Значение синтеза простагландинов и оксида азота при апикальном периодонтите

• Дизайн исследования Это обсервационное, аналитическое, поперечное исследование было проведено в одном центре. Для достижения запланированного размера выборки было зарегистрировано около 1200 пациентов, обратившихся на кафедру эндодонтии университета ХХХХ в период с июня 2021 г. по май 2022 г. по поводу апикального периодонтита (АП) и/или хронического периодонтита (ХП), включая их внутриротовое обследование и демографические характеристики. В результате обследования в исследование были включены 85 пациентов только с АП (группа АП) и 50 пациентов только с ХП (группа ХП), у которых диагноз был подтвержден. Пациенты, имеющие как AP, так и P, были исключены из исследования. Также были исключены пациенты, принимавшие антибиотики и/или противовоспалительные препараты в течение последних 6 месяцев, а также пациенты с беременностью или лактацией. Кроме того, из исследования были исключены те, кто в анамнезе принимал стероидные или нестероидные противовоспалительные препараты и высокие дозы витамина биотина за последние 48 часов, поскольку это могло повлиять на результаты. В исследование была включена здоровая контрольная группа из 50 добровольцев без патологии пародонта, а также каких-либо острых/хронических заболеваний (заболеваний мышц/суставов/костей, воспалительных заболеваний кишечника, местных или генерализованных инфекций, тяжелых заболеваний органов, сердечно-сосудистых заболеваний и сахарного диабета). . Включенные в исследовательские группы; случайным образом выбраны среди людей с аналогичными половыми, возрастными и весовыми характеристиками.
• Демографо-клинический анамнез У всех пациентов, участвовавших в исследовании, регистрировали пол, возраст, индекс массы тела (ИМТ), коморбидный статус. В результате внутриротового обследования были получены данные о лечении корневых каналов пациентов (РКИ), зубной коронке, композитных/амальгамных пломбах (КФ), количестве отсутствующих зубов (NMT).
• Оценка периапикальных и пародонтальных заболеваний. Все зубы, находящиеся в полости рта, были рентгенографированы и оценено наличие рентгенопрозрачных изображений, связанных с периапикальной областью, и рентгенологическая потеря костной массы. Панорамные рентгенограммы в исследовании были получены с использованием цифровой панорамной установки (VistaPano S, Durr Dental AG, Германия), работающей при напряжении 73 кВ и токе 10 мА, со временем экспозиции 13500 миллисекунд в стандартном режиме. Для периапикальных рентгенограмм использовалась система Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Атланта, Калифорния, США) с рентгеновским аппаратом, настройка 70 кВ, 8 мА. Для получения периапикальных изображений применяли технику биссектрисы. Затем рентгенограммы были проанализированы с помощью программного обеспечения Kodak Dental Imaging. На основании рентгенологической оценки зубов наличие периапикальной рентгенопрозрачности без заболеваний пародонта считалось достаточным для диагностики ОП. Оценка абсцесса (AS-PAI) на основе периапикального индекса проводилась как индикатор прогрессирования заболевания в группе AP. Для этой оценки использовалась система оценки периапикального индекса (PAI)10, которая представляет собой систему оценок для рентгенографической оценки апикального периодонтита. Соответственно группа АП была разделена на 3 подгруппы. AS-PAI 1 (легкая): те, у кого есть хотя бы 1 зуб с PAI 3 или PAI 4, AS-PAI 2 (средняя степень): те, у кого только 1 зуб с PAI 5, AS-PAI 3 (тяжелая): те, у кого два или более зубов с PAI 5.

