Het belang van de synthese van prostaglandine en stikstofoxide bij apicale parodontitis

• Studieopzet Dit observationele, analytische, cross-sectionele onderzoek werd uitgevoerd in één enkel centrum. Om de geplande steekproefomvang te bereiken, werden ongeveer 1200 patiënten geregistreerd die zich tussen juni 2021 en mei 2022 hadden aangemeld bij de afdeling Endodontie van de universiteit xxxx vanwege apicale parodontitis (AP) en/of chronische parodontitis (CP), inclusief hun intra-orale onderzoek en demografische kenmerken. Als resultaat van het onderzoek werden 85 patiënten met alleen AP (AP-groep) en 50 patiënten met alleen CP (CP-groep), waarvan de diagnose werd bevestigd, in het onderzoek opgenomen. Patiënten met zowel AP als P werden uitgesloten van het onderzoek. Patiënten die in de afgelopen zes maanden antibiotica en/of ontstekingsremmende medicijnen hadden gebruikt en patiënten die zwanger waren of borstvoeding gaven, werden eveneens uitgesloten. Bovendien werden degenen met een voorgeschiedenis van het gebruik van steroïde of niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen en hoge doses biotinevitamine in de afgelopen 48 uur uitgesloten van het onderzoek, omdat dit de resultaten kan beïnvloeden. Een gezonde controlegroep van 50 vrijwilligers zonder parodontale pathologie en zonder enige acute/chronische ziekte (spier-, gewrichts-, botziekten, inflammatoire darmziekten, lokale of gegeneraliseerde infectie, ernstige orgaanziekten, hart- en vaatziekten en diabetes mellitus) werd in het onderzoek opgenomen. . Degenen die deel uitmaken van de onderzoeksgroepen; willekeurig geselecteerd uit mensen met vergelijkbare geslachts-, leeftijds- en gewichtskenmerken.
• Demografisch-klinische geschiedenis Geslacht, leeftijd, body mass index (BMI) en comorbiditeitsstatus van alle patiënten die aan het onderzoek deelnamen, werden geregistreerd. De bevindingen van de wortelkanaalbehandeling (RCT), tandkroon, composiet/amalgaamvullingen (CF) en het aantal ontbrekende tanden (NMT) van de patiënt werden verkregen als resultaat van intraoraal onderzoek.
• Periapicale en parodontale ziektescores Alle tanden in de mondholte werden geröntgend en de aanwezigheid van radiolucente beelden geassocieerd met het periapicale gebied en radiografisch botverlies werd beoordeeld. Panoramische röntgenfoto's werden in het onderzoek verkregen met behulp van een digitale panoramische eenheid (VistaPano S, Durr Dental AG, Duitsland), werkend bij 73 kVp en 10 mA met een belichtingstijd van 13.500 milliseconden in de standaardmodus. Voor periapicale röntgenfoto's werd het Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, VS) systeem gebruikt met een röntgenapparaat, instelling van 70 kV, 8 mA. Bij het verkrijgen van de periapicale beelden werd de halveringshoektechniek toegepast. Vervolgens werden de röntgenfoto's geanalyseerd met Kodak Dental Imaging Software. Op basis van radiografische evaluatie van de tanden werd de aanwezigheid van periapicale radiolucentie zonder parodontitis voldoende geacht voor AP-diagnose. Abcesscores (AS-PAI) op basis van de periapicale index werden uitgevoerd als indicator voor ziekteprogressie binnen de AP-groep. Voor deze scoring werd het periapicale index (PAI) scoringssysteem10 gebruikt, een scoringssysteem voor de radiografische evaluatie van apicale parodontitis. Dienovereenkomstig werd de AP-groep verdeeld in 3 subgroepen. AS-PAI 1 (mild): degenen met ten minste 1 tand met PAI 3 of PAI 4, AS-PAI 2 (matig): degenen met slechts 1 tand met een PAI 5, AS-PAI 3 (ernstig): degenen met twee of meer tanden met een PAI 5.

