Эта страница была переведена автоматически, точность перевода не гарантируется. Пожалуйста, обратитесь к английской версии для исходного текста.

Обнаружение слюны методами иммуноаффинности и масс-спектрометрии (SIMS)

13 декабря 2023 г. обновлено: University Hospital, Montpellier

Обнаружение специфических белков слюны методами иммуноаффинности и масс-спектрометрии

Обнаружение слюны в области гениталий в ходе уголовного расследования может стать решающим компонентом в судебном преследовании за сексуальное насилие во Франции, поскольку с 2021 года орально-генитальные половые сношения без согласия считаются преступлением. Разработка высокоспецифичных методов исследования слюны Поэтому выявление имеет решающее значение, поскольку обычно используемые методы скрининга не обладают специфичностью. Белковая масс-спектрометрия оказалась чувствительным и специфичным методом, но требует особенно много времени. Недавно был разработан более быстрый и более чувствительный гибридный подход с использованием автоматизированной иммуноаффинной масс-спектрометрии (IP-LC-MS/MS), который оказался особенно эффективным для обнаружения белка семенной жидкости (семеногелина), что позволяет проводить высокопроизводительные исследования. идентификация семенной жидкости в образцах спермы. Как и семеногелин, специфические белки слюны, такие как гистатин типа 1, цистатин D или богатые пролином белки (PRP), можно обнаружить с помощью этого многообещающего подхода, который никогда не тестировался на образцах слюны. В сотрудничестве с Платформой клинической протеомики и отделением репродуктивной медицины Университетской больницы Монпелье мы стремимся разработать протокол для обнаружения специфических белков слюны методом IP-LC-MS/MS в образцах, подвергшихся сексуальному насилию.

Обзор исследования

Статус

Еще не набирают

Условия

Вмешательство/лечение

Подробное описание

За день до визита с каждым участником свяжутся по телефону, чтобы представить презентацию исследования. В день визита будут собраны два типа образцов:

  • Пробы слюны: у здоровых добровольцев в отделении судебной медицины (у каждого добровольца отбирают 2 пробы по 1,5 – 2 мл).
  • Вагинальные пробы: у женщин, консультирующихся в отделении репродуктивной медицины (2 сухих мазка на каждую пациентку). 2 группы: одна группа только с образцами жидкости вагинального секрета и одна группа с образцами жидкости вагинального секрета + образцы спермы.

Тип исследования

Интервенционный

Регистрация (Оцененный)

35

Фаза

  • Непригодный

Контакты и местонахождение

В этом разделе приведены контактные данные лиц, проводящих исследование, и информация о том, где проводится это исследование.

Контакты исследования

  • Имя: Pierre-Antoine PEYRON, PI
  • Номер телефона: +33 04 67 33 85 86
  • Электронная почта: pa-peyron@chu-montpellier.fr

Учебное резервное копирование контактов

Места учебы

Критерии участия

Исследователи ищут людей, которые соответствуют определенному описанию, называемому критериям приемлемости. Некоторыми примерами этих критериев являются общее состояние здоровья человека или предшествующее лечение.

Критерии приемлемости

Возраст, подходящий для обучения

  • Взрослый
  • Пожилой взрослый

Принимает здоровых добровольцев

Да

Описание

Критерии включения:

Образцы слюны

  • Мужчины и женщины в возрасте 18 лет и старше

Вагинальные образцы:

  • Женщины в возрасте 18 лет и старше
  • Отсутствие незащищенных вагинальных половых контактов в течение 10 дней до визита (1-я группа)
  • Незащищенный вагинальный половой акт с эякуляцией за 24 часа до визита (2-я группа)

Критерий исключения:

Образцы слюны:

  • Активная патология слюнных желез (инфекция, опухоль)
  • Незащищенный орально-генитальный половой акт за 24 часа до визита.
  • Неполучение письменного информированного согласия после периода размышлений
  • Беременные или кормящие женщины
  • Совершеннолетнее лицо, охраняемое законом или находящееся под опекой или попечительством
  • Отсутствие принадлежности к французской системе социального обеспечения или отсутствие выгод от такой системы.

Вагинальные образцы:

  • Орально-генитальный половой акт (кунилингус) за 24 часа до визита
  • Неполучение письменного информированного согласия после периода размышлений
  • Беременные или кормящие женщины
  • Совершеннолетнее лицо, охраняемое законом или находящееся под опекой или попечительством
  • Отсутствие принадлежности к французской системе социального обеспечения или отсутствие выгод от такой системы.

