A importância da síntese de prostaglandinas e óxido nítrico na periodontite apical

• Desenho do estudo Este estudo observacional, analítico e transversal foi realizado em um único centro. Para atingir o tamanho da amostra planejado, foram registrados aproximadamente 1.200 pacientes que se inscreveram no Departamento de Endodontia da universidade xxxx entre junho de 2021 e maio de 2022 devido à periodontite apical (PA) e/ou periodontite crônica (PC), incluindo seu exame intraoral e características demográficas. Como resultado do exame, foram incluídos no estudo 85 pacientes com apenas PA (grupo AP) e 50 pacientes com apenas PC (grupo PC), cujo diagnóstico foi confirmado. Pacientes com AP e P foram excluídos do estudo. Também foram excluídos pacientes que fizeram uso de antibióticos e/ou anti-inflamatórios nos últimos 6 meses e aqueles com gravidez ou lactação. Além disso, foram excluídos do estudo aqueles com histórico de uso de antiinflamatórios esteroides ou não esteroides e vitamina biotina em altas doses nas últimas 48 horas, pois isso pode afetar os resultados. Um grupo de controle saudável de 50 voluntários sem patologia periodontal, bem como qualquer doença aguda/crônica (doenças musculares/articulares/ósseas, doença inflamatória intestinal, infecção local ou generalizada, doença grave de órgãos, doença cardiovascular e diabetes mellitus) foi incluído no estudo. . Aqueles incluídos nos grupos de pesquisa; selecionados aleatoriamente entre pessoas com características semelhantes de gênero, idade e peso.
• História Demográfica-Clínica Foram registrados sexo, idade, índice de massa corporal (IMC), estado de comorbidade de todos os pacientes participantes do estudo. Os resultados do tratamento de canal radicular (ECR), coroa dentária, obturações de compósito/amálgama (FC) e número de dentes perdidos (NMT) dos pacientes foram obtidos como resultado do exame intraoral.
• Pontuação da doença periapical e periodontal Todos os dentes presentes na cavidade oral foram radiografados e foi avaliada a presença de imagens radiotransparentes associadas à região periapical e perda óssea radiográfica. As radiografias panorâmicas, no estudo, foram obtidas utilizando uma unidade panorâmica digital (VistaPano S, Durr Dental AG, Alemanha), operando a 73kVp e 10 mA com tempo de exposição de 13.500 milissegundos no modo padrão. Para radiografias periapicais foi utilizado o sistema Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, EUA) com uma unidade de raios X, configuração de 70 kV, 8 mA. A técnica do ângulo bissetriz foi aplicada na obtenção das imagens periapicais. Em seguida, as radiografias foram analisadas com o software Kodak Dental Imaging. Pela avaliação radiográfica dos dentes, a presença de radioluscência periapical sem doença periodontal foi considerada suficiente para o diagnóstico de PA. A pontuação do abscesso (AS-PAI) baseada no índice periapical foi realizada como um indicador de progressão da doença no grupo AP. Para essa pontuação foi utilizado o sistema de pontuação do índice periapical (PAI),10 que é um sistema de pontuação para avaliação radiográfica da periodontite apical. Assim, o grupo AP foi dividido em 3 subgrupos. AS-PAI 1 (leve): aqueles que têm pelo menos 1 dente com PAI 3 ou PAI 4, AS-PAI 2 (moderado): aqueles que têm apenas 1 dente com PAI 5, AS-PAI 3 (grave): aqueles que têm dois ou mais dentes com PAI 5.

