Betydningen af ​​prostaglandin- og nitrogenoxidsyntese ved apikal parodontitis

• Undersøgelsesdesign Denne observationelle, analytiske, tværsnitsundersøgelse blev udført på et enkelt center. For at nå den planlagte stikprøvestørrelse blev ca. 1200 patienter, som søgte ind på Institut for Endodonti ved xxxx universitet mellem juni 2021 og maj 2022 på grund af apikal parodontitis (AP) og/eller kronisk parodontitis (CP), registreret inklusive deres intraorale undersøgelse og demografiske karakteristika. Som et resultat af undersøgelsen blev 85 patienter med kun AP (AP-gruppe) og 50 patienter med kun CP (CP-gruppe), hvis diagnose blev bekræftet, inkluderet i undersøgelsen. Patienter med både AP og P blev udelukket fra undersøgelsen. Patienter, der havde taget antibiotika og/eller antiinflammatoriske lægemidler inden for de sidste 6 måneder, og patienter med graviditet eller amning blev også udelukket. Derudover blev personer med en historie med at bruge steroide eller ikke-steroide antiinflammatoriske lægemidler og højdosis biotin-vitamin inden for de sidste 48 timer udelukket fra undersøgelsen, da dette kan påvirke resultaterne. En sund kontrolgruppe på 50 frivillige uden parodontal patologi samt enhver akut/kronisk sygdom (muskel-/led-/knoglesygdomme, inflammatorisk tarmsygdom, lokal eller generaliseret infektion, alvorlig organsygdom, hjerte-kar-sygdom og diabetes mellitus) blev inkluderet i undersøgelsen . Dem, der indgår i forskningsgrupperne; tilfældigt udvalgt blandt personer med lignende køns-, alders- og vægtkarakteristika.
• Demografisk-klinisk historie Køn, alder, kropsmasseindeks (BMI), komorbiditetsstatus for alle patienter, der deltog i undersøgelsen, blev registreret. Patienternes rodbehandling (RCT), tandkrone, komposit/amalgam fyldninger (CF), antal manglende tænder (NMT) fund blev opnået som følge af intraoral undersøgelse.
• Scoring af periapikale og parodontale sygdomme Alle tænder, der var til stede i mundhulen, blev røntgenfotograferet, og tilstedeværelsen af ​​radiolucente billeder forbundet med den periapikale region og radiografisk knogletab blev vurderet. Panoramiske røntgenbilleder i undersøgelsen blev opnået ved hjælp af en digital panoramaenhed (VistaPano S, Durr Dental AG, Tyskland), der fungerede ved 73kVp og 10 mA med 13500 millisekunders eksponeringstid i standardtilstand. Til periapikale røntgenbilleder blev Carestream RVG 5200 (RVG; Carestream Health Inc, Atlanta, CA, USA) system brugt med en røntgenenhed, indstilling på 70 kV, 8 mA. Halveringsvinkelteknikken blev anvendt til at opnå de periapikale billeder. Derefter blev røntgenbillederne analyseret med Kodak Dental Imaging Software. Fra radiografisk evaluering af tænderne blev tilstedeværelsen af ​​periapikal radiolucens uden parodontal sygdom anset for tilstrækkelig til AP-diagnose. Abscess-scoring (AS-PAI) baseret på det periapikale indeks blev udført som en indikator for sygdomsprogression i AP-gruppen. Til denne scoring blev scoresystemet periapical index (PAI)10, som er et scoringssystem til radiografisk evaluering af apikal parodontitis, brugt. Følgelig blev AP-gruppen opdelt i 3 undergrupper. AS-PAI 1 (mild): dem, der har mindst 1 tand med enten PAI 3 eller PAI 4, AS-PAI 2 (moderat): dem, der kun har 1 tand med en PAI 5, AS-PAI 3 (alvorlig): dem, der har to eller flere tænder med en PAI 5.