Учебный план

В этом разделе представлена ​​подробная информация о плане исследования, в том числе о том, как планируется исследование и что оно измеряет.

Как устроено исследование?

Детали дизайна

  • Основная цель: Другой
  • Распределение: Нерандомизированный
  • Интервенционная модель: Параллельное назначение
  • Маскировка: Нет (открытая этикетка)

Оружие и интервенции

Группа участников / Армия
Вмешательство/лечение
Другой: Слюна

Сбор двух образцов слюны (ок. по 1,5–2 мл каждый) путем пассивного слюнотечения у здоровых добровольцев.

Эти образцы будут центрифугированы и собран супернатант.
Другой: Сбор слюны
Сбор 2 образцов слюны по 1,5–2 мл методом пассивного слюноотделения у здоровых добровольцев.
Другой: IP-ЖХ-МС/МС: иммунопреципитационное обогащение с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией.

подготовка и анализ проб:

  • Пропитка кончиков (впитывающая вата) стерильных сухих тампонов и вагинальных тампонов контролируемым количеством слюны.
  • Иммунозахват интересующих белков слюны (гистатин типа 1, цистатин D, PRP) путем аффинной очистки белка А
  • ЖХ-МС/МС анализ элюированных очищенных пептидов (режим мониторинга множественных реакций)

Разведения будут производиться от 10 до 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), затем после достижения порога обнаружения, определенного вторым более точным анализом (например, если нет сигнала при 1/1000, анализ на 1/500, затем на 1/250 и т. д.). Аналитическая чувствительность будет проверена на трех образцах каждого типа (слюна, вагинальная, вагинальная + сперма) для обеспечения воспроизводимости результатов.

Операторы, не подозревая о наличии слюны в образцах, затем проведут анализ обнаружения специфического белка слюны с использованием метода IP-LC-MS/MS.
Другой: Вагинальные выделения
Чтобы быть максимально приближенным к реальной жизни, во время гинекологического обследования (перед эндовагинальным УЗИ или любым другим эндовагинальная процедура) пациенток, включенных в Службу репродуктивной медицины.
Другой: IP-ЖХ-МС/МС: иммунопреципитационное обогащение с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией.

подготовка и анализ проб:

  • Пропитка кончиков (впитывающая вата) стерильных сухих тампонов и вагинальных тампонов контролируемым количеством слюны.
  • Иммунозахват интересующих белков слюны (гистатин типа 1, цистатин D, PRP) путем аффинной очистки белка А
  • ЖХ-МС/МС анализ элюированных очищенных пептидов (режим мониторинга множественных реакций)

Разведения будут производиться от 10 до 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), затем после достижения порога обнаружения, определенного вторым более точным анализом (например, если нет сигнала при 1/1000, анализ на 1/500, затем на 1/250 и т. д.). Аналитическая чувствительность будет проверена на трех образцах каждого типа (слюна, вагинальная, вагинальная + сперма) для обеспечения воспроизводимости результатов.

Операторы, не подозревая о наличии слюны в образцах, затем проведут анализ обнаружения специфического белка слюны с использованием метода IP-LC-MS/MS.

Другой: Сбор вагинального секрета
Сбор влагалищного секрета двумя сухими тампонами у женщин.

Что измеряет исследование?

Первичные показатели результатов

Мера результата
Мера Описание
Временное ограничение
Воспроизводимость между образцами слюны
Временное ограничение: 3 месяца

Соглашение между экспертами по образцам слюны, которое включает тестирование первого образца и повторное тестирование второго образца.

Основной конечной точкой исследования будет измерение надежности протокола, состоящего из воспроизводимости или согласия внутри эксперта, для обнаружения специфических белков слюны (гистатин типа 1, PRP, цистатин D) с использованием метода IP-LC-MS/MS. на образцах слюны взрослых.

Согласие между экспертами (тестирование/повторное тестирование) будет измеряться их средним значением +/- стандартное отклонение.

Будет проведено несколько анализов (от 3 до 4) одного и того же образца, чтобы определить, идентичны ли результаты.
3 месяца
Средний уровень точности между техническими специалистами при работе с образцами слюны
Временное ограничение: 3 месяца

Соглашение между экспертами (коэффициент Каппа Коэна) по образцам слюны, которое предполагает тестирование нескольких образцов как минимум двумя разными специалистами.

