Ex vivo -keuhkoperfuusiojärjestelmän vaikutus keuhkosiirteiden mikrobiomiin ja niiden tulehdusreaktioon. (ExBioma)
Tiedetään, että siirteen ja vastaanottajan mikrobiomin vuorovaikutukset kykenevät moduloimaan immuunivasteita, indusoimaan erilaisten tulehdus- tai fibroottisten prosessien resilienssiä tai pahenemista, joten keuhkojen mikrobiomin vaihtelut liittyvät immunologisiin muutoksiin siirretyssä keuhkossa.
Päätavoitteena on ymmärtää uusien järjestelmien vaikutusta suboptimaalisten keuhkosiirteiden hoitoon ja parantamiseen ex vivo -perfuusiolla (EVLP) keuhkojen mikrobiomiin ja sen yhteyttä kudostulehdukseen.
Oletuksena on, että keuhkosiirteiden manipulointi ja perfuusio laajakirjoisilla antibiooteilla EVLP-käsittelyn aikana muuttaa keuhkojen mikrobiomia ja säätelee vähemmän tulehdusta edistävää ympäristöä.
Metodologia: Tämä on yhden keskuksen prospektiivinen havainnointitutkimus. Tutkimukseen otetaan mukaan 7 peräkkäistä aivokuollutta luovuttajaa, jotka eivät täytä keuhkojen luovuttajien kriteerejä. Ne toteutetaan:
- P1. Havaitseminen: Luovuttaja, jolla ei ole ehtoja keuhkojen luovuttajaksi tai kaikkien siirtotiimien hylkäämä.
- P2. Uutto.
- P3. Kylmäsäilytys: Vasen keuhko kylmäsäilytetään
- P4. EVLP-säilytys: Oikeaa keuhkoa valmistellaan ja käsitellään 3 tunnin ajan EVLP:tä käyttämällä
Seuraavat näytteet otetaan kahdesti:
- T0: Poiston lopussa
- Bronkoalveolaarinen huuhtelu (BAL): Ennen henkitorven puristamista BAL otetaan vasemmasta pääkeuhkoputkesta bronkoskoopialla. BAL suoritetaan oikealle keuhkolle juuri ennen P4:n aloittamista.
- Keuhkobiopsia: Molempien siirteiden alalohkosta tehdään keuhkobiopsia
- Säilöntäneste tai perfuusioneste: 20 ml säilöntänestettä, joka on kosketuksissa vasemman siirteen kanssa ennen varastointia, steriiliyskontrollina (P3) ja 20 ml perfuusionestettä ennen käsittelyä, steriiliyskontrollina (P4).
- T1: Säilytysprotokollan lopussa (P3 tai P4).
- B.A.L.
- Keuhkobiopsia: vasen alalohko.
- Säilöntäneste tai infuusioneste: 20 ml säilöntänestettä, joka on kosketuksissa vasemman siirteen kanssa, tai 20 ml perfuusionestettä.
Koska siirteitä on manipuloitu uuttamisen ja tekniikan käytön aikana, mikä käsittää luovuttajan ekstuboinnin ja sen jälkeen siirteiden uudelleen intuboinnin sekä vähintään 3 tunnin perfuusion antibiooteilla, EVLP:n käyttö voi muuttaa solun mikrobiomia. oksat. Tämä muutos voi vaikuttaa elinkelpoisten elinten saamiseen siirtoa varten sekä välittömässä postoperatiivisessa jaksossa että pitkän aikavälin tuloksiin. Ei ole olemassa tutkimuksia, joissa analysoidaan mikrobiomin muutosta EVLP:n hoidon jälkeen tai sen suhdetta tulehdusparametreihin.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
NÄYTTEENOTTO JA VARASTOINTI
- BAL:
- Tekniikka: Bronkoskooppi asetetaan segmenttiin 6, steriiliä suolaliuosta tiputetaan. Toimenpide toistetaan osissa 3 ja 5 oikean keuhkon tapauksessa ja segmentissä 6 ja lingulassa vasemmassa keuhkossa. 20-30 cc BAL:ia valmistetaan jokaista siirrettä kohden.
- Varastointi: Näytteet pakastetaan välittömästi keräämisen jälkeen ja siirretään laboratorioon kylmävaraajalla, jotta ne eivät sula.
- Analyysi: Keuhkojen mikrobiomi analysoidaan.
- Keuhkobiopsia:
- Tekniikka: Vähintään 2 cm3:n keuhkobiopsia otetaan imeytymättömällä automaattisella ompeleella.
- Säilytys: Näytteet säilytetään RNA:n stabilointiliuosreagenssissa (QIAGEN), jonka avulla näytteitä voidaan pitää huoneenlämmössä pakastukseen saakka välttäen RNA:n hajoamista.
- Analyysi: Tulehdussignaalien transkription RNA-sekvensointi.
- Ex vivo -perfuusionesteliuos:
- Tekniikka: Näytteiden ottaminen steriileinä 20cc ruiskulla.
