L'importanza della sintesi di prostaglandine e ossido nitrico nella parodontite apicale

• Disegno dello studio Questo studio osservazionale, analitico e trasversale è stato condotto in un unico centro. Per raggiungere la dimensione del campione pianificato, sono stati registrati circa 1200 pazienti che si sono rivolti al Dipartimento di Endodonzia dell'Università xxxx tra giugno 2021 e maggio 2022 a causa di parodontite apicale (AP) e/o parodontite cronica (CP), incluso il loro esame intraorale e caratteristiche demografiche. Come risultato dell'esame, sono stati inclusi nello studio 85 pazienti con solo AP (gruppo AP) e 50 pazienti con solo CP (gruppo CP), la cui diagnosi è stata confermata. I pazienti che avevano sia AP che P sono stati esclusi dallo studio. Sono stati esclusi anche i pazienti che avevano assunto antibiotici e/o farmaci antinfiammatori negli ultimi 6 mesi e quelli in gravidanza o allattamento. Inoltre, quelli con una storia di utilizzo di farmaci antinfiammatori steroidei o non steroidei e di vitamina biotina ad alte dosi nelle ultime 48 ore sono stati esclusi dallo studio, poiché ciò potrebbe influenzare i risultati. Nello studio è stato incluso un gruppo di controllo sano di 50 volontari senza patologia parodontale né alcuna malattia acuta/cronica (malattie muscolari/articolari/ossee, malattie infiammatorie intestinali, infezioni locali o generalizzate, gravi malattie d'organo, malattie cardiovascolari e diabete mellito). . Quelli inclusi nei gruppi di ricerca; selezionati casualmente da persone con caratteristiche simili di sesso, età e peso.
• Anamnesi demografico-clinica Sono stati registrati sesso, età, indice di massa corporea (BMI), stato di comorbilità di tutti i pazienti partecipanti allo studio. I risultati del trattamento canalare dei pazienti (RCT), della corona dentale, delle otturazioni in composito/amalgama (CF), del numero di denti mancanti (NMT) sono stati ottenuti come risultato dell'esame intraorale.
• Punteggio della malattia periapicale e parodontale Tutti i denti presenti nella cavità orale sono stati radiografati ed è stata valutata la presenza di immagini radiotrasparenti associate alla regione periapicale e alla perdita ossea radiografica. Le radiografie panoramiche, nello studio, sono state ottenute utilizzando un'unità panoramica digitale (VistaPano S, Durr Dental AG, Germania), funzionante a 73 kVp e 10 mA con tempo di esposizione di 13500 millisecondi in modalità standard. Per le radiografie periapicali è stato utilizzato il sistema Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) con un'unità radiografica, impostazione di 70 kV, 8 mA. Per ottenere le immagini periapicali è stata applicata la tecnica dell'angolo bisecante. Successivamente, le radiografie sono state analizzate con il software Kodak Dental Imaging. Dalla valutazione radiografica dei denti, la presenza di radiolucenza periapicale senza malattia parodontale è stata considerata sufficiente per la diagnosi di AP. Il punteggio dell'ascesso (AS-PAI) basato sull'indice periapicale è stato eseguito come indicatore della progressione della malattia all'interno del gruppo AP. Per questo punteggio è stato utilizzato il sistema di punteggio dell'indice periapicale (PAI),10 che è un sistema di punteggio per la valutazione radiografica della parodontite apicale. Di conseguenza, il gruppo AP è stato diviso in 3 sottogruppi. AS-PAI 1 (lieve): chi ha almeno 1 dente con PAI 3 o PAI 4, AS-PAI 2 (moderato): chi ha solo 1 dente con PAI 5, AS-PAI 3 (grave): chi ha due o più denti con un PAI 5.

Le misurazioni parodontali, ottenute per lo studio, consistevano nelle massime profondità di sondaggio (in millimetri) registrate intorno a sei denti selezionati per partecipante. In questo studio, il gruppo CP è stato suddiviso in 4 sottogruppi secondo il sistema di stadiazione della parodontite (PSS) (Tonetti). Questo sistema classifica la parodontite da I a IV in base alla perdita di attacco clinico interdentale (CAL), alla perdita ossea radiografica (RBL) e alla perdita dei denti. Questo punteggio è il seguente: Stadio 1: CAL da 1 a 2 mm, RBL è al terzo coronale (<15%) e nessuna perdita dei denti, Stadio 2: CAL da 3 a 4 mm, RBL è al terzo coronale (da 15% a 33%) ) e nessuna perdita dei denti, Stadio 3: CAL > 5 mm, RBL si estende fino alla metà del terzo della radice e oltre e perdita dei denti < 4 denti, e Stadio 4: CAL > 5 mm, RBL si estende fino alla metà del terzo della radice e oltre e perdita dei denti > 5 denti. Tuttavia, gli stadi 1 e 2 sono stati valutati nello stesso gruppo a causa del basso numero di casi. Di conseguenza, i gruppi sono stati progettati come Fase 1-2: PSS 1-2, Fase 2: PSS 2 e Fase 3: PSS 3.

