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Rilevazione della saliva mediante immunoaffinità e spettrometria di massa (SIMS)

13 dicembre 2023 aggiornato da: University Hospital, Montpellier

Rilevazione di proteine ​​salivari specifiche mediante immunoaffinità e spettrometria di massa

L'identificazione della saliva nella zona genitale durante un'indagine penale può essere una componente fondamentale nel perseguimento di una violenza sessuale in Francia, poiché i rapporti orale-genitali non consensuali sono considerati crimini dal 2021. Lo sviluppo di metodi altamente specifici per la saliva il rilevamento è quindi fondamentale poiché i metodi di screening comunemente utilizzati mancano di specificità. La spettrometria di massa proteica ha dimostrato di essere un metodo sensibile e specifico ma richiede particolarmente tempo. Recentemente è stato sviluppato un approccio ibrido più veloce e più sensibile che utilizza la spettrometria di massa di immunoaffinità automatizzata (IP-LC-MS/MS) e si è rivelato particolarmente efficace per il rilevamento di una proteina del liquido seminale (semenogelina), consentendo un elevato throughput identificazione del liquido seminale nei campioni di sperma. Come la semenogelina, proteine ​​salivari specifiche come l’istatina di tipo 1, la cistatina D o le proteine ​​ricche di prolina (PRP) potrebbero essere rilevate utilizzando questo approccio promettente, che non è mai stato testato su campioni di saliva. In collaborazione con la Piattaforma di Proteomica Clinica e il Dipartimento di Medicina della Riproduzione dell'Ospedale Universitario di Montpellier, miriamo a sviluppare un protocollo per il rilevamento di proteine ​​specifiche della saliva mediante IP-LC-MS/MS in campioni di tipo violenza sessuale.

Panoramica dello studio

Stato

Non ancora reclutamento

Condizioni

Intervento / Trattamento

Descrizione dettagliata

Ciascun partecipante verrà contattato telefonicamente il giorno prima della visita, per presentarsi per una presentazione dello studio. Il giorno della visita verranno raccolte due tipologie di campioni:

  • Campioni di saliva: su volontari sani del Dipartimento di Medicina Legale (per ogni volontario vengono raccolti 2 campioni da 1,5 - 2 mL).
  • Prelievi vaginali: su donne consultate presso il Dipartimento di Medicina della Riproduzione (2 tamponi asciutti su ciascuna paziente). 2 gruppi, un gruppo con solo campioni di fluido di secrezione vaginale e un gruppo con campioni di fluido di secrezione vaginale + sperma.

Tipo di studio

Interventistico

Iscrizione (Stimato)

35

Fase

  • Non applicabile

Contatti e Sedi

Questa sezione fornisce i recapiti di coloro che conducono lo studio e informazioni su dove viene condotto lo studio.

Contatto studio

Backup dei contatti dello studio

Luoghi di studio

  • Francia
      • Montpellier, Francia, 34295
        • PEYRON

Criteri di partecipazione

I ricercatori cercano persone che corrispondano a una certa descrizione, chiamata criteri di ammissibilità. Alcuni esempi di questi criteri sono le condizioni generali di salute di una persona o trattamenti precedenti.

Criteri di ammissibilità

Età idonea allo studio

  • Adulto
  • Adulto più anziano

Accetta volontari sani

Sì

Descrizione

Criterio di inclusione:

Campioni di saliva

  • Uomini e donne di età pari o superiore a 18 anni

Campioni vaginali:

  • Donne di età pari o superiore a 18 anni
  • Nessun rapporto sessuale vaginale non protetto nei 10 giorni precedenti la visita (gruppo 1)
  • Rapporti sessuali vaginali non protetti con eiaculazione nelle 24 ore precedenti la visita (gruppo 2)

Criteri di esclusione:

Campioni di saliva:

  • Patologia attiva delle ghiandole salivari (infezione, tumore)
  • Rapporti sessuali oro-genitali non protetti nelle 24 ore precedenti la visita
  • Mancato ottenimento del consenso informato scritto dopo un periodo di riflessione
  • Donne incinte o che allattano
  • Adulto protetto dalla legge o sotto tutela o curatela
  • Nessuna affiliazione al sistema di previdenza sociale francese o nessun beneficio da tale sistema

Campioni vaginali:

  • Rapporti sessuali oro-genitali (cunnilingus) nelle 24 ore precedenti la visita
  • Mancato ottenimento del consenso informato scritto dopo un periodo di riflessione
  • Donne incinte o che allattano
  • Adulto protetto dalla legge o sotto tutela o curatela
  • Nessuna affiliazione al sistema di previdenza sociale francese o nessun beneficio da tale sistema

Piano di studio

Questa sezione fornisce i dettagli del piano di studio, compreso il modo in cui lo studio è progettato e ciò che lo studio sta misurando.

