Az ex vivo pulmonalis perfúziós rendszer hatása a tüdőgraftok mikrobiomájára és gyulladásos reakciójára. (ExBioma)
Ismeretes, hogy a graft és a recipiens mikrobióma kölcsönhatásai képesek az immunválaszok modulálására, különböző gyulladásos vagy fibrotikus folyamatok rezilienciáját vagy exacerbációját indukálják, ezért a tüdő mikrobióma eltérései a transzplantált tüdőben bekövetkező immunológiai változásokkal járnak együtt.
A fő cél az ex vivo perfúziós (EVLP) szuboptimális tüdőgraftok kondicionálására és javítására szolgáló új rendszereknek a tüdő mikrobiomára gyakorolt hatásának és a szöveti gyulladással való kapcsolatának megértése.
A hipotézis az, hogy a tüdőtranszplantátumok manipulálása és a széles spektrumú antibiotikumokkal történő perfúzió az EVLP kondicionálás során megváltoztatja a tüdő mikrobiomját, és kevésbé gyulladásos környezetet kondicionál.
A módszertan: Ez egy egyközpontú prospektív megfigyelési vizsgálat. 7 egymást követő agyhalott donort vonnak be a vizsgálatba, akik nem felelnek meg a tüdődonor kritériumainak. Ezeket hajtják végre:
- P1. Felismerés: A donor nem feltétele, hogy tüdődonor legyen, vagy az összes transzplantációs csoport elutasította.
- P2. Kitermelés.
- P3. Hidegen tartósítás: A bal tüdőt hidegen tartósítják
- P4. EVLP konzerválás: A jobb tüdőt előkészítik és 3 órán keresztül kondicionálják EVLP segítségével
A következő mintákat két alkalommal veszik:
- T0: A kivonás végén
- Bronchoalveolaris lavage (BAL): A trachea szorítása előtt a BAL-t a bal fő hörgőből veszik bronchoszkópiával. A BAL-t a jobb tüdőben kell végrehajtani közvetlenül a P4 megkezdése előtt.
- Tüdőbiopszia: Mindkét graft alsó lebenyének tüdőbiopsziáját elvégzik
- Konzerváló folyadék vagy perfúziós folyadék: 20 ml konzerváló folyadék, amely a tárolás előtt érintkezik a bal grafttal, sterilitási kontrollként (P3) és 20 ml perfúziós folyadék kondicionálás előtt, sterilitási kontrollként (P4).
- T1: A megőrzési protokollok végén (P3 vagy P4).
- B.A.L.
- Tüdőbiopszia: bal alsó lebeny.
- Konzerváló folyadék vagy infúziós folyadék: 20 ml tartósító folyadék, amely érintkezik a bal oldali grafttal, vagy 20 ml perfúziós folyadék.
Az extrakció és a technika alkalmazása során a graftokkal végzett manipuláció miatt, amely magában foglalja a donor extubálását, majd a graftok ismételt intubálását, valamint a legalább 3 órás antibiotikum-perfúziót, az EVLP alkalmazása megváltoztathatja a donor mikrobiomáját. oltványok. Ez a változás hatással lehet az életképes szervek transzplantációra való megszerzésére, mind a közvetlen posztoperatív időszakban, mind a hosszú távú eredményekre. Nincsenek olyan tanulmányok, amelyek elemzik a mikrobiomban bekövetkezett változást az EVLP-vel végzett kondicionálás után, vagy annak kapcsolatát a gyulladásos paraméterekkel.
A tanulmány áttekintése
Állapot
Körülmények
Beavatkozás / kezelés
Részletes leírás
MINTAVÉTEL ÉS TÁROLÁS
- BAL:
- Technika: A bronchoszkópot a 6. szegmensbe kell behelyezni, majd steril sóoldat alikvot részeit csepegtetjük be. Az eljárást meg kell ismételni a 3. és 5. szegmensben a jobb tüdő esetében, valamint a 6. szegmensben és a lingulában a bal tüdőben. 20-30 cc BAL készül minden graftnál.
- Tárolás: A mintákat a gyűjtés után azonnal lefagyasztják, és hideg tárolóval a laboratóriumba szállítják, hogy ne olvadjanak fel.
- Elemzés: A tüdő mikrobiomát elemzik.
- Tüdő biopszia:
- Technika: Legalább 2 cm3-es tüdőbiopsziát vesznek fel nem szívódó automatikus varrat segítségével.
- Tárolás: A mintákat RNS-stabilizáló oldatos reagensben (QIAGEN) tárolják, amely lehetővé teszi a minták szobahőmérsékleten történő tárolását a lefagyasztásig, elkerülve az RNS lebomlását.
- Elemzés: A gyulladásos jelek transzkripciójának RNS-szekvenálása.