Parodontale metingen, verkregen voor het onderzoek, bestonden uit de hoogste sondeerdieptes (in millimeters) die werden geregistreerd rond zes geselecteerde tanden per deelnemer. In deze studie werd de CP-groep verdeeld in 4 subgroepen volgens het parodontitisstadiëringssysteem (PSS) (Tonetti). Dit systeem classificeert de parodontitis van I tot IV volgens het interdentale klinische hechtingsverlies (CAL), radiografische botverlies (RBL) en tandverlies. Deze score is als volgt: Fase 1: CAL 1 tot 2 mm, RBL bevindt zich op coronale derde (<15%) en geen tandverlies, Fase 2: CAL 3 tot 4 mm, RBL bevindt zich op coronale derde (15% tot 33% ) en geen tandverlies, Fase 3: CAL > 5 mm, RBL strekt zich uit tot halverwege een derde van de wortel en verder en tandverlies < 4 tanden, en Fase 4: CAL > 5 mm, RBL strekt zich uit tot halverwege een derde van de wortel en verder en tandverlies > 5 tanden. Fase 1 en 2 werden echter in dezelfde groep geëvalueerd vanwege het lage aantal gevallen. Als gevolg hiervan werden de groepen ontworpen als Fase 1-2: PSS 1-2, Fase 2: PSS 2 en Fase 3: PSS 3.

• Verzameling van veneus bloed en gingivale creviculaire vloeistof (GCF) Nuchter (8-10 uur) veneus bloed van alle deelnemers werd afgenomen uit de antecubitale/basisaders van de onderarm. Nadat het bloed 30 minuten op kamertemperatuur was gehouden, werd het 10 minuten bij 2500 x g gecentrifugeerd. Na centrifugatie werd het bovenste serum van de buizen gescheiden. Hemolyse-indices (HI) van de sera werden gemeten om optische interferentie te voorkomen. (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, VS). Degenen met een hemolyse-index groter dan 50 (mg/dl Hb) werden uitgesloten van het onderzoek. Geschikte sera werden tot de dag van analyse bij -80°C bewaard. Naast veneus bloed werden ook monsters van gingivale creviculaire vloeistof (GCF) verzameld en onder vergelijkbare omstandigheden bij -80oC bewaard. Op de dag van de analyse liet men alle serums en GCF eerst langzaam oplossen bij +4 oC en vervolgens vóór de meting op kamertemperatuur brengen.

Om contaminatie met bloed te voorkomen, werden monsters van gingivale creviculaire vloeistof genomen voorafgaand aan parodontaal sonderen. Om besmetting van het monster te voorkomen, werd de patiënten gevraagd gedurende ten minste 30 minuten vóór de procedure niets te eten of te drinken. Er werden drie monsters genomen van de mesiale, distale en buccale oppervlakken van verwante tanden. De geselecteerde plaatsen werden geïsoleerd met een wattenrol en supragingivale plaque, indien aanwezig, werd verwijderd met behulp van een curette om besmetting met speeksel en/of plaque te voorkomen. GCF werd gedurende 60 seconden verzameld met behulp van PerioPaper-strips (OraFlow Inc., NY, VS) die voorzichtig werden geplaatst totdat er lichte weerstand werd gevoeld. De drie monsters werden samengevoegd in Eppendorf-buisjes en vervolgens in de laboratoriumvriezer bij -80 °C geplaatst voor opslag. Periopapers werden grondig gewassen in eppendorfbuisjes van 0,5 ml (na aftrek van het tarragewicht van de buis) met 100 µl fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met behulp van een automatische pipet. Met bloed bevlekte papieren stroken werden uit de monsters verwijderd. Alle GCF-monsters werden gewogen op een precisiebalans (Shimadzu Libror, model AEG-220, Duitsland) en geregistreerd. Alle monsters werden grondig gemengd met een vortexapparaat van 15-20 seconden (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Duitsland). Hierdoor kon GCF overgaan in PBS. De papieren stroken werden verwijderd zonder de monsters te verontreinigen en het resterende extract werd tot de werkdag in de vriezer bewaard. De op de onderzoeksdag verkregen resultaten werden geproportioneerd op basis van gewichten/PBS.

• Biochemische analyses De TNF-α-, IL-10-, NO- en PGE2-niveaus in de sera van alle patiënten werden gemeten in de Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, VS) met behulp van de ELISA-methode. Vanwege de onvoldoende hoeveelheid monster (100 µl) werden alleen NO- en PGE2-niveaus gemeten in de GCF met behulp van dezelfde ELISA-kit.

Serum-TNF-a-, IL-10-, NO- en PGE2-niveaus werden geanalyseerd met behulp van ELISA-platen waarvan de putjes vooraf waren bekleed met antilichaam (humaan TNF-a, IL-10, NO of PGE2). De gevoeligheid van TNF-α-, IL-10-, NO- en PGE2-testkits (Bioassay Technology Laboratory, China) is 1,52 ng/l, 2,59 pg/ml, 1,12 µmol/l en 1,28 ng/l, meetbereik 3-900 ng /l, respectievelijk 5-1500 pg/ml, 2-600 µmol/l en 2-600 ng/l, CV voor alle tests voor intra- en inter-assay was < 10%.