면역친화성과 질량 분석법을 통한 타액 검출 (SIMS)

2개의 타액 샘플 수집(약 1시간) 건강한 자원자의 경우 수동 침을 흘림으로써 각 1.5~2mL

이들 샘플은 원심분리되고 상청액이 수집됩니다.

샘플 준비 및 분석:

• 멸균된 건조 면봉과 질 면봉의 팁(흡수성 면봉)에 조절된 양의 타액을 함침시킵니다.
• 단백질 A 친화성 정제를 통한 관심 타액 단백질(히스타틴 유형 1, 시스타틴 D, PRP)의 면역포획
• 용출된 정제 펩타이드의 LC-MS/MS 분석(다중 반응 모니터링 모드)

희석은 10에서 10(1/10, 1/100, 1/1000...)으로 이루어지며, 검출 가능성 임계값에 도달한 후 두 번째로 보다 정확한 분석을 통해 지정됩니다(예: 1/1000에서 신호가 없는 경우 분석 1/500, 그 다음 1/250 등). 결과의 재현성을 보장하기 위해 각 유형(타액, 질, 질 + 정액)의 세 가지 샘플에 대해 분석 감도를 테스트합니다.

샘플에 타액이 있는지 알지 못하는 작업자는 IP-LC-MS/MS 방법을 사용하여 타액 특이적 단백질 검출 분석을 수행합니다.

샘플 준비 및 분석:

• 멸균된 건조 면봉과 질 면봉의 팁(흡수성 면봉)에 조절된 양의 타액을 함침시킵니다.
• 단백질 A 친화성 정제를 통한 관심 타액 단백질(히스타틴 유형 1, 시스타틴 D, PRP)의 면역포획
• 용출된 정제 펩타이드의 LC-MS/MS 분석(다중 반응 모니터링 모드)

희석은 10에서 10(1/10, 1/100, 1/1000...)으로 이루어지며, 검출 가능성 임계값에 도달한 후 두 번째로 보다 정확한 분석을 통해 지정됩니다(예: 1/1000에서 신호가 없는 경우 분석 1/500, 그 다음 1/250 등). 결과의 재현성을 보장하기 위해 각 유형(타액, 질, 질 + 정액)의 세 가지 샘플에 대해 분석 감도를 테스트합니다.

샘플에 타액이 있는지 알지 못하는 작업자는 IP-LC-MS/MS 방법을 사용하여 타액 특이적 단백질 검출 분석을 수행합니다.

첫 번째 샘플을 테스트하고 두 번째 샘플을 다시 테스트하는 타액 샘플에 대한 평가자 간 합의

연구의 1차 평가변수는 IP-LC-MS/MS 방법을 사용하여 특정 타액 단백질(히스타틴 1형, PRP, 시스타틴 D)을 검출하기 위한 재현성 또는 평가자 간 합의로 구성된 프로토콜의 신뢰성을 측정하는 것입니다. 성인 타액 샘플에서.

평가자 간 합의(테스트/재테스트)는 평균 +/- 표준 편차로 측정됩니다.

결과가 동일한지 확인하기 위해 동일한 샘플에 대해 여러 가지 분석(3~4개)이 수행됩니다.

최소 2명의 다른 기술자가 여러 샘플을 테스트하는 타액 샘플에 대한 평가자 간 합의(코헨의 카파 계수)

연구의 일차 평가변수는 IP-LC를 사용하여 특정 타액 단백질(히스타틴 1형, PRP, 시스타틴 D) 검출을 위한 중간 충실도 또는 평가자 간 합의(코헨의 카파 계수)로 구성된 프로토콜의 신뢰성을 측정하는 것입니다. -성인 타액 샘플에 대한 MS/MS 방법.

카파 계수는 0에서 1 사이의 점수를 제공합니다. 코더가 완전히 동의하면 κ = 1입니다. 완전히 동의하지 않는 경우(또는 우연히 동의하는 경우) κ ≤ 0입니다.

타액에 젖은 질 샘플에 대한 평가자 간 합의

2차 종점은 1차 종점(즉, 재현성 및 중간 충실도) 정자가 함침된 질 샘플에 대한 여부입니다.

이번에도 동일한 샘플을 여러 번(3~4회) 테스트하여 결과가 비슷한지 확인합니다.

: 타액에 적셔진 질 샘플에 대한 평가자 간 일치도(Cohen's kappa 계수)

2차 종점은 1차 종점(즉, 재현성 및 중간 충실도) 정자가 함침된 질 샘플에 대한 여부입니다.

카파 계수는 0에서 1 사이의 점수를 제공합니다. 코더가 완전히 동의하면 κ = 1입니다. 완전히 동의하지 않는 경우(또는 우연히 동의하는 경우) κ ≤ 0입니다.