Význam syntézy prostaglandinu a oxidu dusnatého u apikální parodontitidy

• Návrh studie Tato observační, analytická, průřezová studie byla provedena v jediném centru. Pro dosažení plánované velikosti vzorku bylo evidováno cca 1200 pacientů, kteří se v období od června 2021 do května 2022 přihlásili na Endodoncii univerzity xxxx pro apikální parodontitidu (AP) a/nebo chronickou parodontitidu (CP), včetně jejich intraorálního vyšetření a demografické charakteristiky. Na základě vyšetření bylo do studie zařazeno 85 pacientů pouze s AP (skupina AP) a 50 pacientů pouze s CP (skupina CP), u kterých byla potvrzena diagnóza. Pacienti s AP i P byli ze studie vyloučeni. Vyloučeni byli také pacienti, kteří během posledních 6 měsíců užívali antibiotika a/nebo protizánětlivé léky a těhotní nebo kojení. Kromě toho byli ze studie vyloučeni ti, kteří v posledních 48 hodinách užívali steroidní nebo nesteroidní protizánětlivé léky a vysoké dávky vitaminu biotin, protože to může ovlivnit výsledky. Do studie byla zahrnuta zdravá kontrolní skupina 50 dobrovolníků bez periodontální patologie a také s jakýmkoli akutním/chronickým onemocněním (onemocnění svalů/kloubů/ kostí, zánětlivé onemocnění střev, lokální nebo generalizovaná infekce, závažné onemocnění orgánů, kardiovaskulární onemocnění a diabetes mellitus). . Ti, kteří jsou součástí výzkumných skupin; náhodně vybrané z lidí s podobnými charakteristikami pohlaví, věku a hmotnosti.
• Demograficko-klinická anamnéza Bylo zaznamenáno pohlaví, věk, index tělesné hmotnosti (BMI), stav komorbidity všech pacientů účastnících se studie. Na základě intraorálního vyšetření byly u pacientů získány nálezy ošetření kořenového kanálku (RCT), zubní korunky, kompozitní/amalgámové výplně (CF), počet chybějících zubů (NMT).
• Hodnocení periapikálních a periodontálních onemocnění Všechny zuby přítomné v ústní dutině byly rentgenovány a byla hodnocena přítomnost radiolucentních obrazů souvisejících s periapikální oblastí a radiografickým úbytkem kostní hmoty. Panoramatické rentgenové snímky ve studii byly získány s použitím digitální panoramatické jednotky (VistaPano S, Durr Dental AG, Německo), pracující při 73 kVp a 10 mA s dobou expozice 13 500 milisekund ve standardním režimu. Pro periapikální rentgenové snímky byl použit systém Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) s rentgenovou jednotkou, nastavením 70 kV, 8 mA. Při získávání periapikálních snímků byla použita technika půlícího úhlu. Poté byly rentgenové snímky analyzovány pomocí softwaru Kodak Dental Imaging Software. Z radiografického hodnocení zubů byla přítomnost periapikální radiolucence bez parodontálního onemocnění považována za dostatečnou pro diagnostiku AP. Absces skórování (AS-PAI) na základě periapikálního indexu bylo provedeno jako indikátor progrese onemocnění v rámci skupiny AP. Pro toto skórování byl použit skórovací systém periapikálního indexu (PAI),10 což je skórovací systém pro radiografické hodnocení apikální parodontitidy. Podle toho byla skupina AP rozdělena do 3 podskupin. AS-PAI 1 (mírné): ty, které mají alespoň 1 zub s PAI 3 nebo PAI 4, AS-PAI 2 (střední): ty, které mají pouze 1 zub s PAI 5, AS-PAI 3 (těžké): ty, které mají dva nebo více zubů s PAI 5.

