L'importance de la synthèse des prostaglandines et de l'oxyde nitrique dans la parodontite apicale

• Conception de l'étude Cette étude observationnelle, analytique et transversale a été menée dans un seul centre. Afin d'atteindre la taille d'échantillon prévue, environ 1 200 patients ayant postulé au département d'endodontie de l'université xxxx entre juin 2021 et mai 2022 en raison d'une parodontite apicale (PA) et/ou d'une parodontite chronique (CP) ont été enregistrés, y compris leur examen intra-oral et caractéristiques démographiques. À la suite de l'examen, 85 patients atteints uniquement d'AP (groupe AP) et 50 patients atteints uniquement de CP (groupe CP), dont le diagnostic a été confirmé, ont été inclus dans l'étude. Les patients présentant à la fois AP et P ont été exclus de l'étude. Les patientes ayant pris des antibiotiques et/ou des anti-inflammatoires au cours des 6 derniers mois ainsi que celles enceintes ou allaitantes ont également été exclues. De plus, les personnes ayant utilisé des anti-inflammatoires stéroïdiens ou non stéroïdiens et des doses élevées de vitamine biotine au cours des dernières 48 heures ont été exclues de l'étude, car cela pourrait affecter les résultats. Un groupe témoin sain de 50 volontaires sans pathologie parodontale ni maladie aiguë/chronique (maladies musculaires/articulaires/os, maladie inflammatoire de l'intestin, infection locale ou généralisée, maladie organique grave, maladie cardiovasculaire et diabète sucré) a été inclus dans l'étude. . Ceux inclus dans les groupes de recherche ; sélectionnées au hasard parmi des personnes présentant des caractéristiques de sexe, d’âge et de poids similaires.
• Antécédents démographiques et cliniques Le sexe, l'âge, l'indice de masse corporelle (IMC), l'état de comorbidité de tous les patients participant à l'étude ont été enregistrés. Les résultats du traitement de canal (ECR), de la couronne dentaire, des obturations en composite/amalgame (CF) et du nombre de dents manquantes (NMT) des patients ont été obtenus à la suite d'un examen intra-oral.
• Scoring des maladies périapicales et parodontales Toutes les dents présentes dans la cavité buccale ont été radiographiées et la présence d'images radiotransparentes associées à la région périapicale et à la perte osseuse radiographique a été évaluée. Les radiographies panoramiques de l'étude ont été obtenues à l'aide d'un appareil panoramique numérique (VistaPano S, Durr Dental AG, Allemagne), fonctionnant à 73 kVp et 10 mA avec un temps d'exposition de 13 500 millisecondes en mode standard. Pour les radiographies périapicales, le système Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) a été utilisé avec un appareil à rayons X, réglage de 70 kV, 8 mA. La technique de l'angle bissecteur a été appliquée pour obtenir les images périapicales. Ensuite, les radiographies ont été analysées avec le logiciel d’imagerie dentaire Kodak. D'après l'évaluation radiographique des dents, la présence d'une radioclarté périapicale sans maladie parodontale a été considérée comme suffisante pour le diagnostic de PA. Un score d'abcès (AS-PAI) basé sur l'indice périapical a été réalisé comme indicateur de la progression de la maladie au sein du groupe AP. Pour cette notation, le système de notation de l'indice périapical (PAI),10 qui est un système de notation pour l'évaluation radiographique de la parodontite apicale, a été utilisé. En conséquence, le groupe AP a été divisé en 3 sous-groupes. AS-PAI 1 (léger) : ceux ayant au moins 1 dent avec PAI 3 ou PAI 4, AS-PAI 2 (modéré) : ceux ayant seulement 1 dent avec un PAI 5, AS-PAI 3 (sévère) : ceux ayant deux dents ou plus avec un PAI 5.

