Die Bedeutung der Prostaglandin- und Stickoxidsynthese bei apikaler Parodontitis

• Studiendesign Diese beobachtende, analytische Querschnittsstudie wurde an einem einzigen Zentrum durchgeführt. Um die geplante Stichprobengröße zu erreichen, wurden ca. 1200 Patienten, die sich zwischen Juni 2021 und Mai 2022 wegen apikaler Parodontitis (AP) und/oder chronischer Parodontitis (CP) an der Abteilung für Endodontie der xxxx-Universität beworben hatten, einschließlich ihrer intraoralen Untersuchung erfasst Demographische Merkmale. Als Ergebnis der Untersuchung wurden 85 Patienten mit nur AP (AP-Gruppe) und 50 Patienten mit nur CP (CP-Gruppe), deren Diagnose bestätigt wurde, in die Studie einbezogen. Patienten mit sowohl AP als auch P wurden von der Studie ausgeschlossen. Patienten, die innerhalb der letzten 6 Monate Antibiotika und/oder entzündungshemmende Medikamente eingenommen hatten, sowie solche in der Schwangerschaft oder Stillzeit wurden ebenfalls ausgeschlossen. Darüber hinaus wurden Personen, die in den letzten 48 Stunden in der Vergangenheit steroidale oder nichtsteroidale entzündungshemmende Medikamente und hochdosiertes Biotin-Vitamin eingenommen hatten, von der Studie ausgeschlossen, da dies die Ergebnisse beeinflussen könnte. In die Studie wurde eine gesunde Kontrollgruppe von 50 Freiwilligen ohne parodontale Pathologie sowie akute/chronische Erkrankungen (Muskel-/Gelenk-/Knochenerkrankungen, entzündliche Darmerkrankungen, lokale oder generalisierte Infektionen, schwere Organerkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und Diabetes mellitus) einbezogen . Diejenigen, die in den Forschungsgruppen enthalten sind; zufällig aus Personen mit ähnlichen Geschlechts-, Alters- und Gewichtsmerkmalen ausgewählt.
• Demographisch-klinische Anamnese Geschlecht, Alter, Body-Mass-Index (BMI) und Komorbiditätsstatus aller an der Studie teilnehmenden Patienten wurden erfasst. Als Ergebnis einer intraoralen Untersuchung wurden die Ergebnisse der Wurzelkanalbehandlung (RCT), der Zahnkrone, der Komposit-/Amalgamfüllungen (CF) und der Anzahl fehlender Zähne (NMT) der Patienten ermittelt.
• Bewertung periapikaler und parodontaler Erkrankungen Alle in der Mundhöhle vorhandenen Zähne wurden geröntgt und das Vorhandensein röntgenstrahlendurchlässiger Bilder im Zusammenhang mit der periapikalen Region und radiologischem Knochenverlust beurteilt. Panoramaröntgenaufnahmen wurden in der Studie mit einem digitalen Panoramagerät (VistaPano S, Durr Dental AG, Deutschland) erstellt, das mit 73 kVp und 10 mA mit einer Belichtungszeit von 13.500 Millisekunden im Standardmodus betrieben wurde. Für periapikale Röntgenaufnahmen wurde das System Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) mit einer Röntgeneinheit mit einer Einstellung von 70 kV und 8 mA verwendet. Bei der Erstellung der periapikalen Bilder wurde die Winkelhalbierungstechnik angewendet. Anschließend wurden die Röntgenbilder mit der Kodak Dental Imaging Software analysiert. Die radiologische Beurteilung der Zähne ergab, dass das Vorhandensein einer periapikalen Strahlendurchlässigkeit ohne parodontale Erkrankung als ausreichend für die AP-Diagnose angesehen wurde. Als Indikator für das Fortschreiten der Erkrankung innerhalb der AP-Gruppe wurde eine Abszessbewertung (AS-PAI) basierend auf dem periapikalen Index durchgeführt. Für diese Bewertung wurde das Periapical Index (PAI)-Bewertungssystem10 verwendet, ein Bewertungssystem für die radiologische Beurteilung der apikalen Parodontitis. Dementsprechend wurde die AP-Gruppe in 3 Untergruppen aufgeteilt. AS-PAI 1 (leicht): Personen mit mindestens 1 Zahn und entweder PAI 3 oder PAI 4, AS-PAI 2 (mittelschwer): Personen mit nur 1 Zahn und PAI 5, AS-PAI 3 (schwer): Personen mit PAI 3 oder PAI 4 zwei oder mehr Zähne mit einem PAI 5.

