根尖性歯周炎におけるプロスタグランジンと一酸化窒素合成の重要性

• 研究デザイン この観察的、分析的、横断的研究は単一のセンターで実施されました。 計画されたサンプルサイズに達するために、2021年6月から2022年5月までに根尖性歯周炎（AP）および/または慢性歯周炎（CP）を理由にxxxx大学歯内療法学科に応募した約1200人の患者が口腔内検査と口腔内検査を含めて記録されました。人口統計上の特徴。 検査の結果、診断が確定したAPのみの患者85名（AP群）とCPのみの患者50名（CP群）が研究対象となった。 APとPの両方を有する患者は研究から除外された。 過去6か月以内に抗生物質や抗炎症薬を服用した患者、妊娠中または授乳中の患者も除外された。 さらに、過去 48 時間以内にステロイドまたは非ステロイド性抗炎症薬および高用量のビオチンビタミンの使用歴のある人は、結果に影響を与える可能性があるため、研究から除外されました。 歯周病変や急性/慢性疾患（筋肉/関節/骨疾患、炎症性腸疾患、局所感染症または全身感染症、重篤な臓器疾患、心血管疾患、糖尿病）を有さない50人のボランティアからなる健康な対照群が研究に含まれた。 。 研究グループに含まれる人々。同様の性別、年齢、体重の特徴を持つ人々からランダムに選択されます。
• 人口統計と臨床歴 研究に参加したすべての患者の性別、年齢、肥満指数 (BMI)、併存疾患の状態が記録されました。 口腔内検査の結果、患者の根管治療（RCT）、歯冠、複合材料/アマルガム充填物（CF）、欠損歯数（NMT）の所見が得られました。
• 根尖周囲疾患および歯周病スコアリング 口腔内に存在するすべての歯を X 線撮影し、根尖周囲領域および X 線写真による骨損失に関連する X 線透過画像の存在を評価しました。 この研究では、パノラマ X 線写真は、標準モードで 73kVp、10 mA、露光時間 13500 ミリ秒で動作するデジタル パノラマ ユニット (VistaPano S、Durr Dental AG、ドイツ) を使用して取得されました。 根尖周囲 X 線写真の場合、Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc、米国カリフォルニア州アトランタ) システムを、70 kV、8 mA に設定した X 線ユニットとともに使用しました。 二等分角技術を根尖周囲画像の取得に適用した。 次に、X 線写真を Kodak Dental Imaging Software で分析しました。 歯の X 線写真による評価から、歯周病のない根尖周囲の X 線透過性の存在は、AP の診断に十分であると考えられました。 根尖周囲指数に基づく膿瘍スコアリング（AS-PAI）は、AP グループ内の疾患進行の指標として実行されました。 このスコアリングには、根尖性歯周炎の X 線撮影による評価システムである根尖周囲インデックス (PAI) スコアリング システム 10 を使用しました。 したがって、AP グループは 3 つのサブグループに分割されました。 AS-PAI 1（軽度）：PAI 3またはPAI 4のいずれかの歯が少なくとも1本ある患者、AS-PAI 2（中等度）：PAI 5の歯が1本だけある患者、AS-PAI 3（重度）：PAI 3またはPAI 4のいずれかの歯がある患者PAI 5 を持つ歯が 2 本以上。

研究のために得られた歯周測定値は、参加者あたり選択された6本の歯の周囲で記録された最も高いプローブ深さ（ミリメートル単位）で構成されていました。 この研究では、歯周炎病期分類システム (PSS) (Tonetti) に従って、CP グループを 4 つのサブグループに分割しました。 このシステムは、歯間の臨床的付着損失 (CAL)、X線撮影による骨損失 (RBL)、および歯の損失に従って、歯周炎を I から IV に分類します。 このスコアリングは次のとおりです: ステージ 1: CAL 1 ～ 2 mm、RBL は冠状 3 分の 1 (<15%) で歯の喪失なし、ステージ 2: CAL 3 ～ 4 mm、RBL は冠状 3 分の 1 (15% ～ 33%) ) かつ歯の喪失なし、ステージ 3: CAL > 5 mm、RBL が歯根の 3 分の 1 の半ば以降まで伸びており、歯の喪失が 4 歯未満、ステージ 4: CAL > 5 mm、RBL が根の 3 分の 1 の半ばまで伸びているそれ以降、5 歯以上の歯を失った場合。 ただし、症例数が少ないため、ステージ 1 と 2 は同じグループで評価されました。 その結果、グループはステージ 1-2: PSS 1-2、ステージ 2: PSS 2、ステージ 3: PSS 3 として設計されました。

