Syljen havaitseminen immunoaffiniteetilla ja massaspektrometrialla (SIMS)
Spesifisten sylkiproteiinien havaitseminen immunoaffiniteetilla ja massaspektrometrialla
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Ehdot
Yksityiskohtainen kuvaus
Jokaiseen osallistujaan otetaan yhteyttä puhelimitse vierailua edeltävänä päivänä, jotta he voivat esitellä tutkimuksen. Vierailupäivänä kerätään kahdenlaisia näytteitä:
- Sylkinäytteet: terveillä vapaaehtoisilla oikeuslääketieteen laitoksella (jotakin vapaaehtoista kohden kerätään 2 näytettä 1,5 - 2 ml).
- Emättimen näytteet: lisääntymislääketieteen osastolla konsultoivista naisista (2 kuivapuikkoa jokaisesta potilaasta). 2 ryhmää, yksi ryhmä vain emättimen eritenestenäytteitä ja yksi ryhmä emättimen eriteneste + siittiönäytteet.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Arvioitu)
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Yhteystiedot ja paikat
Opiskeluyhteys
- Nimi: Pierre-Antoine PEYRON, PI
- Puhelinnumero: +33 04 67 33 85 86
- Sähköposti: pa-peyron@chu-montpellier.fr
Tutki yhteystietojen varmuuskopiointi
- Nimi: Laëtitia LEVEQUE
- Puhelinnumero: +33 04 67 33 85 86
- Sähköposti: l-leveque@chu-montpellier.fr
Opiskelupaikat
-
-
-
Montpellier, Ranska, 34295
- PEYRON
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Aikuinen
- Vanhempi Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
Sylkinäytteet
- 18 vuotta täyttäneet miehet ja naiset
Emättimen näytteet:
- 18-vuotiaat tai vanhemmat naiset
- Ei suojaamatonta emätinyhdyntää käyntiä edeltäneiden 10 päivän aikana (ryhmä 1)
- Suojaamaton emättimen yhdyntä siemensyöksyllä 24 tuntia ennen käyntiä (ryhmä 2)
Poissulkemiskriteerit:
Sylkinäytteet:
- Sylkirauhasten aktiivinen patologia (infektio, kasvain)
- Suojaamaton suu-sukupuoliyhdyntä 24 tuntia ennen käyntiä
- Kirjallisen suostumuksen saamatta jättäminen harkinta-ajan jälkeen
- Raskaana olevat tai imettävät naiset
- Aikuinen lain suojaama tai holhouksen tai huoltajan alainen
- Ei kuulumista Ranskan sosiaaliturvajärjestelmään tai ei hyötyä tällaisesta järjestelmästä
Emättimen näytteet:
- Suu-sukupuolipuoliyhdyntä (cunnilingus) 24 tuntia ennen käyntiä
- Kirjallisen suostumuksen saamatta jättäminen harkinta-ajan jälkeen
- Raskaana olevat tai imettävät naiset
- Aikuinen lain suojaama tai holhouksen tai huoltajan alainen
- Ei kuulumista Ranskan sosiaaliturvajärjestelmään tai ei hyötyä tällaisesta järjestelmästä
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Muut
- Jako: Ei satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Ei mitään (avoin tarra)
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Muut: Sylki
Kahden sylkinäytteen keräys (n. 1,5–2 ml kutakin) passiivisella kuolaamalla terveillä vapaaehtoisilla Nämä näytteet sentrifugoidaan ja supernatantti kerätään. |
2 näytettä 1,5–2 ml sylkeä passiivisen syljenerityksen avulla terveiltä vapaaehtoisilta
näytteen valmistelu ja analysointi:
Laimennukset tehdään 10:stä 10:een (1/10, 1/100, 1/1000...), sitten kun havaittavuuskynnys on saavutettu, määritetään toisella tarkemmalla analyysillä (esim. jos ei signaalia 1/1000, analyysi 1/500, sitten 1/250 jne.). Analyyttinen herkkyys testataan kolmella kunkin tyypin näytteellä (sylki, emätin, emätin + siemenneste) tulosten toistettavuuden varmistamiseksi. Käyttäjät, jotka eivät tiedä syljen esiintymisestä näytteissä, suorittavat sitten sylkikohtaisen proteiinin havaitsemisanalyysin IP-LC-MS/MS-menetelmällä. |
|
Muut: Emättimen eritteet
Jotta päästään mahdollisimman lähelle todellista elämää, kaksi emättimen puikkoa (tunnetaan emättimen aukon kautta 2-3 cm pituudelta) otetaan steriilillä kuivalla vanupuikolla gynekologisen tutkimuksen aikana (ennen endovaginaalista ultraääntä tai muuta endovaginaalinen toimenpide) lisääntymislääketieteen palveluun kuuluvien potilaiden osalta.