• Raccolta del sangue venoso e del fluido crevicolare gengivale (GCF). Il sangue venoso a digiuno (8-10 ore) di tutti i partecipanti è stato prelevato dalle vene antecubitali/fondamentali dell'avambraccio. Dopo aver mantenuto il sangue a temperatura ambiente per 30 minuti, è stato centrifugato a 2500 xg per 10 minuti. Dopo la centrifugazione il siero superiore delle provette è stato separato. Sono stati misurati gli indici di emolisi (HI) dei sieri per prevenire interferenze ottiche. (Analizzatore chimico Cobas 8000, USA). Sono stati esclusi dallo studio i soggetti con indice di emolisi superiore a 50 (mg/dl Hb). I sieri appropriati sono stati conservati a -80°C fino al giorno dell'analisi. Oltre al sangue venoso, sono stati raccolti anche campioni di fluido crevicolare gengivale (GCF), che sono stati conservati a -80°C in condizioni simili. Il giorno dell'analisi, tutti i sieri e il GCF sono stati prima lasciati sciogliere lentamente a +4 oC e poi portati a temperatura ambiente prima della misurazione.

Prima del sondaggio parodontale sono stati prelevati campioni di fluido crevicolare gengivale per evitare la contaminazione con sangue. Per evitare la contaminazione del campione, ai pazienti è stato chiesto di non mangiare né bere nulla per almeno 30 minuti prima della procedura. Sono stati prelevati tre campioni dalle superfici mesiale, distale e vestibolare del dente correlato. I siti selezionati sono stati isolati con un rullo di cotone e la placca sopragengivale, se presente, è stata rimossa utilizzando una curette per prevenire la contaminazione con saliva e/o placca. GCF è stato raccolto per 60 secondi utilizzando strisce PerioPaper (OraFlow Inc., NY, USA) posizionate delicatamente finché non si è avvertita una leggera resistenza. I tre campioni sono stati riuniti in provette Eppendorf e poi posti nel congelatore da laboratorio a -80°C per la conservazione. I Periopaper sono stati lavati accuratamente in provette eppendorf da 0,5 ml (dopo aver sottratto la tara della provetta) con 100 µl di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) utilizzando una pipetta automatica. Dai campioni sono state rimosse le strisce di carta macchiate di sangue. Tutti i campioni GCF sono stati pesati su una bilancia di precisione (Shimadzu Libror, modello AEG-220, Germania) e registrati. Tutti i campioni sono stati accuratamente miscelati con un dispositivo a vortice per 15-20 secondi (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Germania). Ciò ha consentito a GCF di passare a PBS. Le strisce di carta sono state rimosse senza contaminare i campioni e l'estratto rimanente è stato conservato nel congelatore fino al giorno lavorativo. I risultati ottenuti il ​​giorno dello studio sono stati proporzionati in base al peso/PBS.

• Analisi biochimiche I livelli di TNF-α, IL-10, NO e PGE2 nei sieri di tutti i pazienti sono stati misurati nel lettore ELISA per micropiastre (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) utilizzando il metodo ELISA. A causa della quantità insufficiente di campione (100 µl), nel GCF sono stati misurati solo i livelli di NO e PGE2 utilizzando lo stesso kit ELISA.

I livelli sierici di TNF-α, IL-10, NO e PGE2 sono stati analizzati utilizzando piastre ELISA i cui pozzetti erano pre-rivestiti con anticorpo (TNF-α, IL-10, NO o PGE2 umano). La sensibilità dei kit di test TNF-α, IL-10, NO e PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, Cina) è 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L e 1,28 ng/L, intervallo di misurazione 3-900 ng /L, rispettivamente, 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L e 2-600 ng/L, il CV per tutti i test intrasaggio e intersaggio era < 10%.