Les mesures parodontales obtenues pour l'étude comprenaient les profondeurs de sondage les plus élevées (en millimètres) enregistrées autour de six dents sélectionnées par participant. Dans cette étude, le groupe CP a été divisé en 4 sous-groupes selon le système de classification de la parodontite (PSS) (Tonetti). Ce système classe les parodontites de I à IV selon la perte d'attache clinique interdentaire (CAL), la perte osseuse radiographique (RBL) et la perte dentaire. Ce score est le suivant : Stade 1 : CAL 1 à 2 mm, RBL est au tiers coronal (<15%) et pas de perte dentaire, Stade 2 : CAL 3 à 4 mm, RBL est au tiers coronal (15% à 33% ) et pas de perte de dents, Stade 3 : CAL > 5 mm, RBL s'étend jusqu'au tiers médian de la racine et au-delà et perte de dents < 4 dents, et Stade 4 : CAL > 5 mm, RBL s'étend jusqu'au tiers médian de la racine et au-delà et perte de dents > 5 dents. Cependant, les stades 1 et 2 ont été évalués dans le même groupe en raison du faible nombre de cas. En conséquence, les groupes ont été conçus selon les étapes 1-2 : PSS 1-2, Étape 2 : PSS 2 et Étape 3 : PSS 3.

• Collecte de sang veineux et de liquide gingival creviculaire (GCF) À jeun (8 à 10 heures), le sang veineux de tous les participants a été prélevé dans les veines antécubitales/basiques de l'avant-bras. Après avoir maintenu le sang à température ambiante pendant 30 minutes, il a été centrifugé à 2 500 xg pendant 10 minutes. Après centrifugation, le sérum supérieur des tubes a été séparé. Les indices d'hémolyse (HI) des sérums ont été mesurés pour éviter les interférences optiques. (Analyseur chimique Cobas 8000, États-Unis). Ceux ayant un indice d’hémolyse supérieur à 50 (mg/dl Hb) ont été exclus de l’étude. Les sérums appropriés ont été conservés à -80 °C jusqu'au jour de l'analyse. En plus du sang veineux, des échantillons de liquide creviculaire gingival (GCF) ont également été collectés et conservés à -80 °C dans des conditions similaires. Le jour de l’analyse, tous les sérums et le GCF ont d’abord été laissés se dissoudre lentement à +4 °C, puis ramenés à température ambiante avant la mesure.

Des échantillons de liquide creviculaire gingival ont été prélevés avant le sondage parodontal pour éviter toute contamination par le sang. Pour éviter toute contamination de l’échantillon, il a été demandé aux patients de ne rien manger ni boire au moins 30 minutes avant l’intervention. Trois échantillons ont été prélevés sur les surfaces mésiale, distale et buccale de la dent concernée. Les sites sélectionnés ont été isolés avec un rouleau de coton et la plaque supragingivale, si présente, a été éliminée à l'aide d'une curette pour éviter la contamination par la salive et/ou la plaque. Le GCF a été collecté pendant 60 secondes à l'aide de bandes PerioPaper (OraFlow Inc., NY, USA) placées doucement jusqu'à ce qu'une légère résistance soit ressentie. Les trois échantillons ont été regroupés dans des tubes Eppendorf puis placés dans le congélateur du laboratoire à -80 °C pour être conservés. Les périopapiers ont été soigneusement lavés dans des tubes Eppendorf de 0,5 ml (après soustraction du poids à vide du tube) avec 100 µl de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à l'aide d'une pipette automatique. Des bandes de papier tachées de sang ont été retirées des échantillons. Tous les échantillons de GCF ont été pesés sur une balance de précision (Simadzu Libror, modèle AEG-220, Allemagne) et enregistrés. Tous les échantillons ont été soigneusement mélangés avec un appareil vortex pendant 15 à 20 secondes (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Allemagne). Cela a permis à GCF de passer dans PBS. Les bandes de papier ont été retirées sans contaminer les échantillons et l'extrait restant a été conservé au congélateur jusqu'au jour ouvrable. Les résultats obtenus le jour de l'étude ont été proportionnés en poids/PBS.

• Analyses biochimiques Les taux de TNF-α, IL-10, NO et PGE2 dans les sérums de tous les patients ont été mesurés dans Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) en utilisant la méthode ELISA. En raison de la quantité insuffisante d'échantillon (100 µl), seuls les niveaux de NO et de PGE2 ont été mesurés dans le GCF en utilisant le même kit ELISA.

Les taux sériques de TNF-α, IL-10, NO et PGE2 ont été analysés à l'aide de plaques ELISA dont les puits étaient pré-revêtus d'anticorps (TNF-α humain, IL-10, NO ou PGE2). La sensibilité des kits de test TNF-α, IL-10, NO et PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, Chine) est de 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L et 1,28 ng/L, plage de mesure 3-900 ng /L, respectivement, 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L et 2-600 ng/L, le CV pour tous les tests intra-essai et inter-essai était < 10 %.