|
näytteen valmistelu ja analysointi:
Laimennukset tehdään 10:stä 10:een (1/10, 1/100, 1/1000...), sitten kun havaittavuuskynnys on saavutettu, määritetään toisella tarkemmalla analyysillä (esim. jos ei signaalia 1/1000, analyysi 1/500, sitten 1/250 jne.). Analyyttinen herkkyys testataan kolmella kunkin tyypin näytteellä (sylki, emätin, emätin + siemenneste) tulosten toistettavuuden varmistamiseksi. Käyttäjät, jotka eivät tiedä syljen esiintymisestä näytteissä, suorittavat sitten sylkikohtaisen proteiinin havaitsemisanalyysin IP-LC-MS/MS-menetelmällä.
Emättimen eritteiden kokoelma kahdella kuivalla vanupuikolla naisilla
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Toistettavuus sylkinäytteiden välillä
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Arvioijan välinen sopimus sylkinäytteistä, joka sisältää ensimmäisen näytteen testaamisen ja toisen näytteen testaamisen uudelleen Tutkimuksen ensisijainen päätepiste on mitata toistettavuudesta tai arvioinnin sisäisestä sopimuksesta koostuvan protokollan luotettavuutta spesifisten sylkiproteiinien (histatiini tyyppi 1, PRP:t, kystatiini D) havaitsemiseksi IP-LC-MS/MS-menetelmällä aikuisten sylkinäytteissä. Arvioijan sisäinen sopimus (testi/uudelleentesti) mitataan niiden keskiarvolla +/- keskihajonnalla. Samasta näytteestä tehdään useita analyysejä (3 tai 4 välillä) sen määrittämiseksi, ovatko tulokset identtisiä |
3 kuukautta
|
|
Keskimääräinen tarkkuus teknikkojen välillä sylkinäytteissä
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Arvioijien välinen sopimus (Cohenin kappa-kerroin) sylkinäytteistä, joka sisältää useiden näytteiden testaamisen vähintään 2 eri teknikon toimesta Tutkimuksen ensisijainen päätepiste on mitata protokollan luotettavuus, joka koostuu välitarkkuudesta tai arvioijien välisestä sopimuksesta (Cohenin kappa-kerroin) spesifisten sylkiproteiinien (histatiini tyyppi 1, PRP:t, kystatiini D) havaitsemiseksi IP-LC:tä käyttämällä. -MS/MS-menetelmä aikuisten sylkinäytteillä. Kappa-kerroin antaa arvosanan välillä 0-1. Jos koodaajat ovat täysin samaa mieltä, κ = 1. Jos he ovat täysin eri mieltä (tai ovat samaa mieltä vain sattuman vuoksi), κ ≤ 0. |
3 kuukautta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Toistettavuus syljellä kasteltujen emättimen näytteiden välillä
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Arvioijan sisäinen sopimus syljellä kastetuista emätinnäytteistä Toissijaiset päätepisteet koostuvat ensisijaisten päätepisteiden toistamisesta (ts. toistettavuus ja keskimääräinen tarkkuus) emättimen näytteissä, jotka on kyllästetty siittiöillä vai ei. Jälleen sama näyte testataan useita kertoja (3 tai 4 välillä), jotta nähdään, ovatko tulokset samanlaisia. |
3 kuukautta
|
|
Keskimääräinen tarkkuus teknikkojen välillä syljellä kastetuissa emättimen näytteissä
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
: Arvioijien välinen sopimus (Cohenin kappakerroin) syljellä kastetuista emätinnäytteistä Toissijaiset päätepisteet koostuvat ensisijaisten päätepisteiden toistamisesta (ts. toistettavuus ja keskimääräinen tarkkuus) emättimen näytteissä, jotka on kyllästetty siittiöillä vai ei. Kappa-kerroin antaa arvosanan välillä 0-1. Jos koodaajat ovat täysin samaa mieltä, κ = 1. Jos he ovat täysin eri mieltä (tai ovat samaa mieltä vain sattuman vuoksi), κ ≤ 0. |
3 kuukautta
|
|
Analyyttinen herkkyys
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Alin menetelmällä havaittu sylkipitoisuus (µL) sylkinäytteistä ja syljellä kastetuista emätinnäytteistä kontrolloidussa tilassa
|
3 kuukautta
|
|
Diagnostinen herkkyys
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Sylkinäytteiden ja syljellä kasteltujen emättimen näytteiden analyysi kontrolloidussa tilassa todellisten positiivisten ja väärien negatiivisten havaitsemisnopeuden määrittämiseksi
|
3 kuukautta
|
|
Diagnostinen spesifisyys
Aikaikkuna: 3 kuukautta
|
Emättimen näytteiden ja kuivien näytteiden analyysi kontrolloidussa tilassa väärien positiivisten ja todellisten negatiivisten tulosten määrittämiseksi.
