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Détection de la salive par immunoaffinité et spectrométrie de masse (SIMS)

13 décembre 2023 mis à jour par: University Hospital, Montpellier

Détection de protéines salivaires spécifiques par immunoaffinité et spectrométrie de masse

L'identification de la salive dans la région génitale lors d'une enquête pénale peut être un élément essentiel dans les poursuites pour agression sexuelle en France, les rapports oro-génitaux non consensuels étant considérés comme des délits depuis 2021. Le développement de méthodes très spécifiques de collecte de la salive la détection est donc cruciale car les méthodes de dépistage couramment utilisées manquent de spécificité. La spectrométrie de masse des protéines s'est avérée être une méthode sensible et spécifique, mais elle prend particulièrement du temps. Une approche hybride plus rapide et plus sensible utilisant la spectrométrie de masse automatisée d'immunoaffinité (IP-LC-MS/MS) a été récemment développée et s'est révélée particulièrement performante pour la détection d'une protéine du liquide séminal (séménogéline), permettant un haut débit identification du liquide séminal dans les échantillons de sperme. Comme la séménogéline, des protéines salivaires spécifiques comme l’histatine de type 1, la cystatine D ou les protéines riches en proline (PRP) pourraient être détectées grâce à cette approche prometteuse, qui n’a jamais été testée sur des échantillons de salive. En collaboration avec la Plateforme de Protéomique Clinique et le Service de Médecine de la Reproduction du CHU de Montpellier, nous visons à développer un protocole de détection de protéines salivaires spécifiques par IP-LC-MS/MS dans des échantillons de type agressions sexuelles.

Aperçu de l'étude

Statut

Pas encore de recrutement

Les conditions

Intervention / Traitement

Description détaillée

Chaque participant sera contacté par appel téléphonique la veille de la visite, pour se présenter à une présentation de l'étude. Le jour de la visite, deux types d'échantillons seront prélevés :

  • Échantillons de salive : sur des volontaires sains du Département de médecine légale (2 échantillons de 1,5 à 2 mL sont prélevés pour chaque volontaire).
  • Prélèvements vaginaux : sur les femmes consultant dans le Service de Médecine de la Reproduction (2 prélèvements secs sur chaque patiente). 2 groupes, un groupe avec des échantillons de liquide de sécrétion vaginale uniquement et un groupe avec des échantillons de liquide de sécrétion vaginale + sperme.

Type d'étude

Interventionnel

Inscription (Estimé)

35

Phase

  • N'est pas applicable

Contacts et emplacements

Cette section fournit les coordonnées de ceux qui mènent l'étude et des informations sur le lieu où cette étude est menée.

Coordonnées de l'étude

Sauvegarde des contacts de l'étude

Lieux d'étude

  • France
      • Montpellier, France, 34295
        • PEYRON

Critères de participation

Les chercheurs recherchent des personnes qui correspondent à une certaine description, appelée critères d'éligibilité. Certains exemples de ces critères sont l'état de santé général d'une personne ou des traitements antérieurs.

Critère d'éligibilité

Âges éligibles pour étudier

  • Adulte
  • Adulte plus âgé

Accepte les volontaires sains

Oui

La description

Critère d'intégration:

Échantillons de salive

  • Hommes et femmes âgés de 18 ans ou plus

Échantillons vaginaux :

  • Femmes âgées de 18 ans ou plus
  • Aucun rapport sexuel vaginal non protégé dans les 10 jours précédant la visite (groupe 1)
  • Rapports sexuels vaginaux non protégés avec éjaculation dans les 24 heures précédant la visite (groupe 2)

Critère d'exclusion:

Échantillons de salive :

  • Pathologie active des glandes salivaires (infection, tumeur)
  • Rapports sexuels oro-génitaux non protégés dans les 24 heures précédant la visite
  • Défaut d’obtenir un consentement éclairé écrit après un délai de réflexion
  • Femmes enceintes ou allaitantes
  • Adulte protégé par la loi ou sous tutelle ou curatelle
  • Pas d'affiliation au système de sécurité sociale français ni aucun bénéfice d'un tel système

Échantillons vaginaux :

  • Rapports sexuels oro-génitaux (cunnilingus) dans les 24 heures précédant la visite
  • Défaut d’obtenir un consentement éclairé écrit après un délai de réflexion
  • Femmes enceintes ou allaitantes
  • Adulte protégé par la loi ou sous tutelle ou curatelle
  • Pas d'affiliation au système de sécurité sociale français ni aucun bénéfice d'un tel système

Plan d'étude

Cette section fournit des détails sur le plan d'étude, y compris la façon dont l'étude est conçue et ce que l'étude mesure.

Comment l'étude est-elle conçue ?

Détails de conception

  • Objectif principal: Autre
  • Répartition: Non randomisé
  • Modèle interventionnel: Affectation parallèle
  • Masquage: Aucun (étiquette ouverte)

Armes et Interventions

Groupe de participants / Bras
Intervention / Traitement
Autre: Salive

Prélèvement de deux échantillons de salive (env. 1,5 à 2 ml chacun) par bave passive chez des volontaires sains

Ces échantillons seront centrifugés et le surnageant collecté.
Autre: Collecte de salive
Prélèvement de 2 échantillons de 1,5 à 2mL de salive par salivation passive chez des volontaires sains
Autre: IP-LC-MS/MS : enrichissement par immunoprécipitation par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse tandem

préparation et analyse des échantillons :

  • Imprégnation des embouts (coton absorbant) des tampons secs stériles et des tampons vaginaux avec des quantités contrôlées de salive.
  • Immunocapture de protéines salivaires d'intérêt (histatine type 1, cystatine D, PRP) par purification par affinité protéine A
  • Analyse LC-MS/MS des peptides purifiés élués (mode de surveillance des réactions multiples)

Les dilutions seront faites de 10 à 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), puis après avoir atteint un seuil de détectabilité, précisé par une seconde analyse plus précise (ex : si pas de signal au 1/1000, analyse au 1/500 puis 1/250 etc.). La sensibilité analytique sera testée sur trois échantillons de chaque type (salivaire, vaginal, vaginal + sperme) pour garantir la reproductibilité des résultats.

Les opérateurs, ignorant la présence de salive dans les échantillons, effectueront alors une analyse de détection de protéines spécifiques à la salive à l'aide de la méthode IP-LC-MS/MS.
Autre: Sécrétions vaginales
Afin d'être le plus proche possible de la réalité, deux prélèvements vaginaux (introduits par l'orifice vaginal sur une longueur de 2 à 3 cm) seront réalisés avec un tampon sec stérile lors de l'examen gynécologique (avant l'échographie endovaginale ou tout autre procédure endovaginale) des patientes incluses dans le Service de Médecine de la Reproduction.
Autre: IP-LC-MS/MS : enrichissement par immunoprécipitation par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse tandem

préparation et analyse des échantillons :

  • Imprégnation des embouts (coton absorbant) des tampons secs stériles et des tampons vaginaux avec des quantités contrôlées de salive.
  • Immunocapture de protéines salivaires d'intérêt (histatine type 1, cystatine D, PRP) par purification par affinité protéine A
  • Analyse LC-MS/MS des peptides purifiés élués (mode de surveillance des réactions multiples)

Les dilutions seront faites de 10 à 10 (1/10, 1/100, 1/1000...), puis après avoir atteint un seuil de détectabilité, précisé par une seconde analyse plus précise (ex : si pas de signal au 1/1000, analyse au 1/500 puis 1/250 etc.). La sensibilité analytique sera testée sur trois échantillons de chaque type (salivaire, vaginal, vaginal + sperme) pour garantir la reproductibilité des résultats.

Les opérateurs, ignorant la présence de salive dans les échantillons, effectueront alors une analyse de détection de protéines spécifiques à la salive à l'aide de la méthode IP-LC-MS/MS.

Autre: Collecte des sécrétions vaginales
Collecte des sécrétions vaginales avec 2 tampons secs chez la femme

Que mesure l'étude ?

Principaux critères de jugement

Mesure des résultats
Description de la mesure
Délai
Reproductibilité entre échantillons de salive
Délai: 3 mois

Accord intra-évaluateur sur les échantillons de salive, qui implique de tester le premier échantillon et de re-tester le deuxième échantillon

Le critère d'évaluation principal de l'étude sera de mesurer la fiabilité du protocole, constitué de reproductibilité ou d'accord intra-évaluateur, pour la détection de protéines salivaires spécifiques (histatine de type 1, PRP, cystatine D) par la méthode IP-LC-MS/MS. sur des échantillons de salive d'adultes.

L'accord intra-évaluateur (test/retest) sera mesuré par leurs moyennes +/- écart type.

