A prosztaglandin és a nitrogén-oxid szintézis jelentősége apikális periodontitisben

• A vizsgálat tervezése Ezt a megfigyelési, analitikus, keresztmetszeti vizsgálatot egyetlen központban végezték. A tervezett mintanagyság elérése érdekében kb. 1200 olyan beteg felvételére került sor, akik 2021 júniusa és 2022 májusa között apikális parodontitis (AP) és/vagy krónikus periodontitis (CP) miatt jelentkeztek a xxxx egyetem Endodontia Klinikájára, beleértve az intraorális vizsgálatot, ill. demográfiai jellemzők. A vizsgálat eredményeként 85 csak AP-ban (AP csoport) és 50 csak CP-ben (CP csoport) szenvedő beteget vontunk be a vizsgálatba, akiknek a diagnózisa igazolódott. Az AP-vel és P-vel rendelkező betegeket kizárták a vizsgálatból. Szintén kizárták azokat a betegeket, akik az elmúlt 6 hónapban antibiotikumot és/vagy gyulladáscsökkentő szert szedtek, valamint azokat, akik terhesek vagy szoptattak. Ezenkívül kizárták a vizsgálatból azokat, akik az elmúlt 48 órában szteroid vagy nem szteroid gyulladáscsökkentő szereket és nagy dózisú biotin-vitamint használtak, mivel ez befolyásolhatja az eredményeket. A vizsgálatba 50 önkéntesből álló egészséges kontrollcsoportot vontak be, akik nem szenvedtek parodontális patológiát, valamint bármilyen akut/krónikus betegséget (izom-/ízületi/csontbetegségek, gyulladásos bélbetegség, lokális vagy generalizált fertőzés, súlyos szervi betegség, szív- és érrendszeri betegség és diabetes mellitus). . A kutatócsoportokba bevontak; véletlenszerűen választottak ki hasonló nemű, korú és súlyú emberek közül.
• Demográfiai-klinikai anamnézis A vizsgálatban részt vevő összes beteg nemét, életkorát, testtömeg-indexét (BMI), komorbiditási állapotát rögzítették. A betegek gyökérkezelése (RCT), fogkorona, kompozit/amalgám tömés (CF), hiányzó fogak száma (NMT) intraorális vizsgálat eredményeként került megállapításra.
• Periapikális és periodontális betegségek pontozása A szájüregben lévő összes fogat röntgenfelvételen vettük fel, és megvizsgáltuk a periapikális régióhoz kapcsolódó radiolucens képek jelenlétét és a radiográfiás csontvesztést. A tanulmányban a panoráma röntgenfelvételeket egy digitális panorámaegységgel (VistaPano S, Durr Dental AG, Németország) készítették, amely 73 kVp-n és 10 mA-en működött, 13500 ezredmásodperces expozíciós idővel normál módban. A periapikális röntgenfelvételekhez Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) rendszert használtunk röntgenegységgel, 70 kV, 8 mA beállítással. A periapikális képek készítésénél a felező szög technikát alkalmaztuk. Ezután a röntgenfelvételeket a Kodak Dental Imaging Software szoftverrel elemezték. A fogak radiográfiás értékelése alapján a periapikális radiolucencia jelenlétét periodontális betegség nélkül elegendőnek tekintették az AP diagnózisához. A periapikális indexen alapuló tályog pontozást (AS-PAI) végeztük a betegség progressziójának indikátoraként az AP csoporton belül. Ehhez a pontozáshoz a periapikális index (PAI) pontozási rendszert10 alkalmaztuk, amely az apikális periodontitis radiográfiás értékelésének pontozása. Ennek megfelelően az AP csoportot 3 alcsoportra osztották. AS-PAI 1 (enyhe): akiknek legalább 1 PAI 3 vagy PAI 4 foga van, AS-PAI 2 (közepes): csak 1 PAI 5-ös foguk van, AS-PAI 3 (súlyos): akiknek két vagy több fog PAI 5-tel.

