Viktigheten av prostaglandin- og nitrogenoksidsyntese ved apikal periodontitt

• Studiedesign Denne observasjons-, analytiske tverrsnittsstudien ble utført ved et enkelt senter. For å nå den planlagte prøvestørrelsen ble ca. 1200 pasienter som søkte til Department of Endodontics ved xxxx university mellom juni 2021 og mai 2022 på grunn av apikal periodontitt (AP) og/eller kronisk periodontitt (CP) registrert inkludert deres intraorale undersøkelse og demografiske kjennetegn. Som et resultat av undersøkelsen ble 85 pasienter med kun AP (AP-gruppe) og 50 pasienter med kun CP (CP-gruppe), hvis diagnose ble bekreftet, inkludert i studien. Pasienter med både AP og P ble ekskludert fra studien. Pasienter som hadde tatt antibiotika og/eller antiinflammatoriske legemidler i løpet av de siste 6 månedene og de med graviditet eller amming ble også ekskludert. I tillegg ble de med en historie med bruk av steroide eller ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler og høydose biotin-vitamin i løpet av de siste 48 timene ekskludert fra studien, da dette kan påvirke resultatene. En frisk kontrollgruppe på 50 frivillige uten periodontal patologi samt enhver akutt/kronisk sykdom (muskel/ledd/bensykdommer, inflammatorisk tarmsykdom, lokal eller generalisert infeksjon, alvorlig organsykdom, kardiovaskulær sykdom og diabetes mellitus) ble inkludert i studien . De som inngår i forskningsgruppene; tilfeldig valgt fra personer med lignende kjønn, alder og vektegenskaper.
• Demografisk-klinisk historie Kjønn, alder, kroppsmasseindeks (BMI), komorbiditetsstatus for alle pasienter som deltok i studien ble registrert. Pasientenes rotbehandling (RCT), tannkrone, kompositt/amalgamfyllinger (CF), antall manglende tenner (NMT) funn ble oppnådd som følge av intraoral undersøkelse.
• Scoring av periapikale og periodontale sykdommer Alle tenner i munnhulen ble røntgenfotografert og tilstedeværelsen av radiolucente bilder assosiert med den periapikale regionen og radiografisk bentap ble vurdert. Panoramiske røntgenbilder, i studien, ble tatt med en digital panoramaenhet (VistaPano S, Durr Dental AG, Tyskland), som opererer ved 73kVp og 10 mA med 13500 millisekunders eksponeringstid i standardmodus. For periapikale røntgenbilder ble Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA)-systemet brukt med en røntgenenhet, innstilling på 70 kV, 8 mA. Den halverende vinkelteknikken ble brukt for å oppnå de periapikale bildene. Deretter ble røntgenbildene analysert med Kodak Dental Imaging Software. Fra radiografisk evaluering av tennene ble tilstedeværelsen av periapikal radiolucens uten periodontal sykdom ansett som tilstrekkelig for AP-diagnose. Abscess-scoring (AS-PAI) basert på den periapikale indeksen ble utført som en indikator på sykdomsprogresjon i AP-gruppen. For denne skåringen ble skåringssystemet periapical index (PAI)10, som er et skåringssystem for radiografisk evaluering av apikal periodontitt, brukt. Følgelig ble AP-gruppen delt inn i 3 undergrupper. AS-PAI 1 (mild): de som har minst 1 tann med enten PAI 3 eller PAI 4, AS-PAI 2 (moderat): de som har bare 1 tann med PAI 5, AS-PAI 3 (alvorlig): de som har to eller flere tenner med en PAI 5.