Periodontale målinger, opnået til undersøgelsen, bestod af de højeste sonderingsdybder (i millimeter) registreret omkring seks udvalgte tænder pr. deltager. I denne undersøgelse blev CP-gruppen opdelt i 4 undergrupper i henhold til parodontitis-stadiesystemet (PSS) (Tonetti). Dette system klassificerer parodontitis fra I til IV i henhold til det interdentale kliniske tilknytningstab (CAL), radiografisk knogletab (RBL) og tandtab. Denne scoring er som følger: Trin 1: CAL 1 til 2 mm, RBL er ved koronal tredjedel (<15%) og intet tandtab, Trin 2: CAL 3 til 4 mm, RBL er ved koronal tredjedel (15% til 33% ) og intet tandtab, trin 3: CAL > 5 mm, RBL strækker sig til midten af ​​tredjedelen af ​​roden og derover, og tandtab < 4 tænder, og trin 4: CAL > 5 mm, RBL strækker sig til midten af ​​tredjedelen af ​​roden og derover og tandtab > 5 tænder. Fase 1 og 2 blev dog evalueret i samme gruppe på grund af det lave antal tilfælde. Som et resultat blev grupperne designet som Stage 1-2: PSS 1-2, Stage 2: PSS 2 og Stage 3: PSS 3.

• Indsamling af venøst ​​blod og tandkødscrevikulær væske (GCF) Faste (8-10 timer) venøst ​​blod fra alle deltagere blev taget fra underarmens antecubitale/basale vener. Efter at have holdt blodet ved stuetemperatur i 30 minutter, blev det centrifugeret ved 2500 xgi 10 minutter. Efter centrifugering blev det øvre serum af rørene adskilt. Hæmolyseindekser (HI) af seraene blev målt for at forhindre optisk interferens. (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). Dem med et hæmolyseindeks større end 50 (mg/dl Hb) blev udelukket fra undersøgelsen. Passende sera blev opbevaret ved -80oC indtil analysedagen. Ud over venøst ​​blod blev der også indsamlet prøver af tandkødscrevikulær væske (GCF), som blev opbevaret ved -80oC under lignende forhold. På analysedagen fik alle serum og GCF først lov til at opløses langsomt ved +4 oC og derefter bragt til stuetemperatur før måling.

Gingival crevikulær væskeprøver blev taget før parodontal sondering for at undgå kontaminering med blod. For at undgå kontaminering af prøven blev patienterne bedt om ikke at spise eller drikke noget i mindst 30 minutter før proceduren. Tre prøver blev taget fra de mesiale, distale og bukkale overflader af beslægtede tand. De udvalgte steder blev isoleret med en bomuldsrulle, og supragingival plak, hvis det var til stede, blev fjernet ved anvendelse af en curette for at forhindre spyt og/eller plakkontamination. GCF blev opsamlet i 60 sekunder under anvendelse af PerioPaper-strimler (OraFlow Inc., NY, USA) anbragt forsigtigt, indtil der kunne mærkes let modstand. De tre prøver blev samlet i Eppendorf-rør og derefter anbragt i laboratoriefryseren ved -80 °C til opbevaring. Periopaper blev grundigt vasket i 0,5 ml eppendorfrør (efter at have trukket egenvægten af ​​røret fra) med 100 µl phosphatpufret saltvand (PBS) ved anvendelse af en automatisk pipette. Blodplettede papirstrimler blev fjernet fra prøverne. Alle GCF-prøver blev vejet på en præcisionsvægt (Shimadzu Libror, Model AEG-220, Tyskland) og registreret. Alle prøver blev grundigt blandet med en 15-20 sekunders vortexanordning (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Tyskland). Dette gjorde det muligt for GCF at passere ind i PBS. Papirstrimlerne blev fjernet uden at forurene prøverne, og det resterende ekstrakt blev opbevaret i fryseren indtil arbejdsdagen. Resultaterne opnået på undersøgelsesdagen blev proportioneret efter vægt/PBS.

• Biokemiske analyser TNF-α-, IL-10-, NO- og PGE2-niveauer i sera fra alle patienter blev målt i Microplate ELISA Reader (BioTek Epoch 2 Microplate ELISA Reader, USA) ved hjælp af ELISA-metoden. På grund af den utilstrækkelige prøvemængde (100 µl) blev der kun målt NO- og PGE2-niveauer i GCF'et under anvendelse af det samme ELISA-kit.

Serum-TNF-a-, IL-10-, NO- og PGE2-niveauer blev analyseret under anvendelse af ELISA-plader, hvis brønde var præcoated med antistof (humant TNF-a, IL-10, NO eller PGE2). Følsomheden af ​​TNF-α, IL-10, NO og PGE2 testsæt (Bioassay Technology Laboratory, Kina) er 1,52 ng/L, 2,59 pg/mL, 1,12 µmol/L og 1,28 ng/L, måleområde 3-900 ng /L, henholdsvis 5-1500 pg/mL, 2-600 µmol/L og 2-600 ng/L, CV for alle test for intraassay og interassay var < 10%.