- Varastointi: Näytteet pakastetaan välittömästi keräämisen jälkeen ja siirretään laboratorioon kylmävaraajalla, jotta ne eivät sula.
- Analyysi: Mikrobiomianalyysi
- Nestemäinen säilöntäliuos:
- Tekniikka: Näytteiden ottaminen steriileinä 20cc ruiskulla.
- Varastointi: Näytteet pakastetaan välittömästi keräämisen jälkeen ja siirretään laboratorioon kylmävaraajalla, jotta ne eivät sula.
- Analyysi: Mikrobiomi- ja sytokiinianalyysi
Kaikki näytteet säilytetään pakastimessa -80
- Mikrobiomianalyysi Mikrobien monimuotoisuuden analysointia varten 16S-geenin V4-variaabelialue monistetaan bakteeri-DNA:sta PCR:llä. Amplikonit sekvensoidaan Illumina (MiSeq) -tekniikalla. Näytteet käsitellään ja näytettä kohti luodaan yli 10 000 300 bp:n sekvenssiä.
Geeniekspressioanalyysi RNA-uutto suoritetaan käyttämällä kaupallista RNeasy Mini Kit -sarjaa (QIAGEN). Geeniekspressioanalyysi suoritetaan kvantitatiivisella PCR:llä (qPCR) käyttämällä SignArrayn (AnyGenes®, Pariisi, Ranska) ennalta suunniteltua TransplantRejection-paneelia, joka sisältää 84 geeniä, joiden on kuvattu liittyvän immuunivasteeseen siirteen hylkimisreaktiossa. Nämä ovat: Paneelissa olevat geenit: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD40LG, CD80, CD86, CTLA4, CXCR3,B14, STAT4 , CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL13, IL16, IL1B, IL2, IL2RAIL, 2IL3, 2IL5 , IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, CASP8, CCR2, CCR3, CD14, CD28, CD8A, FAS, GZGRASL, FAS , GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10.
- Sytokiinianalyysi Sytokiinien määritys perfuusionesteestä suoritetaan Luminex™ xMAP™ -teknologiaan perustuvilla immunomäärityksillä (multi-analyte profiling), jotka mahdollistavat eri erittyvien proteiinien (sytokiinit, kemokiinit, kasvutekijät jne.) samanaikaisen kvantifioinnin ja havaitsemisen. .) Käytämme paneeleja, jotka on suunniteltu erityisesti kiinnostaville geenituotteille.
Sytokiinitasot mitataan käyttämällä Luminex™ xMAP™ -tekniikkaan perustuvaa immunomääritystä, joka mahdollistaa eri sytokiinien moniparametrisen analyysin. Tätä tarkoitusta varten suunnitellaan henkilökohtainen sytokiinipaneeli, joka perustuu julkaistuun kirjallisuuteen statiinien vaikutuksesta sytokiinien ja muiden proinflammatoristen kemokiinien tuotantoon systeemisellä tasolla sekä bibliografiseen näyttöön keuhkonsiirrossa mukana olevista sytokiineista. Tähän tarkoitukseen suunnitellussa paneelissa analysoitavat sytokiinit ovat IFN gamma, IL-1 beeta, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP- 1 alfa (CCL3), TNF alfa, VEGF-D (Custom Procartaplex Multiplex Panel, Invitrogen, ThermoFisher Scientific, MA, USA). Immunologinen analyysi suoritetaan käyttäen Invitrogen ProcartaPlex Analyst 1.0 -ohjelmistoa, joka toimitetaan reagenssien mukana.