Основной конечной точкой исследования будет измерение надежности протокола, состоящего из промежуточной точности или согласия между экспертами (коэффициент Каппа Коэна) для обнаружения специфических белков слюны (гистатин типа 1, PRP, цистатин D) с использованием IP-LC. -Метод МС/МС на образцах слюны взрослых.

Коэффициент каппа дает оценку от 0 до 1. Если кодировщики полностью согласны, κ = 1. Если они совершенно не согласны (или соглашаются исключительно случайно), κ ≤ 0.
3 месяца

Вторичные показатели результатов

Мера результата
Мера Описание
Временное ограничение
Воспроизводимость между вагинальными образцами, пропитанными слюной
Временное ограничение: 3 месяца

Соглашение между экспертами по вагинальным образцам, пропитанным слюной

Вторичные конечные точки будут состоять из повторения первичных конечных точек (т.е. воспроизводимость и промежуточная точность) на вагинальных образцах, пропитанных или не пропитанных спермой.

Опять же, один и тот же образец будет протестирован несколько раз (3 или 4), чтобы увидеть, будут ли результаты одинаковыми.
3 месяца
Промежуточная точность между техническими специалистами при исследовании вагинальных образцов, пропитанных слюной.
Временное ограничение: 3 месяца

: Соглашение между экспертами (коэффициент Каппа Коэна) на вагинальных образцах, пропитанных слюной.

Вторичные конечные точки будут состоять из повторения первичных конечных точек (т.е. воспроизводимость и промежуточная точность) на вагинальных образцах, пропитанных или не пропитанных спермой.

Коэффициент каппа дает оценку от 0 до 1. Если кодировщики полностью согласны, κ = 1. Если они совершенно не согласны (или соглашаются исключительно случайно), κ ≤ 0.
3 месяца
Аналитическая чувствительность
Временное ограничение: 3 месяца
Самая низкая концентрация слюны (мкл), обнаруженная методом на образцах слюны и на образцах из влагалища, пропитанных слюной в контролируемых условиях.
3 месяца
Диагностическая чувствительность
Временное ограничение: 3 месяца
Анализ образцов слюны и вагинальных образцов, пропитанных слюной в контролируемом состоянии, для определения скорости обнаружения истинно положительных и ложно отрицательных результатов.
3 месяца
Специфика диагностики
Временное ограничение: 3 месяца
Анализ вагинальных образцов и сухих образцов в контролируемом состоянии для определения частоты ложноположительных и истинно отрицательных результатов.
3 месяца

Соавторы и исследователи

Здесь вы найдете людей и организации, участвующие в этом исследовании.

Спонсор

University Hospital, Montpellier

Следователи

  • Директор по исследованиям: Pierre-Antoine PEYRON, PI, University Hospital, Montpellier

Публикации и полезные ссылки

Лицо, ответственное за внесение сведений об исследовании, добровольно предоставляет эти публикации. Это может быть что угодно, связанное с исследованием.

Общие публикации

Полезные ссылки

Даты записи исследования

Эти даты отслеживают ход отправки отчетов об исследованиях и сводных результатов на сайт ClinicalTrials.gov. Записи исследований и сообщаемые результаты проверяются Национальной медицинской библиотекой (NLM), чтобы убедиться, что они соответствуют определенным стандартам контроля качества, прежде чем публиковать их на общедоступном веб-сайте.

Изучение основных дат

Начало исследования (Оцененный)

15 января 2024 г.

Первичное завершение (Оцененный)

15 июля 2024 г.

Завершение исследования (Оцененный)

31 декабря 2024 г.

Даты регистрации исследования

Первый отправленный

18 августа 2023 г.

Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества

13 декабря 2023 г.

Первый опубликованный (Оцененный)

27 декабря 2023 г.

Обновления учебных записей

Последнее опубликованное обновление (Оцененный)

27 декабря 2023 г.

Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества

13 декабря 2023 г.

Последняя проверка

1 декабря 2023 г.

Дополнительная информация

Термины, связанные с этим исследованием

Ключевые слова

Другие идентификационные номера исследования

  • RECHMPL23_0098

Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы

Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.

Нет

Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.

Нет

Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .

Подписаться