Znaczenie syntezy prostaglandyny i tlenku azotu w wierzchołkowym zapaleniu przyzębia

• Projekt badania To obserwacyjne, analityczne, przekrojowe badanie przeprowadzono w jednym ośrodku. Aby osiągnąć planowaną wielkość próby, zarejestrowano około 1200 pacjentów, którzy zgłosili się do Katedry Endodoncji Uniwersytetu xxxx w okresie od czerwca 2021 r. do maja 2022 r. z powodu wierzchołkowego zapalenia przyzębia (AP) i/lub przewlekłego zapalenia przyzębia (CP), łącznie z badaniem wewnątrzustnym i cechy demograficzne. W wyniku badania do badania włączono 85 pacjentów z samym AP (grupa AP) i 50 pacjentów z samym CP (grupa CP), u których potwierdzono rozpoznanie. Z badania wyłączono pacjentów mających zarówno AP, jak i P. Wykluczono także pacjentów, którzy przyjmowali antybiotyki i/lub leki przeciwzapalne w ciągu ostatnich 6 miesięcy oraz osoby w ciąży lub karmiące piersią. Ponadto z badania wykluczono osoby, które w przeszłości stosowały steroidowe lub niesteroidowe leki przeciwzapalne oraz duże dawki witaminy biotyny w ciągu ostatnich 48 godzin, ponieważ może to mieć wpływ na wyniki. Do badania włączono zdrową grupę kontrolną składającą się z 50 ochotników, u których nie stwierdzono patologii przyzębia ani żadnej ostrej/przewlekłej choroby (choroby mięśni/stawów/kości, nieswoiste zapalenie jelit, zakażenie miejscowe lub uogólnione, ciężkie choroby narządów, choroby układu krążenia i cukrzyca). . Osoby zaliczone do grup badawczych; losowo wybranych spośród osób o podobnej płci, wieku i wadze.
• Historia demograficzno-kliniczna U wszystkich pacjentów biorących udział w badaniu rejestrowano płeć, wiek, wskaźnik masy ciała (BMI) oraz stan chorób współistniejących. W badaniu wewnątrzustnym uzyskano wyniki leczenia kanałowego (RCT), korony zębowej, wypełnień kompozytowo-amalgamatowych (CF), liczby brakujących zębów (NMT).
• Ocena chorób okołowierzchołkowych i przyzębia Wszystkie zęby obecne w jamie ustnej poddano radiogramowi i oceniano obecność radiologicznych obrazów związanych z okolicą okołowierzchołkową oraz radiologiczną utratę kości. Zdjęcia panoramiczne użyte w badaniu wykonano przy użyciu cyfrowego aparatu panoramicznego (VistaPano S, Durr Dental AG, Niemcy), pracującego przy napięciu 73 kVp i 10 mA przy czasie ekspozycji 13500 milisekund w trybie standardowym. Do radiogramów okołowierzchołkowych stosowano system Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, Kalifornia, USA) z aparatem rentgenowskim ustawionym na 70 kV, 8 mA. Do uzyskania obrazów okołowierzchołkowych zastosowano technikę kąta dwusiecznego. Następnie zdjęcia rentgenowskie poddano analizie za pomocą oprogramowania Kodak Dental Imaging Software. Na podstawie oceny radiologicznej zębów obecność przejaśnienia okołowierzchołkowego bez chorób przyzębia uznano za wystarczającą do rozpoznania AP. Jako wskaźnik postępu choroby w grupie AP przeprowadzono ocenę ropnia (AS-PAI) na podstawie wskaźnika okołowierzchołkowego. Do tej oceny zastosowano system punktacji wskaźnika okołowierzchołkowego (PAI),10 który jest systemem punktacji służącym do radiograficznej oceny zapalenia przyzębia wierzchołka. W związku z tym grupę AP podzielono na 3 podgrupy. AS-PAI 1 (łagodny): osoby posiadające co najmniej 1 ząb z PAI 3 lub PAI 4, AS-PAI 2 (umiarkowany): osoby posiadające tylko 1 ząb z PAI 5, AS-PAI 3 (ciężki): osoby mające dwa lub więcej zębów z PAI 5.