Die für die Studie ermittelten parodontalen Messungen umfassten die höchsten Sondierungstiefen (in Millimetern), die bei sechs ausgewählten Zähnen pro Teilnehmer aufgezeichnet wurden. In dieser Studie wurde die CP-Gruppe gemäß dem Parodontitis-Staging-System (PSS) (Tonetti) in 4 Untergruppen eingeteilt. Dieses System klassifiziert die Parodontitis von I bis IV nach dem interdentalen klinischen Attachmentverlust (CAL), dem radiologischen Knochenverlust (RBL) und dem Zahnverlust. Diese Bewertung ist wie folgt: Stadium 1: CAL 1 bis 2 mm, RBL liegt im koronalen Drittel (<15 %) und kein Zahnverlust, Stadium 2: CAL 3 bis 4 mm, RBL liegt im koronalen Drittel (15 % bis 33 %). ) und kein Zahnverlust, Stadium 3: CAL > 5 mm, RBL erstreckt sich bis zum mittleren Drittel der Wurzel und darüber hinaus und Zahnverlust < 4 Zähne, und Stadium 4: CAL > 5 mm, RBL erstreckt sich bis zum mittleren Drittel der Wurzel und darüber hinaus und Zahnverlust > 5 Zähne. Allerdings wurden Stufe 1 und 2 aufgrund der geringen Fallzahlen in derselben Gruppe ausgewertet. Daher wurden die Gruppen als Stufe 1-2: PSS 1-2, Stufe 2: PSS 2 und Stufe 3: PSS 3 konzipiert.

• Entnahme von venösem Blut und Zahnfleischspaltflüssigkeit (GCF). Bei nüchternem Zustand (8–10 Stunden) wurde allen Teilnehmern venöses Blut aus den Ellenbogenvenen/Basisvenen des Unterarms entnommen. Nachdem das Blut 30 Minuten lang bei Raumtemperatur gehalten wurde, wurde es 10 Minuten lang bei 2500 xg zentrifugiert. Nach der Zentrifugation wurde das obere Serum der Röhrchen abgetrennt. Um optische Interferenzen zu verhindern, wurden die Hämolyseindizes (HI) der Seren gemessen. (Cobas 8000 Chemieanalysator, USA). Personen mit einem Hämolyseindex von mehr als 50 (mg/dl Hb) wurden von der Studie ausgeschlossen. Geeignete Seren wurden bis zum Tag der Analyse bei -80 °C gelagert. Zusätzlich zum venösen Blut wurden auch Gingivalspaltenflüssigkeitsproben (GCF) entnommen und unter ähnlichen Bedingungen bei -80 °C gelagert. Am Tag der Analyse ließ man alle Seren und GCF zunächst langsam bei +4 °C auflösen und brachte sie dann vor der Messung auf Raumtemperatur.

Vor der parodontalen Sondierung wurden Proben der Zahnfleischspaltenflüssigkeit entnommen, um eine Kontamination durch Blut zu vermeiden. Um eine Kontamination der Probe zu vermeiden, wurden die Patienten gebeten, vor dem Eingriff mindestens 30 Minuten lang nichts zu essen oder zu trinken. Drei Proben wurden von der mesialen, distalen und bukkalen Oberfläche des entsprechenden Zahns entnommen. Die ausgewählten Stellen wurden mit einer Watterolle isoliert und supragingivaler Plaque, falls vorhanden, mit einer Kürette entfernt, um eine Kontamination mit Speichel und/oder Plaque zu verhindern. GCF wurde 60 Sekunden lang mit PerioPaper-Streifen (OraFlow Inc., NY, USA) gesammelt, die vorsichtig platziert wurden, bis ein leichter Widerstand spürbar war. Die drei Proben wurden in Eppendorf-Röhrchen gepoolt und dann zur Lagerung in den Laborgefrierschrank bei -80 °C gestellt. Periopapiere wurden in 0,5-ml-Eppendorf-Röhrchen (nach Abzug des Taragewichts des Röhrchens) mit 100 µl phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) unter Verwendung einer automatischen Pipette gründlich gewaschen. Von den Proben wurden blutbefleckte Papierstreifen entfernt. Alle GCF-Proben wurden auf einer Präzisionswaage (Shimadzu Libror, Modell AEG-220, Deutschland) gewogen und aufgezeichnet. Alle Proben wurden mit einem 15–20 Sekunden langen Vortexgerät (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Deutschland) gründlich gemischt. Dadurch konnte GCF in PBS übergehen. Die Papierstreifen wurden entfernt, ohne die Proben zu kontaminieren, und der verbleibende Extrakt wurde bis zum Arbeitstag im Gefrierschrank aufbewahrt. Die am Studientag erhaltenen Ergebnisse wurden nach Gewichten/PBS proportioniert.

• Biochemische Analysen: Die TNF-α-, IL-10-, NO- und PGE2-Spiegel in den Seren aller Patienten wurden im Mikroplatten-ELISA-Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) unter Verwendung der ELISA-Methode gemessen. Aufgrund der unzureichenden Probenmenge (100 µl) wurden im GCF mit demselben ELISA-Kit nur die NO- und PGE2-Spiegel gemessen.

Die TNF-α-, IL-10-, NO- und PGE2-Spiegel im Serum wurden mithilfe von ELISA-Platten analysiert, deren Vertiefungen mit Antikörpern (humanes TNF-α, IL-10, NO oder PGE2) vorbeschichtet waren. Die Empfindlichkeit der TNF-α-, IL-10-, NO- und PGE2-Testkits (Bioassay Technology Laboratory, China) beträgt 1,52 ng/L, 2,59 pg/ml, 1,12 µmol/L und 1,28 ng/L, Messbereich 3-900 ng /L, jeweils 5-1500 pg/ml, 2-600 µmol/L und 2-600 ng/L, der CV für alle Tests für Intraassay und Interassay betrug < 10 %.