Vikten av prostaglandin- och kväveoxidsyntes vid apikal parodontit

• Studiedesign Denna observationella, analytiska, tvärsnittsstudie genomfördes vid ett enda centrum. För att nå den planerade urvalsstorleken registrerades cirka 1200 patienter som sökte sig till Department of Endodontics vid xxxx university mellan juni 2021 och maj 2022 på grund av apikal parodontit (AP) och/eller kronisk parodontit (CP), inklusive deras intraorala undersökning och demografiska egenskaper. Som ett resultat av undersökningen ingick 85 patienter med endast AP (AP-grupp) och 50 patienter med endast CP (CP-grupp), vars diagnos bekräftades, i studien. Patienter med både AP och P exkluderades från studien. Patienter som hade tagit antibiotika och/eller antiinflammatoriska läkemedel under de senaste 6 månaderna och de med graviditet eller amning exkluderades också. Dessutom uteslöts de som har använt steroider eller icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel och högdos biotinvitamin under de senaste 48 timmarna från studien, eftersom detta kan påverka resultaten. En frisk kontrollgrupp på 50 frivilliga utan periodontal patologi samt någon akut/kronisk sjukdom (muskel-/led-/bensjukdomar, inflammatorisk tarmsjukdom, lokal eller generaliserad infektion, allvarlig organsjukdom, hjärt-kärlsjukdom och diabetes mellitus) ingick i studien . De som ingår i forskargrupperna; slumpmässigt utvalda från personer med liknande köns-, ålders- och viktegenskaper.
• Demografisk-klinisk historia Kön, ålder, body mass index (BMI), komorbiditetsstatus för alla patienter som deltog i studien registrerades. Patienternas rotbehandling (RCT), tandkrona, komposit/amalgamfyllningar (CF), antal saknade tänder (NMT) fynd erhölls som ett resultat av intraoral undersökning.
• Poäng för periapikala och parodontala sjukdomar. Alla tänder som fanns i munhålan röntgades och förekomsten av radiolucenta bilder associerade med den periapikala regionen och röntgenologisk benförlust bedömdes. Panoramaröntgenbilder i studien erhölls med hjälp av en digital panoramaenhet (VistaPano S, Durr Dental AG, Tyskland), som arbetar vid 73kVp och 10 mA med 13500 millisekunders exponeringstid i standardläge. För periapikala röntgenbilder användes Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) system med en röntgenenhet, inställning på 70 kV, 8 mA. Den halverande vinkeltekniken användes för att erhålla de periapikala bilderna. Därefter analyserades röntgenbilderna med Kodak Dental Imaging Software. Från röntgenutvärdering av tänderna ansågs förekomsten av periapikal radiolucens utan periodontal sjukdom vara tillräcklig för AP-diagnos. Abscesspoäng (AS-PAI) baserat på det periapikala indexet utfördes som en indikator på sjukdomsprogression inom AP-gruppen. För denna poängsättning användes poängsystemet periapical index (PAI),10 som är ett poängsystem för radiografisk utvärdering av apikal parodontit. Följaktligen delades AP-gruppen in i 3 undergrupper. AS-PAI 1 (mild): de som har minst 1 tand med antingen PAI 3 eller PAI 4, AS-PAI 2 (måttlig): de som har endast 1 tand med PAI 5, AS-PAI 3 (svår): de som har två eller flera tänder med en PAI 5.