・静脈血および歯肉溝液（ＧＣＦ）の採取 絶食時（８〜１０時間）、全参加者の静脈血を前腕前腕前部／基部静脈から採取した。 血液を室温で３０分間保持した後、２５００×ｇで１０分間遠心分離した。 遠心分離後、チューブの上部血清を分離した。 光干渉を防ぐために、血清の溶血指数 (HI) を測定しました。 (Cobas 8000 化学分析装置、米国)。 溶血指数が 50 (mg/dl Hb) を超える患者は研究から除外されました。 適切な血清は分析当日まで-80℃で保存しました。 静脈血に加えて、歯肉溝液 (GCF) サンプルも収集し、同様の条件下で -80℃ で保存しました。 分析当日、すべての血清と GCF はまず +4℃ でゆっくりと溶解し、次に測定前に室温に戻しました。

血液による汚染を避けるために、歯周調査の前に歯肉溝の流体サンプルを採取しました。 サンプルの汚染を避けるため、患者には処置前の少なくとも 30 分間は何も食べたり飲んだりしないように求められました。 関連する歯の近心面、遠心面、頬面から 3 つのサンプルを採取しました。 選択した部位をコットンロールで分離し、歯肉縁上プラークが存在する場合は、唾液および/またはプラークの汚染を防ぐためにキューレットを使用して除去しました。 わずかな抵抗を感じるまで静かに置いた PerioPaper ストリップ (OraFlow Inc.、ニューヨーク州、米国) を使用して、GCF を 60 秒間収集しました。 3 つのサンプルをエッペンドルフ チューブにプールし、-80 °C の実験室用冷凍庫に保管しました。 ペリオペーパーは、自動ピペットを使用して、0.5 ml エッペンドルフチューブ内で（チューブの風袋重量を引いた後）100 μl のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で徹底的に洗浄されました。 血液が付着した紙片をサンプルから取り除きました。 すべての GCF サンプルは精密天秤 (Shimadzu Libror、モデル AEG-220、ドイツ) で計量され、記録されました。 すべてのサンプルを 15 ～ 20 秒のボルテックス装置 (Heidolph Reax Top Vortex、Schwabach、ドイツ) で完全に混合しました。 これにより、GCF が PBS に移行することが可能になりました。 サンプルを汚染することなく紙ストリップを取り除き、残りの抽出物を作業日まで冷凍庫に保管しました。 研究日に得られた結果は、重量/PBS で比例されました。

• 生化学分析 すべての患者の血清中の TNF-α、IL-10、NO、および PGE2 レベルを、マイクロプレート ELISA リーダー (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader、米国) で ELISA 法を使用して測定しました。 サンプルの量が不十分なため (100 μl)、同じ ELISA キットを使用して GCF 中の NO および PGE2 レベルのみを測定しました。

血清 TNF-α、IL-10、NO、および PGE2 レベルは、ウェルが抗体 (ヒト TNF-α、IL-10、NO、または PGE2) で事前にコーティングされた ELISA プレートを使用して分析されました。 TNF-α、IL-10、NO、および PGE2 検査キット (Bioassay Technology Laboratory、中国) の感度は 1.52 ng/L、2.59 pg/mL、1.12 μmol/L、および 1.28 ng/L、測定範囲は 3 ～ 900 ng /L、それぞれ 5 ～ 1500 pg/mL、2 ～ 600 μmol/L、および 2 ～ 600 ng/L、アッセイ内およびアッセイ間のすべてのテストの CV は < 10% でした。