Periodontale målinger, oppnådd for studien, besto av de høyeste sonderingsdybdene (i millimeter) registrert rundt seks utvalgte tenner per deltaker. I denne studien ble CP-gruppen delt inn i 4 undergrupper i henhold til periodontittstadiesystemet (PSS) (Tonetti). Dette systemet klassifiserer periodontitt fra I til IV i henhold til interdentalt klinisk tilknytningstap (CAL), radiografisk bentap (RBL) og tanntap. Denne poengsummen er som følger: Trinn 1: CAL 1 til 2 mm, RBL er på koronal tredjedel (<15 %) og ingen tanntap, trinn 2: CAL 3 til 4 mm, RBL er på koronal tredjedel (15 % til 33 % ) og ingen tanntap, trinn 3: CAL > 5 mm, RBL strekker seg til midten av tredjedelen av roten og utover og tanntap < 4 tenner, og trinn 4: CAL > 5 mm, RBL strekker seg til midten av tredjedelen av roten og utover og tanntap > 5 tenner. Imidlertid ble trinn 1 og 2 evaluert i samme gruppe på grunn av det lave antallet tilfeller. Som et resultat ble gruppene utformet som trinn 1-2: PSS 1-2, trinn 2: PSS 2 og trinn 3: PSS 3.

• Innsamling av venøst ​​blod og gingival crevikulær væske (GCF) Fastende (8-10 timer) venøst ​​blod fra alle deltakerne ble tatt fra underarmens antecubitale/basisvener. Etter å ha holdt blodet ved romtemperatur i 30 minutter, ble det sentrifugert ved 2500 xg i 10 minutter. Etter sentrifugering ble det øvre serum av rørene separert. Hemolyseindekser (HI) av sera ble målt for å forhindre optisk interferens. (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). De med en hemolyseindeks større enn 50 (mg/dl Hb) ble ekskludert fra studien. Passende sera ble lagret ved -80oC frem til analysedagen. I tillegg til veneblod ble det også tatt prøver av gingival crevicular fluid (GCF) og ble lagret ved -80oC under lignende forhold. På analysedagen fikk alle serum og GCF først oppløses sakte ved +4 oC og deretter brakt til romtemperatur før måling.

Gingival crevicular væskeprøver ble tatt før periodontal sondering for å unngå kontaminering med blod. For å unngå kontaminering av prøven ble pasientene bedt om å ikke spise eller drikke noe i minst 30 minutter før prosedyren. Tre prøver ble tatt fra de mesiale, distale og bukkale overflatene til relatert tann. De utvalgte stedene ble isolert med bomullsrull og supragingival plakk, hvis tilstede, ble fjernet ved hjelp av en curette for å forhindre spytt og/eller plakkforurensning. GCF ble samlet i 60 sekunder ved å bruke PerioPaper-strimler (OraFlow Inc., NY, USA) plassert forsiktig inntil lett motstand ble kjent. De tre prøvene ble samlet i Eppendorf-rør og deretter plassert i laboratoriefryseren ved -80 °C for lagring. Periopaper ble grundig vasket i 0,5 ml eppendorf-rør (etter å trekke fra taravekten til røret) med 100 ul fosfatbufret saltvann (PBS) ved bruk av en automatisk pipette. Blodfargede papirstrimler ble fjernet fra prøvene. Alle GCF-prøver ble veid på en presisjonsvekt (Shimadzu Libror, modell AEG-220, Tyskland) og registrert. Alle prøvene ble grundig blandet med en 15-20 sekunders vortexanordning (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Tyskland). Dette tillot GCF å gå over i PBS. Papirstrimlene ble fjernet uten å forurense prøvene og det gjenværende ekstraktet ble oppbevart i fryseren frem til arbeidsdagen. Resultatene oppnådd på studiedagen ble proporsjonert etter vekt/PBS.

• Biokjemiske analyser TNF-α-, IL-10-, NO- og PGE2-nivåer i sera fra alle pasienter ble målt i Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) ved bruk av ELISA-metoden. På grunn av den utilstrekkelige prøvemengden (100 µl), ble bare NO- og PGE2-nivåer målt i GCF ved bruk av det samme ELISA-settet.

Serum-TNF-a-, IL-10-, NO- og PGE2-nivåer ble analysert ved bruk av ELISA-plater hvis brønner var forhåndsbelagt med antistoff (humant TNF-α, IL-10, NO eller PGE2). Sensitiviteten til TNF-α, IL-10, NO og PGE2 testsett (Bioassay Technology Laboratory, Kina) er 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L og 1,28 ng/L, måleområde 3-900 ng /L, henholdsvis 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L og 2-600 ng/L, CV for alle tester for intraassay og interassay var < 10 %.