Parodontala mätningar, som erhölls för studien, bestod av de högsta sonderingsdjupen (i millimeter) registrerade runt sex utvalda tänder per deltagare. I denna studie delades CP-gruppen in i 4 undergrupper enligt parodontitstadiesystemet (PSS) (Tonetti). Detta system klassificerar parodontit från I till IV enligt den interdentala kliniska fästförlusten (CAL), radiografisk benförlust (RBL) och tandförlust. Denna poängsättning är som följer: Steg 1: CAL 1 till 2 mm, RBL är på koronal tredje (<15 %) och ingen tandlossning, Steg 2: CAL 3 till 4 mm, RBL är på koronal tredje (15 % till 33 % ) och ingen tandlossning, Steg 3: CAL > 5 mm, RBL sträcker sig till mitten av tredjedelen av roten och därefter och tandlossning < 4 tänder, och Steg 4: CAL > 5 mm, RBL sträcker sig till mitten av tredjedelen av roten och därefter och tandlossning > 5 tänder. Men steg 1 och 2 utvärderades i samma grupp på grund av det låga antalet fall. Som ett resultat designades grupperna som Steg 1-2: PSS 1-2, Steg 2: PSS 2 och Steg 3: PSS 3.

• Insamling av venöst blod och Gingival Crevicular Fluid (GCF) Fasta (8-10 timmar) venöst blod från alla deltagare togs från underarmens antecubital/basiska vener. Efter att ha hållit blodet vid rumstemperatur i 30 minuter, centrifugerades det vid 2500 xg under 10 minuter. Efter centrifugering separerades det övre serumet av rören. Hemolysindex (HI) för sera mättes för att förhindra optisk interferens. (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). De med ett hemolysindex större än 50 (mg/dl Hb) exkluderades från studien. Lämpliga sera förvarades vid -80oC fram till analysdagen. Utöver venöst blod togs även prover från gingival crevicular fluid (GCF) som förvarades vid -80oC under liknande förhållanden. På analysdagen fick alla serum och GCF först lösas upp långsamt vid +4 oC och bringades sedan till rumstemperatur före mätning.

Gingival crevikulära vätskeprover togs före parodontal sondering för att undvika kontaminering av blod. För att undvika kontaminering av provet ombads patienterna att inte äta eller dricka något på minst 30 minuter före proceduren. Tre prover togs från de mesiala, distala och buckala ytorna på relaterade tand. De utvalda platserna isolerades med en bomullsrulle och supragingivalt plack, om det fanns, avlägsnades med hjälp av en curette för att förhindra saliv och/eller plackkontamination. GCF uppsamlades under 60 sekunder med användning av PerioPaper-remsor (OraFlow Inc., NY, USA) placerade försiktigt tills lätt motstånd kändes. De tre proverna slogs samman i Eppendorf-rör och placerades sedan i laboratoriefrysen vid -80 °C för lagring. Periopapper tvättades noggrant i 0,5 ml eppendorfrör (efter subtrahering av taravikten för röret) med 100 ul fosfatbuffrad saltlösning (PBS) med användning av en automatisk pipett. Blodfärgade pappersremsor togs bort från proverna. Alla GCF-prover vägdes på en precisionsvåg (Shimadzu Libror, modell AEG-220, Tyskland) och registrerades. Alla prover blandades noggrant med en 15-20 sek vortexanordning (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Tyskland). Detta tillät GCF att passera in i PBS. Pappersremsorna togs bort utan att förorena proverna och det återstående extraktet förvarades i frysen fram till arbetsdagen. Resultaten som erhölls på studiedagen proportionerades efter vikter/PBS.

• Biokemiska analyser TNF-α-, IL-10-, NO- och PGE2-nivåer i serum från alla patienter mättes i Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) med hjälp av ELISA-metoden. På grund av den otillräckliga mängden prov (100 µl) mättes endast NO- och PGE2-nivåer i GCF med samma ELISA-kit.

Nivåer av TNF-a, IL-10, NO och PGE2 i serum analyserades med användning av ELISA-plattor vars brunnar var förbelagda med antikropp (human TNF-a, IL-10, NO eller PGE2). Känsligheten för TNF-α, IL-10, NO och PGE2 testkit (Bioassay Technology Laboratory, Kina) är 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L och 1,28 ng/L, mätområde 3-900 ng /L, 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L respektive 2-600 ng/L, CV för alla tester för intraassay och interassay var < 10%.