A vizsgálathoz kapott periodontális mérések a legnagyobb szondázási mélységet (milliméterben) tartalmazták, résztvevőnként körülbelül hat kiválasztott fogat. Ebben a vizsgálatban a CP csoportot 4 alcsoportra osztották a periodontitis stádiumrendszer (PSS) szerint (Tonetti). Ez a rendszer a parodontitist I-től IV-ig osztályozza az interdentális klinikai tapadás elvesztése (CAL), a radiográfiai csontvesztés (RBL) és a fogvesztés szerint. Ez a pontozás a következő: 1. szakasz: CAL 1-2 mm, RBL a koronális harmadnál van (<15%) és nincs fogvesztés, 2. szakasz: CAL 3-4 mm, RBL a koronális harmadnál (15% - 33% ) és nincs fogvesztés, 3. szakasz: CAL > 5 mm, az RBL a gyökér közepéig és azon túl is, és a fogvesztés < 4 fog, és 4. szakasz: CAL > 5 mm, az RBL a gyökér közepéig terjed és azon túl és a fogvesztés > 5 fog. Az 1. és 2. szakaszt azonban ugyanabban a csoportban értékelték az esetek alacsony száma miatt. Ennek eredményeként a csoportokat 1-2. szakaszként tervezték: PSS 1-2, 2. szakasz: PSS 2 és 3. szakasz: PSS 3.

• Vénás vér és Gingival Crevicular Fluid (GCF) vétele Az összes résztvevő éhgyomri (8-10 óra) vénás vérét az alkar antecubitalis/alapvénából vettük. Miután a vért 30 percig szobahőmérsékleten tartottuk, 2500 xg-vel 10 percig centrifugáltuk. Centrifugálás után a csövek felső szérumát elválasztottuk. Az optikai interferencia elkerülése érdekében megmértük a szérumok hemolízis indexeit (HI). (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). Az 50 (mg/dl Hb) feletti hemolízis indexűeket kizárták a vizsgálatból. A megfelelő szérumokat -80 oC-on tároltuk az elemzés napjáig. A vénás vér mellett gingiva crevicularis folyadék (GCF) mintákat is gyűjtöttünk, amelyeket -80oC-on tároltunk hasonló körülmények között. Az analízis napján először az összes szérumot és a GCF-et hagytuk lassan feloldódni +4 oC-on, majd mérés előtt szobahőmérsékletre hoztuk.

A fogíny résfolyadékából mintákat vettünk a parodontális szondázás előtt, hogy elkerüljük a vérrel való szennyeződést. A minta szennyeződésének elkerülése érdekében a betegeket arra kérték, hogy az eljárás előtt legalább 30 percig ne egyenek vagy igyanak semmit. Három mintát vettünk a rokon fog meziális, disztális és bukkális felületéről. A kiválasztott helyeket pamuttekerccsel izoláltuk, és a szupragingivális plakkot, ha jelen volt, küret segítségével eltávolítottuk, hogy megakadályozzuk a nyál- és/vagy plakkszennyeződést. A GCF-et 60 másodpercig gyűjtöttük PerioPaper csíkokkal (OraFlow Inc., NY, USA), amelyeket óvatosan helyeztünk el, amíg enyhe ellenállást nem éreztünk. A három mintát Eppendorf-csövekbe egyesítettük, majd -80 °C-os laboratóriumi fagyasztóba helyeztük tárolásra. A periopapírokat 0,5 ml-es eppendorf-csövekben (a cső tára tömegének levonása után) 100 µl foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) automata pipettával alaposan mostuk. A mintákról vérfoltos papírcsíkokat távolítottak el. Az összes GCF-mintát precíziós mérlegen (Shimadzu Libror, AEG-220 modell, Németország) lemértük és feljegyeztük. Minden mintát alaposan összekevertünk egy 15-20 másodperces vortex készülékkel (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Németország). Ez lehetővé tette a GCF átjutását a PBS-be. A papírcsíkokat a minták szennyeződése nélkül eltávolítottuk és a maradék kivonatot a munkanapig fagyasztóban tároltuk. A vizsgálati napon kapott eredményeket tömeg/PBS arányban határoztuk meg.

• Biokémiai elemzések Az összes beteg szérumában a TNF-α, IL-10, NO és PGE2 szinteket Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) készülékkel ELISA módszerrel mértük. A nem elegendő mintamennyiség (100 µl) miatt a GCF-ben csak NO és PGE2 szinteket mértünk ugyanazzal az ELISA kittel.

A szérum TNF-α, IL-10, NO és PGE2 szinteket ELISA lemezek segítségével elemeztük, amelyek üregeit előzetesen antitesttel (humán TNF-α, IL-10, NO vagy PGE2) vontuk be. A TNF-α, IL-10, NO és PGE2 tesztkészletek (Bioassay Technology Laboratory, Kína) érzékenysége 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L és 1,28 ng/L, mérési tartomány 3-900 ng /L, 5-1500 pg/ml, 2-600 µmol/L és 2-600 ng/L, a CV az összes intraassay és interassay teszt esetében <10% volt.