前列腺素和一氧化氮合成在根尖周炎中的重要性

• 研究设计 这项观察性、分析性、横断面研究是在一个中心进行的。 为了达到计划的样本量，对2021年6月至2022年5月期间因根尖周炎（AP）和/或慢性牙周炎（CP）申请到xxxx大学牙髓科就诊的约1200名患者进行了记录，包括他们的口内检查和治疗情况。人口特征。 检查结果，确诊的85例仅患有AP的患者（AP组）和50例仅患有CP的患者（CP组）被纳入研究。 同时患有 AP 和 P 的患者被排除在研究之外。 过去6个月内服用过抗生素和/或抗炎药物的患者以及妊娠或哺乳期患者也被排除。 此外，过去48小时内有使用类固醇或非类固醇抗炎药以及大剂量生物素维生素史的人被排除在研究之外，因为这可能会影响结果。 该研究纳入了由 50 名无牙周病理以及任何急/慢性疾病（肌肉/关节/骨骼疾病、炎症性肠病、局部或全身感染、严重器官疾病、心血管疾病和糖尿病）的志愿者组成的健康对照组。 。 研究小组中的人员；从具有相似性别、年龄和体重特征的人中随机选择。
• 人口统计-临床史记录参与研究的所有患者的性别、年龄、体重指数（BMI）、合并症状况。 通过口内检查获得患者的根管治疗（RCT）、牙冠、复合材料/汞合金填充物（CF）、缺失牙齿数量（NMT）结果。
• 根尖周和牙周疾病评分对口腔中存在的所有牙齿进行射线照相，并评估与根尖周区域相关的射线可透图像的存在和射线照相骨损失。 在该研究中，全景射线照片是使用数字全景装置（VistaPano S，Durr Dental AG，德国）获得的，在标准模式下以 73kVp 和 10 mA 运行，曝光时间为 13500 毫秒。 对于根尖周放射线照片，Carestream RVG 5200（RVG；Carestream Health Inc，亚特兰大，加利福尼亚州，美国）系统与 X 射线装置一起使用，设置为 70 kV、8 mA。 应用平分角技术来获得根尖周图像。 然后，用柯达牙科成像软件分析射线照片。 根据牙齿的射线照相评估，根尖周射线可透且无牙周病的存在被认为足以诊断 AP。 基于根尖指数的脓肿评分（AS-PAI）被用作 AP 组内疾病进展的指标。 对于该评分，使用了根尖指数（PAI）评分系统10，这是用于根尖周炎的放射学评估的评分系统。 因此，AP组被分为3个亚组。 AS-PAI 1（轻度）：至少有 1 颗牙齿患有 PAI 3 或 PAI 4，AS-PAI 2（中度）：只有 1 颗牙齿患有 PAI 5，AS-PAI 3（重度）：患有 PAI 3 或 PAI 4 的人两颗或更多带有 PAI 5 的牙齿。

该研究获得的牙周测量值包括每个参与者在六颗选定牙齿周围记录的最高探测深度（以毫米为单位）。 本研究中，根据牙周炎分期系统（PSS）（Tonetti）将CP组分为4个亚组。 该系统根据牙间临床附着丧失（CAL）、放射线骨丧失（RBL）和牙齿脱落将牙周炎分为I至IV级。 该评分如下：第 1 阶段：CAL 1 至 2 毫米，RBL 位于第三冠状位（<15%）且无牙齿脱落，第 2 阶段：CAL 3 至 4 毫米，RBL 位于第三冠状位（15% 至 33%） ）且无牙齿脱落，第 3 阶段：CAL > 5 毫米，RBL 延伸至牙根的中三分之一及以上，牙齿脱落 < 4 颗牙齿，第 4 阶段：CAL > 5 毫米，RBL 延伸至牙根的中三分之一及以上，牙齿脱落 > 5 颗牙齿。 然而，由于病例数较少，第一阶段和第二阶段在同一组中进行评估。 因此，各组被设计为阶段 1-2：PSS 1-2、阶段 2：PSS 2 和阶段 3：PSS 3。

• 静脉血和龈沟液(GCF) 的采集 所有参与者禁食（8-10 小时）从前臂肘前/基底静脉采集静脉血。 将血液在室温下保持30分钟后，将其以2500xg离心10分钟。 离心后，分离管的上层血清。 测量血清的溶血指数（HI）以防止光学干扰。 （Cobas 8000 化学分析仪，美国）。 溶血指数大于 50 (mg/dl Hb) 的患者被排除在研究之外。 适当的血清保存在-80℃直至分析当天。 除静脉血外，还采集龈沟液（GCF）样本，并在类似条件下于-80℃保存。 分析当天，首先让所有血清和 GCF 在 +4 oC 下缓慢溶解，然后在测量前恢复至室温。

在牙周探查之前采集龈沟液样本以避免血液污染。 为了避免样本污染，要求患者在手术前至少 30 分钟内不要吃或喝任何东西。 从相关牙齿的近中、远中和颊面采集三个样本。 用棉卷隔离选定的部位，并使用刮匙去除龈上菌斑（如果存在）以防止唾液和/或菌斑污染。 使用 PerioPaper 条带（OraFlow Inc.，纽约州，美国）收集 GCF 60 秒，轻轻放置直至感觉到轻微的阻力。 将三个样品合并到Eppendorf管中，然后放入-80°C实验室冰箱中储存。 使用自动移液管用 100 µl 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 在 0.5 ml eppendorf 管（减去管的皮重后）中彻底清洗 Periopaper。 从样本中取出沾有血迹的纸条。 所有 GCF 样品均在精密天平（Shimadzu Libror，型号 AEG-220，德国）上称重并记录。 所有样品均使用 15-20 秒涡旋装置（Heidolph Reax Top Vortex，Schwabach，德国）彻底混合。 这使得 GCF 能够进入 PBS。 在不污染样品的情况下去除纸条，并将剩余的提取物储存在冰箱中直至工作日。 研究当天获得的结果按重量/PBS 比例。

• 生化分析 所有患者血清中的TNF-α、IL-10、NO 和PGE2 水平均采用ELISA 方法在微孔板ELISA 读数仪（BioTek Epoch 2 微孔板ELISA 读数仪，美国）中测量。 由于样品量不足 (100 µl)，使用相同的 ELISA 试剂盒仅测量 GCF 中的 NO 和 PGE2 水平。

使用 ELISA 板分析血清 TNF-α、IL-10、NO 和 PGE2 水平，其孔预先涂有抗体（人 TNF-α、IL-10、NO 或 PGE2）。 TNF-α、IL-10、NO和PGE2检测试剂盒（中国生物测定技术实验室）的灵敏度为1.52 ng/L、2.59 pg/mL、1.12 µmol/L和1.28 ng/L，测量范围3-900 ng /L，分别为 5-1500 pg/mL、2-600 µmol/L 和 2-600 ng/L，所有测定内和测定间测试的 CV 均 < 10%。