkeen putkien ylempi seerumi erotettiin. Seerumien hemolyysiindeksit (HI) mitattiin optisten häiriöiden estämiseksi. (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). Ne, joiden hemolyysiindeksi oli yli 50 (mg/dl Hb), suljettiin pois tutkimuksesta. Sopivia seerumeita säilytettiin -80 oC:ssa analyysipäivään asti. Laskimoveren lisäksi kerättiin myös gingival crevicular fluid (GCF) -näytteitä, joita säilytettiin -80 oC:ssa vastaavissa olosuhteissa. Analyysipäivänä kaikkien seerumien ja GCF:n annettiin ensin liueta hitaasti +4 oC:ssa ja saatettu sitten huoneenlämpöön ennen mittausta.

Gingival crevicular nestenäytteitä otettiin ennen periodontaalinen koetus, jotta vältetään veren kontaminaatio. Näytteen kontaminoitumisen välttämiseksi potilaita pyydettiin olemaan syömättä tai juomatta mitään vähintään 30 minuuttia ennen toimenpidettä. Kolme näytettä otettiin läheisen hampaan mesiaalisesta, distaalisesta ja bukkaalista pinnasta. Valitut kohdat eristettiin vanurullalla ja supragingivaalinen plakki, jos sitä oli, poistettiin käyttämällä kyrettiä syljen ja/tai plakin kontaminaation estämiseksi. GCF:ää kerättiin 60 sekuntia käyttämällä PerioPaper-liuskoja (OraFlow Inc., NY, USA), jotka asetettiin varovasti, kunnes havaittiin lievää vastusta. Kolme näytettä yhdistettiin Eppendorf-putkiin ja asetettiin sitten laboratorion pakastimeen -80 °C:seen varastointia varten. Periopaperit pestiin perusteellisesti 0,5 ml:n eppendorf-putkissa (putken taarapainon vähentämisen jälkeen) 100 ul:lla fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) käyttämällä automaattista pipettiä. Näytteistä poistettiin verivärjäytyneet paperiliuskat. Kaikki GCF-näytteet punnittiin tarkkuusvaa'alla (Shimadzu Libror, malli AEG-220, Saksa) ja kirjattiin. Kaikki näytteet sekoitettiin perusteellisesti 15-20 sekunnin vortex-laitteella (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Saksa). Tämä mahdollisti GCF:n siirtymisen PBS:ään. Paperinauhat poistettiin kontaminoimatta näytteitä ja jäljelle jäänyt uute säilytettiin pakastimessa työpäivään asti. Tutkimuspäivänä saadut tulokset suhteutettiin painoihin/PBS:ään.

• Biokemialliset analyysit Kaikkien potilaiden seerumien TNF-α-, IL-10-, NO- ja PGE2-tasot mitattiin Microplate ELISA Readerilla (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) ELISA-menetelmää käyttäen. Riittämättömän näytemäärän (100 ui) vuoksi GCF:ssä mitattiin vain NO- ja PGE2-tasot käyttämällä samaa ELISA-kittiä.

Seerumin TNF-a-, IL-10-, NO- ja PGE2-tasot analysoitiin käyttämällä ELISA-levyjä, joiden kuopat oli esipäällystetty vasta-aineella (ihmisen TNF-a, IL-10, NO tai PGE2). TNF-α-, IL-10-, NO- ja PGE2-testipakkausten (Bioassay Technology Laboratory, Kiina) herkkyys on 1,52 ng/l, 2,59 pg/ml, 1,12 µmol/L ja 1,28 ng/L, mittausalue 3-900 ng /L, vastaavasti 5-1500 pg/ml, 2-600 µmol/L ja 2-600 ng/L, CV kaikissa intra- ja interassay-testeissä oli < 10 %.