Измерения пародонта, полученные для исследования, включали максимальную глубину зондирования (в миллиметрах), зарегистрированную около шести выбранных зубов на участника. В данном исследовании группа ХП была разделена на 4 подгруппы в соответствии с системой стадирования пародонтита (PSS) (Тонетти). Эта система классифицирует пародонтит от I до IV в зависимости от межзубной клинической потери прикрепления (CAL), рентгенологической потери костной ткани (RBL) и потери зубов. Эта оценка выглядит следующим образом: Стадия 1: CAL от 1 до 2 мм, RBL находится в коронковой трети (<15%), потеря зубов отсутствует. Стадия 2: CAL от 3 до 4 мм, RBL находится в коронковой трети (от 15% до 33%). ) и отсутствие потери зуба, Стадия 3: CAL > 5 мм, RBL распространяется до средней трети корня и далее, потеря зуба < 4 зубов, и Стадия 4: CAL > 5 мм, RBL распространяется до средней трети корня и далее и потеря зубов > 5 зубов. Однако стадии 1 и 2 оценивались в одной группе из-за небольшого количества случаев. В результате группы были сформированы как Этапы 1–2: PSS 1–2, Этапы 2: PSS 2 и Этапы 3: PSS 3.

• Сбор венозной крови и жидкости десневой щели (GCF). Натощак (8-10 часов) у всех участников брали венозную кровь из локтевых/основных вен предплечья. После выдерживания крови при комнатной температуре в течение 30 минут ее центрифугировали при 2500 g в течение 10 минут. После центрифугирования отделяли верхнюю сыворотку из пробирок. Индексы гемолиза (HI) сывороток измеряли для предотвращения оптических помех. (Химический анализатор Cobas 8000, США). Пациенты с индексом гемолиза более 50 (мг/дл Hb) были исключены из исследования. Соответствующие сыворотки хранили при -80°С до дня анализа. Помимо венозной крови, также были собраны образцы десневой жидкости (GCF), которые хранились при -80°C в аналогичных условиях. В день анализа всем сывороткам и GCF сначала давали медленно раствориться при +4 oC, а затем перед измерением доводили до комнатной температуры.

Образцы жидкости десневой борозды были взяты перед периодонтальным зондированием, чтобы избежать загрязнения кровью. Чтобы избежать загрязнения образца, пациентов просили ничего не есть и не пить как минимум за 30 минут до процедуры. Три образца были взяты с мезиальной, дистальной и щечной поверхностей соответствующего зуба. Выбранные участки изолировали ватным тампоном, а наддесневую бляшку, если она присутствовала, удаляли с помощью кюретки, чтобы предотвратить загрязнение слюной и/или бляшкой. GCF собирали в течение 60 секунд с помощью полосок PerioPaper (OraFlow Inc., Нью-Йорк, США), которые осторожно помещали до тех пор, пока не ощущалось легкое сопротивление. Три образца были объединены в пробирки Эппендорфа, а затем помещены в лабораторную морозильную камеру при -80°C для хранения. Периобумаги тщательно промывали в пробирках Эппендорфа емкостью 0,5 мл (после вычета собственного веса пробирки) 100 мкл фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) с использованием автоматической пипетки. Из образцов удаляли бумажные полоски с пятнами крови. Все образцы GCF взвешивались на прецизионных весах (Shimadzu Libror, модель AEG-220, Германия) и записывались. Все образцы тщательно перемешивали с помощью вихревого устройства (Heidolph Reax Top Vortex, Швабах, Германия) в течение 15-20 секунд. Это позволило GCF перейти в PBS. Бумажные полоски удаляли, не загрязняя образцы, а оставшийся экстракт хранили в морозильной камере до рабочего дня. Результаты, полученные в день исследования, были пропорциональны весу/PBS.

• Биохимические анализы Уровни TNF-α, IL-10, NO и PGE2 в сыворотке крови всех пациентов измеряли в Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, США) методом ELISA. Из-за недостаточного количества образца (100 мкл) в GCF с использованием того же набора ELISA измеряли только уровни NO и PGE2.

Уровни TNF-α, IL-10, NO и PGE2 в сыворотке анализировали с использованием планшетов ELISA, лунки которых были предварительно покрыты антителом (человеческий TNF-α, IL-10, NO или PGE2). Чувствительность тест-наборов TNF-α, IL-10, NO и PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, Китай) составляет 1,52 нг/л, 2,59 пг/мл, 1,12 мкмоль/л и 1,28 нг/л, диапазон измерения 3-900 нг. /л соответственно 5–1500 пг/мл, 2–600 мкмоль/л и 2–600 нг/л, CV для всех тестов для внутрианализа и между анализами составлял < 10%.