|
3 kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Tutkijat
- Opintojohtaja: Pierre-Antoine PEYRON, PI, University Hospital, Montpellier
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- LOI n°2021-478 du 21 avril 2021 visant à protéger les mineurs des crimes et délits sexuels et de l'inceste. JORF n°0095 du 22 avril 2021. Texte n°4
- Wornes DJ, Speers SJ, Murakami JA. The evaluation and validation of Phadebas(R) paper as a presumptive screening tool for saliva on forensic exhibits. Forensic Sci Int. 2018 Jul;288:81-88. doi: 10.1016/j.forsciint.2018.03.049. Epub 2018 Apr 20.
- Vandenberg N, van Oorschot RA. The use of Polilight in the detection of seminal fluid, saliva, and bloodstains and comparison with conventional chemical-based screening tests. J Forensic Sci. 2006 Mar;51(2):361-70. doi: 10.1111/j.1556-4029.2006.00065.x.
- Blanchard Muller M., Baccino E., Peyron P.A. Détection de traces salivaires dans le cadre d'agressions sexuelles : intérêt de l'utilisation d'une méthode immuno-chromatographique rapide (RSID-SalivaTest®) selon un protocole simplifié. Rev Médecine Légale 2023.
- Davidovics R, Saw YL, Brown CO, Prinz M, McKiernan HE, Danielson PB, Legg KM. High-throughput seminal fluid identification by automated immunoaffinity mass spectrometry. J Forensic Sci. 2022 May;67(3):1184-1190. doi: 10.1111/1556-4029.14975. Epub 2022 Jan 13.
- Sato H, Nakajima D, Ishikawa M, Konno R, Nakamura R, Ohara O, Kawashima Y. Evaluation of the Suitability of Dried Saliva Spots for In-Depth Proteome Analyses for Clinical Applications. J Proteome Res. 2022 May 6;21(5):1340-1348. doi: 10.1021/acs.jproteome.2c00099. Epub 2022 Apr 21.
- Yang H, Zhou B, Deng H, Prinz M, Siegel D. Body fluid identification by mass spectrometry. Int J Legal Med. 2013 Nov;127(6):1065-77. doi: 10.1007/s00414-013-0848-1. Epub 2013 Mar 24.
- Brown CO, Robbins BL, McKiernan HE, Danielson PB, Legg KM. Direct seminal fluid identification by protease-free high-resolution mass spectrometry. J Forensic Sci. 2021 May;66(3):1017-1023. doi: 10.1111/1556-4029.14646. Epub 2020 Dec 8.
- Legg KM, Powell R, Reisdorph N, Reisdorph R, Danielson PB. Discovery of highly specific protein markers for the identification of biological stains. Electrophoresis. 2014 Nov;35(21-22):3069-78. doi: 10.1002/elps.201400125. Epub 2014 Oct 1.
- Van Steendam K, De Ceuleneer M, Dhaenens M, Van Hoofstat D, Deforce D. Mass spectrometry-based proteomics as a tool to identify biological matrices in forensic science. Int J Legal Med. 2013 Mar;127(2):287-98. doi: 10.1007/s00414-012-0747-x. Epub 2012 Jul 29.
- Illiano A, Arpino V, Pinto G, Berti A, Verdoliva V, Peluso G, Pucci P, Amoresano A. Multiple Reaction Monitoring Tandem Mass Spectrometry Approach for the Identification of Biological Fluids at Crime Scene Investigations. Anal Chem. 2018 May 1;90(9):5627-5636. doi: 10.1021/acs.analchem.7b04742. Epub 2018 Apr 13.
- Legg KM, Powell R, Reisdorph N, Reisdorph R, Danielson PB. Verification of protein biomarker specificity for the identification of biological stains by quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Electrophoresis. 2017 Mar;38(6):833-845. doi: 10.1002/elps.201600352. Epub 2017 Jan 30.
- de Beijer RP, de Graaf C, van Weert A, van Leeuwen TG, Aalders MCG, van Dam A. Identification and detection of protein markers to differentiate between forensically relevant body fluids. Forensic Sci Int. 2018 Sep;290:196-206. doi: 10.1016/j.forsciint.2018.07.013. Epub 2018 Jul 24.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Arvioitu)
Ensisijainen valmistuminen (Arvioitu)
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvioitu)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Arvioitu)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muut tutkimustunnusnumerot
- RECHMPL23_0098
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .