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Detecção de Saliva por Imunoafinidade e Espectrometria de Massa (SIMS)

13 de dezembro de 2023 atualizado por: University Hospital, Montpellier

Detecção de Proteínas Salivares Específicas por Imunoafinidade e Espectrometria de Massa

A identificação de saliva na área genital durante uma investigação criminal pode ser um componente crítico no processo de uma agressão sexual na França, uma vez que as relações genitais-orais não consensuais são consideradas crimes desde 2021. O desenvolvimento de métodos altamente específicos para a saliva a detecção é, portanto, crucial, pois os métodos de triagem comumente empregados carecem de especificidade. A espectrometria de massa de proteínas provou ser um método sensível e específico, mas é particularmente demorado. Uma abordagem híbrida mais rápida e mais sensível usando espectrometria de massa de imunoafinidade automatizada (IP-LC-MS/MS) foi desenvolvida recentemente e mostrou ser particularmente eficaz para a detecção de uma proteína do fluido seminal (semenogelina), permitindo um alto rendimento identificação de fluido seminal em amostras de sêmen. Tal como a semenogelina, proteínas salivares específicas, como a histatina tipo 1, a cistatina D ou proteínas ricas em prolina (PRPs), poderiam ser detectadas utilizando esta abordagem promissora, que nunca foi testada em amostras de saliva. Em colaboração com a Plataforma de Proteómica Clínica e o Departamento de Medicina Reprodutiva do Hospital Universitário de Montpellier, pretendemos desenvolver um protocolo para a detecção de proteínas específicas da saliva por IP-LC-MS/MS em amostras do tipo agressão sexual.

Visão geral do estudo

Status

Ainda não está recrutando

Condições

Intervenção / Tratamento

Descrição detalhada

Cada participante será contatado por telefone no dia anterior à visita, para se apresentar para apresentação do estudo. No dia da visita serão coletados dois tipos de amostras:

  • Amostras de saliva: em voluntários saudáveis ​​do Departamento de Medicina Legal (são coletadas 2 amostras de 1,5 - 2 mL para cada voluntário).
  • Amostras vaginais: em mulheres consultadas no Departamento de Medicina Reprodutiva (2 esfregaços secos em cada paciente). 2 grupos, um grupo apenas com amostras de fluido de secreção vaginal e um grupo com fluido de secreção vaginal + amostras de esperma.

Tipo de estudo

Intervencional

Inscrição (Estimado)

35

Estágio

  • Não aplicável

Contactos e Locais

Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.

Contato de estudo

Estude backup de contato

Locais de estudo

  • França
      • Montpellier, França, 34295
        • PEYRON

Critérios de participação

Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.

Critérios de elegibilidade

Idades elegíveis para estudo

  • Adulto
  • Adulto mais velho

Aceita Voluntários Saudáveis

Sim

Descrição

Critério de inclusão:

Amostras de Saliva

  • Homens e mulheres com 18 anos ou mais

Amostras vaginais:

  • Mulheres com 18 anos ou mais
  • Nenhuma relação sexual vaginal desprotegida durante os 10 dias anteriores à consulta (grupo 1)
  • Relações sexuais vaginais desprotegidas com ejaculação nas 24 horas anteriores à consulta (grupo 2)

Critério de exclusão:

Amostras de saliva:

  • Patologia ativa das glândulas salivares (infecção, tumor)
  • Relações sexuais oral-genitais desprotegidas nas 24 horas anteriores à consulta
  • Falha na obtenção do consentimento informado por escrito após um período de reflexão
  • Mulheres grávidas ou amamentando
  • Adulto protegido por lei ou sob tutela ou curadoria
  • Nenhuma filiação ao sistema de segurança social francês ou nenhum benefício de tal sistema

Amostras vaginais:

  • Relações sexuais oral-genitais (cunilíngua) nas 24 horas anteriores à consulta
  • Falha na obtenção do consentimento informado por escrito após um período de reflexão
  • Mulheres grávidas ou amamentando
  • Adulto protegido por lei ou sob tutela ou curadoria
  • Nenhuma filiação ao sistema de segurança social francês ou nenhum benefício de tal sistema

Plano de estudo

Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.

Como o estudo é projetado?

Detalhes do projeto

  • Finalidade Principal: Outro
  • Alocação: Não randomizado
  • Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
  • Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)

Armas e Intervenções

Grupo de Participantes / Braço
Intervenção / Tratamento
Outro: Saliva

Coleta de duas amostras de saliva (aprox. 1,5 a 2 mL cada) por salivação passiva em voluntários saudáveis

Essas amostras serão centrifugadas e o sobrenadante coletado.
Outro: Coleta de saliva
Coleta de 2 amostras de 1,5 a 2mL de saliva por salivação passiva em voluntários saudáveis
Outro: IP-LC-MS/MS: enriquecimento de imunoprecipitação com cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem

preparação e análise de amostras:

  • Impregnação das pontas (algodão absorvente) de esfregaços secos estéreis e esfregaços vaginais com quantidades controladas de saliva.
  • Imunocaptura de proteínas salivares de interesse (histatina tipo 1, cistatina D, PRPs) por purificação por afinidade de proteína A
  • Análise LC-MS/MS de peptídeos purificados eluídos (modo Monitoramento de Reações Múltiplas)

As diluições serão feitas de 10 a 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), depois de atingir um limite de detectabilidade, especificado por uma segunda análise mais precisa (por exemplo, se não houver sinal em 1/1000, a análise em 1/500, depois em 1/250 etc.). A sensibilidade analítica será testada em três amostras de cada tipo (salivar, vaginal, vaginal + sêmen) para garantir a reprodutibilidade dos resultados.

Os operadores, sem saber da presença de saliva nas amostras, realizarão então uma análise de detecção de proteínas específicas da saliva utilizando o método IP-LC-MS/MS.
Outro: Secreções vaginais
Para estar o mais próximo possível da vida real, dois esfregaços vaginais (introduzidos através do orifício vaginal ao longo de um comprimento de 2 a 3 cm) serão colhidos com um esfregaço seco estéril durante o exame ginecológico (antes da ultrassonografia endovaginal ou qualquer outro procedimento endovaginal) de pacientes incluídas no Serviço de Medicina Reprodutiva.
Outro: IP-LC-MS/MS: enriquecimento de imunoprecipitação com cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa em tandem

preparação e análise de amostras:

  • Impregnação das pontas (algodão absorvente) de esfregaços secos estéreis e esfregaços vaginais com quantidades controladas de saliva.
  • Imunocaptura de proteínas salivares de interesse (histatina tipo 1, cistatina D, PRPs) por purificação por afinidade de proteína A
  • Análise LC-MS/MS de peptídeos purificados eluídos (modo Monitoramento de Reações Múltiplas)

As diluições serão feitas de 10 a 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), depois de atingir um limite de detectabilidade, especificado por uma segunda análise mais precisa (por exemplo, se não houver sinal em 1/1000, a análise em 1/500, depois em 1/250 etc.). A sensibilidade analítica será testada em três amostras de cada tipo (salivar, vaginal, vaginal + sêmen) para garantir a reprodutibilidade dos resultados.

Os operadores, sem saber da presença de saliva nas amostras, realizarão então uma análise de detecção de proteínas específicas da saliva utilizando o método IP-LC-MS/MS.

Outro: Coleta de secreção vaginal
Coleta de secreções vaginais com 2 esfregaços secos em mulheres

O que o estudo está medindo?

Medidas de resultados primários

Medida de resultado
Descrição da medida
Prazo
Reprodutibilidade entre amostras de saliva
Prazo: 3 meses

Acordo intraavaliador sobre amostras de saliva, que envolve testar a primeira amostra e testar novamente a segunda amostra

O objetivo primário do estudo será medir a confiabilidade do protocolo, consistindo em reprodutibilidade ou concordância intra-avaliador, para detecção de proteínas salivares específicas (histatina tipo 1, PRPs, cistatina D) usando o método IP-LC-MS/MS em amostras de saliva de adultos.

A concordância intraavaliador (teste/reteste) será medida por suas médias +/- desvio padrão.

Serão realizadas várias análises (entre 3 ou 4) na mesma amostra para determinar se os resultados são idênticos
3 meses
Fidelidade intermediária entre técnicos em amostras de saliva
Prazo: 3 meses

Acordo entre avaliadores (coeficiente kappa de Cohen) em amostras de saliva, que envolve o teste de várias amostras por pelo menos 2 técnicos diferentes

O objetivo primário do estudo será medir a confiabilidade do protocolo, consistindo em fidelidade intermediária ou concordância interavaliadores (coeficiente kappa de Cohen) para detecção de proteínas salivares específicas (histatina tipo 1, PRPs, cistatina D) usando o IP-LC -Método MS/MS em amostras de saliva de adultos.

O coeficiente kappa dá uma pontuação que varia de 0 a 1. Se os codificadores concordarem totalmente, κ = 1. Se discordarem totalmente (ou concordarem apenas por acaso), κ ≤ 0.
3 meses

Medidas de resultados secundários

Medida de resultado
Descrição da medida
Prazo
Reprodutibilidade entre amostras vaginais embebidas em saliva
Prazo: 3 meses

Concordância intraavaliador sobre amostras vaginais embebidas em saliva

Os endpoints secundários consistirão na repetição dos endpoints primários (ou seja, reprodutibilidade e fidelidade intermediária) nas amostras vaginais impregnadas ou não de esperma.

Novamente, a mesma amostra será testada várias vezes (entre 3 ou 4) para ver se os resultados são semelhantes.
3 meses
Fidelidade intermediária entre técnicos em amostras vaginais embebidas em saliva
Prazo: 3 meses

: Concordância interavaliadores (coeficiente kappa de Cohen) em amostras vaginais embebidas em saliva

Os endpoints secundários consistirão na repetição dos endpoints primários (ou seja, reprodutibilidade e fidelidade intermediária) nas amostras vaginais impregnadas ou não de esperma.

O coeficiente kappa dá uma pontuação que varia de 0 a 1. Se os codificadores concordarem totalmente, κ = 1. Se discordarem totalmente (ou concordarem apenas por acaso), κ ≤ 0.
3 meses
Sensibilidade Analítica
Prazo: 3 meses
Menor concentração de saliva (µL) detectada pelo método em amostras de saliva e em amostras vaginais embebidas em saliva em condições controladas
3 meses
Sensibilidade diagnóstica
Prazo: 3 meses
Análise de amostras de saliva e amostras vaginais embebidas em saliva em condições controladas, para determinar a taxa de detecção de verdadeiros positivos e falsos negativos
3 meses
Especificidade diagnóstica
Prazo: 3 meses
Análise de amostras vaginais e amostras secas em condições controladas, para determinar a taxa de falsos positivos e verdadeiros negativos.
3 meses

Colaboradores e Investigadores

É aqui que você encontrará pessoas e organizações envolvidas com este estudo.

Patrocinador

University Hospital, Montpellier

Investigadores

  • Diretor de estudo: Pierre-Antoine PEYRON, PI, University Hospital, Montpellier

Publicações e links úteis

A pessoa responsável por inserir informações sobre o estudo fornece voluntariamente essas publicações. Estes podem ser sobre qualquer coisa relacionada ao estudo.

Publicações Gerais

Links úteis

Datas de registro do estudo

Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados ​​pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.

Datas Principais do Estudo

Início do estudo (Estimado)

15 de janeiro de 2024

Conclusão Primária (Estimado)

15 de julho de 2024

Conclusão do estudo (Estimado)

31 de dezembro de 2024

Datas de inscrição no estudo

Enviado pela primeira vez

18 de agosto de 2023

Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ

13 de dezembro de 2023

Primeira postagem (Estimado)

27 de dezembro de 2023

Atualizações de registro de estudo

Última Atualização Postada (Estimado)

27 de dezembro de 2023

Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade

13 de dezembro de 2023

Última verificação

1 de dezembro de 2023

Mais Informações

Termos relacionados a este estudo

Palavras-chave

Outros números de identificação do estudo

  • RECHMPL23_0098

Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo

Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA

Não

Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA

Não

Essas informações foram obtidas diretamente do site clinicaltrials.gov sem nenhuma alteração. Se você tiver alguma solicitação para alterar, remover ou atualizar os detalhes do seu estudo, entre em contato com register@clinicaltrials.gov. Assim que uma alteração for implementada em clinicaltrials.gov, ela também será atualizada automaticamente em nosso site .

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