La importancia de la síntesis de prostaglandinas y óxido nítrico en la periodontitis apical

• Diseño del estudio Este estudio observacional, analítico y transversal se realizó en un solo centro. Para alcanzar el tamaño de muestra planificado, se registraron aproximadamente 1200 pacientes que postularon al Departamento de Endodoncia de la xxxx universidad entre junio de 2021 y mayo de 2022 debido a periodontitis apical (AP) y/o periodontitis crónica (CP), incluido su examen intraoral y características demográficas. Como resultado del examen, se incluyeron en el estudio 85 pacientes con solo AP (grupo AP) y 50 pacientes con solo CP (grupo CP), cuyo diagnóstico fue confirmado. Los pacientes que tenían tanto AP como P fueron excluidos del estudio. También se excluyeron los pacientes que habían tomado antibióticos y/o antiinflamatorios en los últimos 6 meses y aquellos en estado de embarazo o lactancia. Además, se excluyeron del estudio aquellos con antecedentes de uso de medicamentos antiinflamatorios esteroides o no esteroides y dosis altas de vitamina biotina en las últimas 48 horas, ya que esto puede afectar los resultados. Se incluyó en el estudio un grupo de control sano de 50 voluntarios sin patología periodontal ni ninguna enfermedad aguda/crónica (enfermedades musculares/articulares/óseas, enfermedad inflamatoria intestinal, infección local o generalizada, enfermedad orgánica grave, enfermedad cardiovascular y diabetes mellitus). . Los incluidos en los grupos de investigación; seleccionados aleatoriamente entre personas con características similares de género, edad y peso.
• Historia Demográfico-Clínica Se registraron sexo, edad, índice de masa corporal (IMC) y estado de comorbilidad de todos los pacientes que participaron en el estudio. Los resultados del tratamiento de conducto radicular (RCT), la corona dental, los empastes de composite/amalgama (CF) y el número de dientes perdidos (NMT) de los pacientes se obtuvieron como resultado del examen intraoral.
• Puntuación de la enfermedad periapical y periodontal Se radiografiaron todos los dientes presentes en la cavidad bucal y se evaluó la presencia de imágenes radiolúcidas asociadas con la región periapical y la pérdida ósea radiográfica. Las radiografías panorámicas, en el estudio, se obtuvieron utilizando una unidad panorámica digital (VistaPano S, Durr Dental AG, Alemania), que funciona a 73 kVp y 10 mA con un tiempo de exposición de 13500 milisegundos en modo estándar. Para las radiografías periapicales se utilizó el sistema Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, EE. UU.) con una unidad de rayos X, configurada a 70 kV, 8 mA. Se aplicó la técnica del ángulo bisectriz en la obtención de las imágenes periapicales. Luego, las radiografías se analizaron con el software Kodak Dental Imaging. A partir de la evaluación radiográfica de los dientes, la presencia de radiolucidez periapical sin enfermedad periodontal se consideró suficiente para el diagnóstico de AP. La puntuación de abscesos (AS-PAI) basada en el índice periapical se realizó como indicador de la progresión de la enfermedad dentro del grupo AP. Para esta puntuación se utilizó el sistema de puntuación del índice periapical (PAI),10 que es un sistema de puntuación para la evaluación radiográfica de la periodontitis apical. En consecuencia, el grupo AP se dividió en 3 subgrupos. AS-PAI 1 (leve): aquellos que tienen al menos 1 diente con PAI 3 o PAI 4, AS-PAI 2 (moderado): aquellos que tienen solo 1 diente con un PAI 5, AS-PAI 3 (severo): aquellos que tienen dos o más dientes con un PAI 5.