Come è strutturato lo studio?

Dettagli di progettazione

  • Scopo principale: Altro
  • Assegnazione: Non randomizzato
  • Modello interventistico: Assegnazione parallela
  • Mascheramento: Nessuno (etichetta aperta)

Armi e interventi

Gruppo di partecipanti / Arm
Intervento / Trattamento
Altro: Saliva

Raccolta di due campioni di saliva (ca. da 1,5 a 2 ml ciascuno) mediante sbavatura passiva in volontari sani

Questi campioni verranno centrifugati e il surnatante raccolto.
Altro: Raccolta della saliva
Raccolta di 2 campioni da 1,5 a 2 ml di saliva mediante salivazione passiva in volontari sani
Altro: IP-LC-MS/MS: arricchimento con immunoprecipitazione con cromatografia liquida accoppiata a spettrometria di massa tandem

preparazione e analisi del campione:

  • Impregnazione delle punte (cotone assorbente) di tamponi sterili asciutti e vaginali con quantità controllate di saliva.
  • Immunocattura delle proteine ​​salivari di interesse (istatina di tipo 1, cistatina D, PRP) mediante purificazione per affinità della proteina A
  • Analisi LC-MS/MS di peptidi purificati eluiti (modalità Monitoraggio reazione multipla)

Si effettueranno diluizioni da 10 a 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), poi al raggiungimento di una soglia di rilevabilità, specificata da una seconda analisi più precisa (es. se nessun segnale a 1/1000, analisi a 1/500 poi 1/250 ecc.). La sensibilità analitica sarà testata su tre campioni di ciascun tipo (salivare, vaginale, vaginale + sperma) per garantire la riproducibilità dei risultati.

Gli operatori, ignari della presenza di saliva nei campioni, effettueranno quindi l'analisi di rilevamento delle proteine ​​specifiche della saliva utilizzando il metodo IP-LC-MS/MS.
Altro: Secrezioni vaginali
Per avvicinarsi il più possibile alla vita reale, durante l'esame ginecologico (prima dell'ecografia endovaginale o di qualsiasi altra procedura) verranno prelevati due tamponi vaginali (introdotti attraverso l'orifizio vaginale per una lunghezza di 2-3 cm) con un tampone asciutto sterile. procedura endovaginale) delle pazienti inserite nel Servizio di Medicina della Riproduzione.
Altro: IP-LC-MS/MS: arricchimento con immunoprecipitazione con cromatografia liquida accoppiata a spettrometria di massa tandem

preparazione e analisi del campione:

  • Impregnazione delle punte (cotone assorbente) di tamponi sterili asciutti e vaginali con quantità controllate di saliva.
  • Immunocattura delle proteine ​​salivari di interesse (istatina di tipo 1, cistatina D, PRP) mediante purificazione per affinità della proteina A
  • Analisi LC-MS/MS di peptidi purificati eluiti (modalità Monitoraggio reazione multipla)

Si effettueranno diluizioni da 10 a 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), poi al raggiungimento di una soglia di rilevabilità, specificata da una seconda analisi più precisa (es. se nessun segnale a 1/1000, analisi a 1/500 poi 1/250 ecc.). La sensibilità analitica sarà testata su tre campioni di ciascun tipo (salivare, vaginale, vaginale + sperma) per garantire la riproducibilità dei risultati.

Gli operatori, ignari della presenza di saliva nei campioni, effettueranno quindi l'analisi di rilevamento delle proteine ​​specifiche della saliva utilizzando il metodo IP-LC-MS/MS.

Altro: Raccolta delle secrezioni vaginali
Raccolta delle secrezioni vaginali con 2 tamponi asciutti nella donna

Cosa sta misurando lo studio?

Misure di risultato primarie

Misura del risultato
Misura Descrizione
Lasso di tempo
Riproducibilità tra campioni di saliva
Lasso di tempo: 3 mesi

Accordo intra-valutatore sui campioni di saliva, che prevede l'analisi del primo campione e la ripetizione dell'analisi del secondo campione

L'endpoint primario dello studio sarà misurare l'affidabilità del protocollo, consistente nella riproducibilità o nell'accordo intra-valutatore, per la rilevazione di proteine ​​salivari specifiche (istatina di tipo 1, PRP, cistatina D) utilizzando il metodo IP-LC-MS/MS su campioni di saliva di adulti.

L'accordo intra-valutatore (test/ritest) sarà misurato mediante la loro media +/- deviazione standard.