Plusieurs analyses (entre 3 ou 4) sur un même échantillon seront réalisées pour déterminer si les résultats sont identiques
3 mois
Fidélité intermédiaire entre techniciens sur les échantillons de salive
Délai: 3 mois

Accord inter-évaluateurs (coefficient kappa de Cohen) sur des échantillons de salive, qui implique de tester plusieurs échantillons par au moins 2 techniciens différents

Le critère d'évaluation principal de l'étude sera de mesurer la fiabilité du protocole, consistant en une fidélité intermédiaire ou un accord inter-évaluateurs (coefficient kappa de Cohen) pour la détection de protéines salivaires spécifiques (histatine de type 1, PRP, cystatine D) à l'aide de l'IP-LC. -Méthode MS/MS sur échantillons de salive adulte.

Le coefficient kappa donne une note allant de 0 à 1. Si les codeurs sont totalement d’accord, κ = 1. S’ils sont totalement en désaccord (ou d’accord uniquement par hasard), κ ≤ 0.
3 mois

Mesures de résultats secondaires

Mesure des résultats
Description de la mesure
Délai
Reproductibilité entre échantillons vaginaux imbibés de salive
Délai: 3 mois

Accord intra-évaluateur sur les prélèvements vaginaux imbibés de salive

Les critères d'évaluation secondaires consisteront à répéter les critères d'évaluation principaux (c'est-à-dire reproductibilité et fidélité intermédiaire) sur les échantillons vaginaux imprégnés ou non de sperme.

Là encore, le même échantillon sera testé plusieurs fois (entre 3 ou 4) pour voir si les résultats reviennent similaires.
3 mois
Fidélité intermédiaire entre techniciens sur des prélèvements vaginaux imbibés de salive
Délai: 3 mois

: Accord inter-évaluateurs (coefficient kappa de Cohen) sur des prélèvements vaginaux imbibés de salive

Les critères d'évaluation secondaires consisteront à répéter les critères d'évaluation principaux (c'est-à-dire reproductibilité et fidélité intermédiaire) sur les échantillons vaginaux imprégnés ou non de sperme.

Le coefficient kappa donne une note allant de 0 à 1. Si les codeurs sont totalement d’accord, κ = 1. S’ils sont totalement en désaccord (ou d’accord uniquement par hasard), κ ≤ 0.
3 mois
Sensibilité analytique
Délai: 3 mois
Concentration de salive la plus faible (µL) détectée par la méthode sur des échantillons de salive et sur des échantillons vaginaux imbibés de salive dans des conditions contrôlées
3 mois
Sensibilité diagnostique
Délai: 3 mois
Analyse d'échantillons de salive et d'échantillons vaginaux imbibés de salive dans des conditions contrôlées, pour déterminer le taux de détection des vrais positifs et des faux négatifs
3 mois
Spécificité diagnostique
Délai: 3 mois
Analyse d'échantillons vaginaux et d'échantillons secs dans des conditions contrôlées, pour déterminer le taux de faux positifs et de vrais négatifs.
3 mois

Collaborateurs et enquêteurs

C'est ici que vous trouverez les personnes et les organisations impliquées dans cette étude.

Parrainer

University Hospital, Montpellier

Les enquêteurs

  • Directeur d'études: Pierre-Antoine PEYRON, PI, University Hospital, Montpellier

Publications et liens utiles

La personne responsable de la saisie des informations sur l'étude fournit volontairement ces publications. Il peut s'agir de tout ce qui concerne l'étude.

Publications générales

Liens utiles

Dates d'enregistrement des études

Ces dates suivent la progression des dossiers d'étude et des soumissions de résultats sommaires à ClinicalTrials.gov. Les dossiers d'étude et les résultats rapportés sont examinés par la Bibliothèque nationale de médecine (NLM) pour s'assurer qu'ils répondent à des normes de contrôle de qualité spécifiques avant d'être publiés sur le site Web public.

Dates principales de l'étude

Début de l'étude (Estimé)

15 janvier 2024

Achèvement primaire (Estimé)

15 juillet 2024

Achèvement de l'étude (Estimé)

31 décembre 2024

Dates d'inscription aux études

Première soumission

18 août 2023

Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité

13 décembre 2023

Première publication (Estimé)

27 décembre 2023

Mises à jour des dossiers d'étude

Dernière mise à jour publiée (Estimé)

27 décembre 2023

Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité

13 décembre 2023

Dernière vérification

1 décembre 2023

Plus d'information

Termes liés à cette étude

Mots clés

Autres numéros d'identification d'étude

  • RECHMPL23_0098

Informations sur les médicaments et les dispositifs, documents d'étude

Étudie un produit pharmaceutique réglementé par la FDA américaine

Non

Étudie un produit d'appareil réglementé par la FDA américaine

Non

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