Las mediciones periodontales obtenidas para el estudio consistieron en las profundidades de sondaje más altas (en milímetros) registradas en alrededor de seis dientes seleccionados por participante. En este estudio, el grupo CP se dividió en 4 subgrupos según el sistema de estadificación de la periodontitis (PSS) (Tonetti). Este sistema clasifica la periodontitis de I a IV según la pérdida de inserción clínica interdental (CAL), la pérdida ósea radiográfica (RBL) y la pérdida dentaria. Esta puntuación es la siguiente: Etapa 1: CAL de 1 a 2 mm, RBL está en el tercio coronal (<15%) y sin pérdida de dientes, Etapa 2: CAL de 3 a 4 mm, RBL está en el tercio coronal (15% a 33% ) y sin pérdida de dientes, Etapa 3: CAL > 5 mm, RBL se extiende hasta el tercio medio de la raíz y más allá y pérdida de dientes < 4 dientes, y Etapa 4: CAL > 5 mm, RBL se extiende hasta el tercio medio de la raíz y más allá y pérdida de dientes > 5 dientes. Sin embargo, las etapas 1 y 2 fueron evaluadas en el mismo grupo debido al bajo número de casos. Como resultado, los grupos se diseñaron como Etapa 1-2: PSS 1-2, Etapa 2: PSS 2 y Etapa 3: PSS 3.

• Recolección de sangre venosa y líquido crevicular gingival (GCF) Se tomó sangre venosa en ayunas (8-10 horas) de todos los participantes de las venas antecubitales/básicas del antebrazo. Después de mantener la sangre a temperatura ambiente durante 30 minutos, se centrifugó a 2500 xg durante 10 minutos. Después de la centrifugación, se separó el suero superior de los tubos. Se midieron los índices de hemólisis (HI) de los sueros para evitar interferencias ópticas. (Analizador químico Cobas 8000, EE. UU.). Se excluyeron del estudio aquellos con un índice de hemólisis superior a 50 (mg/dl Hb). Los sueros apropiados se almacenaron a -80oC hasta el día del análisis. Además de la sangre venosa, también se recogieron muestras de líquido crevicular gingival (GCF) que se almacenaron a -80 °C en condiciones similares. El día del análisis, primero se permitió que todos los sueros y el GCF se disolvieran lentamente a +4 oC y luego se llevaron a temperatura ambiente antes de la medición.

Se tomaron muestras de líquido crevicular gingival antes del sondaje periodontal para evitar la contaminación con sangre. Para evitar la contaminación de la muestra, se pidió a los pacientes que no comieran ni bebieran nada durante al menos 30 minutos antes del procedimiento. Se tomaron tres muestras de las superficies mesial, distal y bucal del diente relacionado. Los sitios seleccionados se aislaron con un rollo de algodón y la placa supragingival, si estaba presente, se eliminó usando una cureta para evitar la contaminación con saliva y/o placa. El GCF se recogió durante 60 segundos utilizando tiras PerioPaper (OraFlow Inc., NY, EE. UU.) colocadas suavemente hasta que se sintió una ligera resistencia. Las tres muestras se agruparon en tubos Eppendorf y luego se colocaron en el congelador del laboratorio a -80 °C para su almacenamiento. Los periódicos se lavaron minuciosamente en tubos Eppendorf de 0,5 ml (después de restar el peso de tara del tubo) con 100 µl de solución salina tamponada con fosfato (PBS) usando una pipeta automática. Se retiraron de las muestras tiras de papel manchadas de sangre. Todas las muestras de GCF se pesaron en una balanza de precisión (Shimadzu Libror, modelo AEG-220, Alemania) y se registraron. Todas las muestras se mezclaron completamente con un dispositivo de vórtice de 15 a 20 segundos (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Alemania). Esto permitió que GCF pasara a PBS. Las tiras de papel se retiraron sin contaminar las muestras y el extracto restante se almacenó en el congelador hasta el día laborable. Los resultados obtenidos el día del estudio fueron proporcionales por pesos/PBS.

• Análisis bioquímicos Los niveles de TNF-α, IL-10, NO y PGE2 en el suero de todos los pacientes se midieron en un lector de ELISA de microplacas (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, EE. UU.) utilizando el método ELISA. Debido a la cantidad insuficiente de muestra (100 µl), solo se midieron los niveles de NO y PGE2 en el GCF utilizando el mismo kit ELISA.

Los niveles séricos de TNF-α, IL-10, NO y PGE2 se analizaron utilizando placas ELISA cuyos pocillos estaban recubiertos previamente con anticuerpo (TNF-α, IL-10, NO o PGE2 humanos). La sensibilidad de los kits de prueba de TNF-α, IL-10, NO y PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, China) es de 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L y 1,28 ng/L, rango de medición de 3 a 900 ng. /L, respectivamente, 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L y 2-600 ng/L, el CV para todas las pruebas intraensayo e interensayo fue < 10%.