Verranno effettuate diverse analisi (tra 3 o 4) sullo stesso campione per determinare se i risultati sono identici
3 mesi
Fedeltà intermedia tra tecnici sui campioni di saliva
Lasso di tempo: 3 mesi

Accordo tra valutatori (coefficiente kappa di Cohen) sui campioni di saliva, che prevede l'analisi di diversi campioni da parte di almeno 2 tecnici diversi

L'endpoint primario dello studio sarà quello di misurare l'affidabilità del protocollo, consistente nella fedeltà intermedia o accordo inter-valutatore (coefficiente kappa di Cohen) per il rilevamento di proteine ​​salivari specifiche (istatina di tipo 1, PRP, cistatina D) utilizzando l'IP-LC -Metodo MS/MS su campioni di saliva di adulti.

Il coefficiente kappa dà un punteggio compreso tra 0 e 1. Se i codificatori sono totalmente d'accordo, κ = 1. Se sono totalmente in disaccordo (o sono d'accordo solo per caso), κ ≤ 0.
3 mesi

Misure di risultato secondarie

Misura del risultato
Misura Descrizione
Lasso di tempo
Riproducibilità tra campioni vaginali imbevuti di saliva
Lasso di tempo: 3 mesi

Accordo intra-valutatore su campioni vaginali imbevuti di saliva

Gli endpoint secondari consisteranno nel ripetere gli endpoint primari (ad es. riproducibilità e fedeltà intermedia) sui campioni vaginali impregnati o meno di sperma.

Anche in questo caso, lo stesso campione verrà testato più volte (tra 3 o 4) per vedere se i risultati tornano simili.
3 mesi
Fedeltà intermedia tra tecnici su campioni vaginali imbevuti di saliva
Lasso di tempo: 3 mesi

: Accordo tra valutatori (coefficiente kappa di Cohen) su campioni vaginali imbevuti di saliva

Gli endpoint secondari consisteranno nel ripetere gli endpoint primari (ad es. riproducibilità e fedeltà intermedia) sui campioni vaginali impregnati o meno di sperma.

Il coefficiente kappa dà un punteggio compreso tra 0 e 1. Se i codificatori sono totalmente d'accordo, κ = 1. Se sono totalmente in disaccordo (o sono d'accordo solo per caso), κ ≤ 0.
3 mesi
Sensibilità analitica
Lasso di tempo: 3 mesi
Concentrazione di saliva più bassa (μL) rilevata dal metodo su campioni di saliva e su campioni vaginali imbevuti di saliva in condizioni controllate
3 mesi
Sensibilità diagnostica
Lasso di tempo: 3 mesi
Analisi di campioni di saliva e campioni vaginali imbevuti di saliva in condizioni controllate, per determinare il tasso di rilevamento di veri positivi e falsi negativi
3 mesi
Specificità diagnostica
Lasso di tempo: 3 mesi
Analisi di campioni vaginali e campioni secchi in condizioni controllate, per determinare il tasso di falsi positivi e veri negativi.
3 mesi

Collaboratori e investigatori

Qui è dove troverai le persone e le organizzazioni coinvolte in questo studio.

Sponsor

University Hospital, Montpellier

Investigatori

  • Direttore dello studio: Pierre-Antoine PEYRON, PI, University Hospital, Montpellier

Pubblicazioni e link utili

La persona responsabile dell'inserimento delle informazioni sullo studio fornisce volontariamente queste pubblicazioni. Questi possono riguardare qualsiasi cosa relativa allo studio.

Pubblicazioni generali

Collegamenti utili

Studiare le date dei record

Queste date tengono traccia dell'avanzamento della registrazione dello studio e dell'invio dei risultati di sintesi a ClinicalTrials.gov. I record degli studi e i risultati riportati vengono esaminati dalla National Library of Medicine (NLM) per assicurarsi che soddisfino specifici standard di controllo della qualità prima di essere pubblicati sul sito Web pubblico.

Studia le date principali

Inizio studio (Stimato)

15 gennaio 2024

Completamento primario (Stimato)

15 luglio 2024

Completamento dello studio (Stimato)

31 dicembre 2024

Date di iscrizione allo studio

Primo inviato

18 agosto 2023

Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità

13 dicembre 2023

Primo Inserito (Stimato)

27 dicembre 2023

Aggiornamenti dei record di studio

Ultimo aggiornamento pubblicato (Stimato)

27 dicembre 2023

Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC

13 dicembre 2023

Ultimo verificato

1 dicembre 2023

Maggiori informazioni

Termini relativi a questo studio

Parole chiave

Altri numeri di identificazione dello studio

  • RECHMPL23_0098

Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio

Studia un prodotto farmaceutico regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti

No

Studia un dispositivo regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti

No

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