Parodontální měření získaná pro studii sestávala z nejvyšších hloubek sondování (v milimetrech) zaznamenaných kolem šesti vybraných zubů na účastníka. V této studii byla skupina CP rozdělena do 4 podskupin podle systému stagingu periodontitis (PSS) (Tonetti). Tento systém klasifikuje parodontitidu od I do IV podle ztráty mezizubního úponu (CAL), radiografické ztráty kosti (RBL) a ztráty zubu. Toto hodnocení je následující: Fáze 1: CAL 1 až 2 mm, RBL je na koronální třetině (<15 %) a žádná ztráta zubu, Fáze 2: CAL 3 až 4 mm, RBL je na koronální třetině (15 % až 33 % ) a žádná ztráta zubu, fáze 3: CAL > 5 mm, RBL se rozšiřuje do poloviny kořene a dále a ztráta zubu < 4 zuby, a fáze 4: CAL > 5 mm, RBL se rozšiřuje do poloviny kořene a dále a ztráta zubů > 5 zubů. Nicméně fáze 1 a 2 byly hodnoceny ve stejné skupině kvůli nízkému počtu případů. V důsledku toho byly skupiny navrženy jako Stage 1-2: PSS 1-2, Stage 2: PSS 2 a Stage 3: PSS 3.

• Odběr žilní krve a gingivální krevikulární tekutiny (GCF) Nalačno (8-10 hodin) všem účastníkům byla odebrána venózní krev z předloktí antekubitálních/základních žil. Poté, co byla krev udržována při teplotě místnosti po dobu 30 minut, byla centrifugována při 2500 xg po dobu 10 minut. Po odstředění bylo horní sérum zkumavek odděleno. Aby se zabránilo optické interferenci, byly měřeny indexy hemolýzy (HI) sér. (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). Pacienti s indexem hemolýzy vyšším než 50 (mg/dl Hb) byli ze studie vyloučeni. Vhodná séra byla skladována při -80 °C až do dne analýzy. Kromě žilní krve byly odebrány také vzorky gingivální krevikulární tekutiny (GCF), které byly skladovány při -80oC za podobných podmínek. V den analýzy se všechna séra a GCF nejprve nechaly pomalu rozpustit při +4 oC a poté byly před měřením přivedeny na pokojovou teplotu.

Vzorky gingivální štěrbinové tekutiny byly odebrány před periodontálním sondováním, aby se zabránilo kontaminaci krví. Aby se zabránilo kontaminaci vzorku, byli pacienti požádáni, aby alespoň 30 minut před výkonem nic nejedli ani nepili. Byly odebrány tři vzorky z meziálního, distálního a bukálního povrchu příbuzného zubu. Vybraná místa byla izolována smotkem bavlny a supragingivální plak, pokud byl přítomen, byl odstraněn pomocí kyrety, aby se zabránilo kontaminaci slinami a/nebo plakem. GCF byl shromažďován po dobu 60 sekund pomocí proužků PerioPaper (OraFlow Inc., NY, USA) umístěných jemně, dokud nebyl pociťován mírný odpor. Tyto tři vzorky byly spojeny do Eppendorfových zkumavek a poté umístěny do laboratorního mrazáku při -80 °C pro skladování. Periopapery byly důkladně promyty v 0,5 ml eppendorfových zkumavkách (po odečtení vlastní hmotnosti zkumavky) se 100 ul fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) pomocí automatické pipety. Ze vzorků byly odstraněny krví potřísněné papírové proužky. Všechny vzorky GCF byly zváženy na přesných vahách (Shimadzu Libror, Model AEG-220, Německo) a zaznamenány. Všechny vzorky byly důkladně promíchány 15-20 sekundovým vortexovým zařízením (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Německo). To umožnilo GCF přejít do PBS. Papírové proužky byly odstraněny, aniž by došlo ke kontaminaci vzorků a zbývající extrakt byl uložen do mrazáku do pracovního dne. Výsledky získané v den studie byly úměrné hmotnosti/PBS.

• Biochemické analýzy Hladiny TNF-α, IL-10, NO a PGE2 v séru všech pacientů byly měřeny v Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) metodou ELISA. Vzhledem k nedostatečnému množství vzorku (100 µl) byly v GCF měřeny pouze hladiny NO a PGE2 pomocí stejné soupravy ELISA.

Hladiny TNF-a, IL-10, NO a PGE2 v séru byly analyzovány pomocí destiček ELISA, jejichž jamky byly předem potaženy protilátkou (lidský TNF-a, IL-10, NO nebo PGE2). Citlivost testovacích souprav TNF-α, IL-10, NO a PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, Čína) je 1,52 ng/l, 2,59 pg/ml, 1,12 µmol/l a 1,28 ng/l, rozsah měření 3-900 ng /l, v tomto pořadí, 5-1500 pg/ml, 2-600 umol/la 2-600 ng/l, CV pro všechny testy pro intraassay a interassay byly < 10 %.