Pomiary przyzębia uzyskane na potrzeby badania obejmowały największe głębokości sondowania (w milimetrach) zarejestrowane wokół sześciu wybranych zębów na uczestnika. W tym badaniu grupę CP podzielono na 4 podgrupy zgodnie z systemem oceny stopnia zaawansowania zapalenia przyzębia (PSS) (Tonetti). System ten klasyfikuje zapalenie przyzębia od I do IV na podstawie klinicznej utraty przyczepu międzyzębowego (CAL), radiograficznej utraty kości (RBL) i utraty zębów. Ocena ta jest następująca: Etap 1: CAL 1 do 2 mm, RBL znajduje się w trzeciej części koronowej (<15%) i brak utraty zębów, Etap 2: CAL 3 do 4 mm, RBL znajduje się w trzeciej części koronowej (15% do 33% ) i brak utraty zębów, Etap 3: CAL > 5 mm, RBL sięga do połowy trzeciej korzenia i dalej oraz utrata zęba < 4 zębów, i Etap 4: CAL > 5 mm, RBL sięga do połowy trzeciej korzenia i dalej oraz utrata zębów > 5 zębów. Jednakże etapy 1 i 2 oceniano w tej samej grupie ze względu na małą liczbę przypadków. W rezultacie grupy zostały zaprojektowane jako Etap 1-2: PSS 1-2, Etap 2: PSS 2 i Etap 3: PSS 3.

• Pobieranie krwi żylnej i płynu zębodołowego (GCF) Na czczo (8-10 godzin) od wszystkich uczestników pobierano krew żylną z żyły łokciowej/podstawowej przedramienia. Po przetrzymywaniu krwi w temperaturze pokojowej przez 30 minut, odwirowano ją przy 2500 xg przez 10 minut. Po odwirowaniu oddzielono górną surowicę z probówek. Zmierzono wskaźniki hemolizy (HI) surowic, aby zapobiec zakłóceniom optycznym. (Analizator chemiczny Cobas 8000, USA). Z badania wyłączono osoby ze wskaźnikiem hemolizy większym niż 50 (mg/dl Hb). Odpowiednie surowice do dnia analizy przechowywano w temperaturze -80oC. Oprócz krwi żylnej pobrano także próbki płynu dziąsłowo-szczelinowego (GCF), które przechowywano w podobnych warunkach w temperaturze -80oC. W dniu analizy wszystkie surowice i GCF pozostawiono do powolnego rozpuszczenia w temperaturze +4 oC, a następnie przed pomiarem doprowadzono do temperatury pokojowej.

Przed badaniem periodontologicznym pobrano próbki płynu dziąsłowego, aby uniknąć zanieczyszczenia krwią. Aby uniknąć zanieczyszczenia próbki, pacjentów proszono o niejedzenie i picie czegokolwiek przez co najmniej 30 minut przed zabiegiem. Pobrano trzy próbki z powierzchni mezjalnej, dystalnej i policzkowej powiązanego zęba. Wybrane miejsca izolowano wacikiem i usuwano płytkę naddziąsłową, jeśli była obecna, za pomocą łyżeczki, aby zapobiec zanieczyszczeniu śliną i/lub płytką nazębną. GCF zbierano przez 60 sekund przy użyciu pasków PerioPaper (OraFlow Inc., NY, USA) umieszczonych delikatnie aż do wyczucia lekkiego oporu. Trzy próbki połączono w probówkach Eppendorfa, a następnie umieszczono w zamrażarce laboratoryjnej w temperaturze -80°C w celu przechowywania. Periopapiery dokładnie przemyto w 0,5 ml eppendorf Tubes (po odjęciu tary probówki) 100 µl soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) za pomocą automatycznej pipety. Z próbek usunięto zakrwawione paski papieru. Wszystkie próbki GCF zważono na wadze precyzyjnej (Shimadzu Libror, model AEG-220, Niemcy) i zarejestrowano. Wszystkie próbki dokładnie wymieszano za pomocą 15-20 sekundowego urządzenia wirowego (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Niemcy). Umożliwiło to przedostanie się GCF do PBS. Paski papieru usunięto bez zanieczyszczania próbek, a pozostały ekstrakt przechowywano w zamrażarce do dnia roboczego. Wyniki otrzymane w dniu badania podzielono według masy/PBS.

• Analizy biochemiczne Poziomy TNF-α, IL-10, NO i PGE2 w surowicy wszystkich pacjentów mierzono za pomocą czytnika Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) metodą ELISA. Ze względu na niewystarczającą ilość próbki (100 µl) w GCF mierzono jedynie poziomy NO i PGE2 przy użyciu tego samego zestawu ELISA.

Poziomy TNF-α, IL-10, NO i PGE2 w surowicy analizowano przy użyciu płytek ELISA, których studzienki wstępnie opłaszczono przeciwciałem (ludzkim TNF-α, IL-10, NO lub PGE2). Czułość zestawów testowych TNF-α, IL-10, NO i PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, Chiny) wynosi 1,52 ng/L, 2,59 pg/ml, 1,12 µmol/L i 1,28 ng/L, zakres pomiarowy 3-900 ng /l, odpowiednio 5-1500 pg/ml, 2-600 µmol/l i 2-600 ng/l, CV dla wszystkich testów wewnątrz i między testami wynosiło < 10%.