- Sekvenssien bioinformaattinen analyysi Käytämme QIIME-ohjelmistoa kunkin näytteen mikrobikoostumuksen selvittämiseksi. QIIME on ohjelmistoputkisto, joka käyttää fylogeneettistä tietoa ja monimuuttujatilastotekniikoita mikrobiyhteisöjen vertailuun ja esimerkiksi sen määrittämiseen, ovatko ne tilastollisesti erilaisia. Ohjelma tunnistaa myös lajit, jotka vaikuttavat eniten näihin eroihin, ja löytää erilaisia malleja, jotka ovat ominaisia tietyille näyteryhmille.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Arvioitu)
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Yhteystiedot ja paikat
Opiskeluyhteys
- Nimi: Irene Bello Rodríguez, Professor
- Puhelinnumero: +34620664172
- Sähköposti: irene.bello.rodriguez@gmail.com
Tutki yhteystietojen varmuuskopiointi
- Nimi: Alberto Sandiumenge Camps, Professor
- Puhelinnumero: +34639955585
- Sähköposti: albertosandiumenge@gmail.com
Opiskelupaikat
-
-
-
Barcelona, Espanja, 08036
- Rekrytointi
- Hospital Clinic de Barcelona
-
Ottaa yhteyttä:
- Irene bello, Prof
- Puhelinnumero: +34620664172
- Sähköposti: irene.bello.rodriguez@gmail.com
-
Ottaa yhteyttä:
- Alberto Sandiumenge, Prof
- Puhelinnumero: +34639955585
- Sähköposti: albertosandiumenge@gmail.com
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Aikuinen
- Vanhempi Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- aivokuoleman aiheuttamat luovuttajat ja sydän- ja verenkiertoelimistön kuoleman jälkeen hylätyt luovuttajat
Poissulkemiskriteerit:
- Yksipuolinen keuhkokuume
- Suostumuksen puuttuminen luovuttajan perheeltä.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Hoito
- Jako: Ei satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Ei mitään (avoin tarra)
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: EVLP
|
Oikea keuhko perfusoidaan 3 tunnin ajan EVLP:llä
|
|
Active Comparator: Kylmäsäilytys
|
Vasen keuhko kylmäsäilytetään tavalliseen tapaan
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Muutos yksittäisissä operatiivisissa taksonomisissa yksiköissä (OTU) keuhkojen parenkyymissa exvivo-keuhkoperfuusion jälkeen 3 tunnin aikana
Aikaikkuna: 3 tunnin perfuusion jälkeen in vivo keuhkojen perfuusio
|
Analysoi keuhkojen mikrobiomi ja alfadiversiteetti ennen exvivo-keuhkoperfuusion käyttöä ja mikrobiologisten näytteiden vertailun jälkeen
|
3 tunnin perfuusion jälkeen in vivo keuhkojen perfuusio
|
|
Analysoidaan kvantitatiivisella PCR:llä 84 geenin geneettistä ilmentymistä, jotka liittyvät immuunivasteeseen keuhkonsiirrossa keuhkojen perfuusion jälkeen 3 tunnin aikana exvivo keuhkoperfuusiojärjestelmässä.
Aikaikkuna: 3 tunnin perfuusion jälkeen in vivo keuhkojen perfuusio
|
Analysoi kvantitatiivisella PCR:llä 84 geenin geneettistä ilmentymistä, jotka liittyvät immuunivasteeseen keuhkonsiirrossa: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD80, CD80 , CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44, CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL16, IL13,2IL , IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5, IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, C4CR8, CD1,8, CD . niitä
|
3 tunnin perfuusion jälkeen in vivo keuhkojen perfuusio
|
|
Analysoi tulehduksellisten sytokiinien pitoisuus exvivo-keuhkoperfuusion jälkeen
Aikaikkuna: 3 tunnin perfuusion jälkeen in vivo keuhkojen perfuusio
|
Analysoi tulehduksellisten sytokiinien pitoisuus: IFN gamma, IL-1 beeta, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1 alfa (CCL3) ), TNF alfa, VEGF-D, Luminex xMAP -tekniikalla, perfuusioliuoksessa ennen exvivo keuhkoperfuusion käyttöä ja sen jälkeen ja niiden vertailu
|
3 tunnin perfuusion jälkeen in vivo keuhkojen perfuusio
|
|
Muutos yksittäisissä operatiivisissa taksonomisissa yksiköissä (OTU) keuhkojen parenkyymissa kylmävarastoinnin jälkeen
Aikaikkuna: 3 tunnin kylmäsäilytyksen jälkeen
|
Analysoi keuhkojen mikrobiomi ja alfadiversiteetti ennen kylmäsäilytystä ja sen jälkeen ja vertaa mikrobiologisia näytteitä.
|
3 tunnin kylmäsäilytyksen jälkeen
|
|
Tulehduksellisten sitokiinien pitoisuuden analysointi kylmäsäilytyksen jälkeen
Aikaikkuna: 3 tunnin kylmäsäilytyksen jälkeen
|
Analysoi tulehduksellisten sytokiinien pitoisuus: IFN gamma, IL-1 beeta, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1 alfa (CCL3) ), TNF alfa, VEGF-D, Luminex xMAP -tekniikalla, perfuusioliuoksessa ennen ja jälkeen kylmäsäilytyksen ja niiden vertailu
|
3 tunnin kylmäsäilytyksen jälkeen
|
|
84 geenin geneettisen ilmentymisen analysointi kvantitatiivisella PCR:llä, jotka liittyvät immuunivasteeseen keuhkonsiirrossa kylmäsäilytyksen jälkeen
Aikaikkuna: 3 tunnin kylmäsäilytyksen jälkeen
|
Analysoi kvantitatiivisella PCR:llä 84 geenin geneettistä ilmentymistä, jotka liittyvät immuunivasteeseen keuhkonsiirrossa: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD80, CD80 , CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44, CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL16, IL13,2IL , IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5, IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, C4CR8, CD1,8, CD , CD8A, FAS, FASLG, FCGR1A, GZMA, GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10 keuhkonäytteissä ennen ja jälkeen niiden kylmäsäilytyksen, comparing
|
3 tunnin kylmäsäilytyksen jälkeen
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Yhteistyökumppanit
Tutkijat
- Opintojohtaja: Irene Bello Rodríguez, Professor, Hospital Clinic of Barcelona
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Arvioitu)
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvioitu)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Arvioitu)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- ExBioma
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .