通过免疫亲和和质谱检测唾液 (SIMS)

采集两份唾液样本（约 健康志愿者被动流口水（每次 1.5 至 2 毫升）

这些样品将被离心并收集上清液。

样品制备和分析：

• 用控制量的唾液浸渍无菌干拭子和阴道拭子的尖端（脱脂棉）。
• 通过蛋白 A 亲和纯化免疫捕获感兴趣的唾液蛋白（组氨酸 1 型、半胱氨酸蛋白酶抑制剂 D、PRP）
• 对洗脱的纯化肽进行 LC-MS/MS 分析（多反应监测模式）

将从 10 稀释到 10（1/10、1/100、1/1000...），然后在达到可检测阈值后，通过第二次更精确的分析指定（例如，如果在 1/1000 处没有信号，则分析先是 1/500，然后是 1/250，等等）。 将对每种类型（唾液、阴道、阴道+精液）的三个样本进行分析灵敏度测试，以确保结果的可重复性。

操作员在不知道样品中存在唾液的情况下，将使用 IP-LC-MS/MS 方法进行唾液特异性蛋白质检测分析。

样品制备和分析：

• 用控制量的唾液浸渍无菌干拭子和阴道拭子的尖端（脱脂棉）。
• 通过蛋白 A 亲和纯化免疫捕获感兴趣的唾液蛋白（组氨酸 1 型、半胱氨酸蛋白酶抑制剂 D、PRP）
• 对洗脱的纯化肽进行 LC-MS/MS 分析（多反应监测模式）

将从 10 稀释到 10（1/10、1/100、1/1000...），然后在达到可检测阈值后，通过第二次更精确的分析指定（例如，如果在 1/1000 处没有信号，则分析先是 1/500，然后是 1/250，等等）。 将对每种类型（唾液、阴道、阴道+精液）的三个样本进行分析灵敏度测试，以确保结果的可重复性。

操作员在不知道样品中存在唾液的情况下，将使用 IP-LC-MS/MS 方法进行唾液特异性蛋白质检测分析。

唾液样本的评估员内部协议，包括测试第一个样本并重新测试第二个样本

该研究的主要终点是衡量使用 IP-LC-MS/MS 方法检测特定唾液蛋白（组氨酸 1 型、PRP、胱抑素 D）的方案的可靠性，包括再现性或评估者内部一致性成人唾液样本。

评估者内部的一致性（测试/重新测试）将通过他们的平均值+/-标准差来衡量。

对同一样品进行多次分析（3 或 4 次）以确定结果是否相同

唾液样本的评估者间协议（科恩卡帕系数），其中涉及由至少 2 名不同的技术人员测试多个样本

该研究的主要终点是衡量方案的可靠性，包括使用 IP-LC 检测特定唾液蛋白（组氨酸 1 型、PRP、胱抑素 D）的中间保真度或评估者间一致性（科恩卡帕系数） -成人唾液样本的 MS/MS 方法。

kappa 系数给出的分数范围为 0 到 1。 如果编码员完全同意，κ = 1。 如果他们完全不同意（或仅仅由于偶然而同意），则 κ ≤ 0。

评估员内部对唾液浸泡的阴道样本达成一致

次要终点将包括重复主要终点（即 再现性和中间保真度）对是否受精或未受精的阴道样本进行评估。

同样，同一样本将被测试多次（3 到 4 次），看看结果是否相似。

: 唾液浸泡的阴道样本的评估者间一致性（科恩卡帕系数）

次要终点将包括重复主要终点（即 再现性和中间保真度）对是否受精或未受精的阴道样本进行评估。

kappa 系数给出的分数范围为 0 到 1。 如果编码员完全同意，κ = 1。 如果他们完全不同意（或仅仅由于偶然而同意），则 κ ≤ 0。