As medidas periodontais, obtidas para o estudo, consistiram nas maiores profundidades de sondagem (em milímetros) registradas em torno de seis dentes selecionados por participante. Neste estudo, o grupo PC foi dividido em 4 subgrupos de acordo com o sistema de estadiamento da periodontite (PSS) (Tonetti). Este sistema classifica a periodontite de I a IV de acordo com a perda de inserção clínica interdental (CAL), perda óssea radiográfica (RBL) e perda dentária. Esta pontuação é a seguinte: Estágio 1: CAL 1 a 2 mm, RBL está no terço coronal (<15%) e sem perda dentária, Estágio 2: CAL 3 a 4 mm, RBL está no terço coronal (15% a 33% ) e sem perda dentária, Estágio 3: CAL > 5 mm, RBL se estende até o terço médio da raiz e além e perda dentária < 4 dentes, e Estágio 4: CAL > 5 mm, RBL se estende até o terço médio da raiz e além e perda dentária > 5 dentes. Porém, os Estágios 1 e 2 foram avaliados no mesmo grupo devido ao baixo número de casos. Como resultado, os grupos foram concebidos como Estágio 1-2: PSS 1-2, Estágio 2: PSS 2 e Estágio 3: PSS 3.

• Coleta de Sangue Venoso e Fluido Crevicular Gengival (FGC) O sangue venoso em jejum (8-10 horas) de todos os participantes foi coletado das veias antecubital/básica do antebraço. Após manter o sangue em temperatura ambiente por 30 minutos, ele foi centrifugado a 2.500 xg por 10 minutos. Após centrifugação, o soro superior dos tubos foi separado. Os índices de hemólise (HI) dos soros foram medidos para evitar interferência óptica. (Analisador Químico Cobas 8000, EUA). Foram excluídos do estudo aqueles com índice de hemólise superior a 50 (mg/dl Hb). Os soros apropriados foram armazenados a -80oC até o dia da análise. Além do sangue venoso, amostras de líquido crevicular gengival (FGC) também foram coletadas e armazenadas a -80oC em condições semelhantes. No dia da análise, todos os soros e GCF foram primeiro dissolvidos lentamente a +4 oC e depois levados à temperatura ambiente antes da medição.

Amostras de fluido crevicular gengival foram coletadas antes da sondagem periodontal para evitar contaminação por sangue. Para evitar a contaminação da amostra, os pacientes foram orientados a não comer ou beber nada por pelo menos 30 minutos antes do procedimento. Três amostras foram retiradas das superfícies mesial, distal e vestibular do dente relacionado. Os locais selecionados foram isolados com rolo de algodão e a placa supragengival, se presente, foi removida com cureta para evitar contaminação pela saliva e/ou placa. O GCF foi coletado por 60 segundos usando tiras PerioPaper (OraFlow Inc., NY, EUA) colocadas suavemente até sentir leve resistência. As três amostras foram reunidas em tubos Eppendorf e depois colocadas no freezer do laboratório a -80°C para armazenamento. Os periopapers foram cuidadosamente lavados em tubos eppendorf de 0,5 ml (após subtrair a tara do tubo) com 100 µl de solução salina tamponada com fosfato (PBS) usando uma pipeta automática. Tiras de papel manchadas de sangue foram removidas das amostras. Todas as amostras do GCF foram pesadas em balança de precisão (Shimadzu Libror, Modelo AEG-220, Alemanha) e registradas. Todas as amostras foram completamente misturadas com um dispositivo de vórtice de 15-20 segundos (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Alemanha). Isso permitiu que o GCF passasse para o PBS. As tiras de papel foram retiradas sem contaminar as amostras e o extrato restante foi armazenado no freezer até o dia útil. Os resultados obtidos no dia do estudo foram proporcionados por pesos/PBS.

• Análises Bioquímicas Os níveis de TNF-α, IL-10, NO e PGE2 no soro de todos os pacientes foram medidos em Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, EUA) usando o método ELISA. Devido à quantidade insuficiente de amostra (100 µl), apenas os níveis de NO e PGE2 foram medidos no GCF utilizando o mesmo kit ELISA.

Os níveis séricos de TNF-α, IL-10, NO e PGE2 foram analisados ​​utilizando placas de ELISA cujos poços foram pré-revestidos com anticorpo (TNF-α, IL-10, NO ou PGE2 humano). A sensibilidade dos kits de teste TNF-α, IL-10, NO e PGE2 (Bioassay Technology Laboratory, China) é 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L e 1,28 ng/L, faixa de medição 3-900 ng /L, respectivamente, 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L e 2-600 ng/L, o CV para todos os testes intraensaio e interensaio foi < 10%.