- Ex vivo perfúziós folyékony oldat:
- Technika: Steril mintavétel 20cc-es fecskendővel.
- Tárolás: A mintákat a gyűjtés után azonnal lefagyasztják, és hideg tárolóval a laboratóriumba szállítják, hogy ne olvadjanak fel.
- Elemzés: Mikrobióma elemzés
- Folyékony tartósító oldat:
- Technika: Steril mintavétel 20cc-es fecskendővel.
- Tárolás: A mintákat a gyűjtés után azonnal lefagyasztják, és hideg tárolóval a laboratóriumba szállítják, hogy ne olvadjanak fel.
- Elemzés: Mikrobiom és citokin elemzés
Minden mintát fagyasztóban tárolunk -80 °C-on
- Mikrobióma-analízis A mikrobiális diverzitás elemzéséhez a 16S gén V4 variábilis régióját a bakteriális DNS-ből PCR-rel amplifikáljuk. Az amplikonokat Illumina (MiSeq) technológia segítségével szekvenálják. A mintákat feldolgozzák, és mintánként több mint 10 000 300 bp-os szekvenciát állítanak elő.
Génexpressziós elemzés Az RNS-kivonást a kereskedelmi forgalomban lévő RNeasy Mini Kit (QIAGEN) segítségével végezzük. A génexpressziós elemzést kvantitatív PCR-rel (qPCR) hajtják végre a SignArray (AnyGenes®, Párizs, Franciaország) előre megtervezett TransplantRejection panelje segítségével, amely 84 olyan gént tartalmaz, amelyekről leírták, hogy kapcsolatban állnak a transzplantátum kilökődése során jelentkező immunválaszsal. Ezek a következők: A panelben található gének: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD40LG, CD80, CD86, CTLA4, CXCR3,B1 STAT4 , CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL13, IL16, IL1B, IL2, IL2RAIL,2IL3, IL2RAIL,2IL5 , IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, CASP8, CCR2, CCR3, CD14, CD28, CD8FA, FAS, GZGRAFL , GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10.
- Citokinanalízis A citokinek meghatározását a perfúziós folyadékban a Luminex™ xMAP™ technológián alapuló immunoassay (multi-analyte profiling) segítségével végezzük, amely lehetővé teszi a különböző szekretált fehérjék (citokinek, kemokinek, növekedési faktorok stb.) egyidejű mennyiségi meghatározását és kimutatását. .) Kifejezetten a kérdéses géntermékekhez tervezett paneleket fogjuk használni.
A citokinszinteket a Luminex™ xMAP™ technológián alapuló immunoassay segítségével mérik, amely lehetővé teszi a különböző citokinek többparaméteres elemzését. Ebből a célból személyre szabott citokinpanelt tervezünk a sztatinok szisztémás szintű citokinek és más proinflammatorikus kemokinek termelésére kifejtett hatásáról, valamint a tüdőtranszplantációban részt vevő citokinekről szóló bibliográfiai bizonyítékok alapján. Az erre a célra kialakított panelben elemzett citokinek a következők: IFN gamma, IL-1 béta, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP- 1 alfa (CCL3), TNF alfa, VEGF-D (Custom Procartaplex Multiplex Panel, Invitrogen, ThermoFisher Scientific, MA, USA). Az immunológiai elemzést a reagensekhez mellékelt Invitrogen ProcartaPlex Analyst 1.0 szoftverrel végezzük.
- A szekvenciák bioinformatikai elemzése Az egyes minták mikrobiális összetételének meghatározásához a QIIME szoftvert használjuk. A QIIME egy olyan szoftverfolyamat, amely filogenetikai információkat és többváltozós statisztikai technikákat használ a mikrobaközösségek összehasonlítására, és például annak meghatározására, hogy statisztikailag különböznek-e egymástól. A program azonosítja azokat a fajokat is, amelyek leginkább hozzájárulnak ezekhez a különbségekhez, és feltárja a különböző típusú mintákat, amelyek az egyes mintacsoportokat jellemzik.
Tanulmány típusa
Beiratkozás (Becsült)
Fázis
- Nem alkalmazható
Kapcsolatok és helyek
Tanulmányi kapcsolat
- Név: Irene Bello Rodríguez, Professor
- Telefonszám: +34620664172
- E-mail: irene.bello.rodriguez@gmail.com
Tanulmányozza a kapcsolattartók biztonsági mentését
- Név: Alberto Sandiumenge Camps, Professor
- Telefonszám: +34639955585
- E-mail: albertosandiumenge@gmail.com
Tanulmányi helyek
-
-
-
Barcelona, Spanyolország, 08036
- Toborzás
- Hospital Clinic de Barcelona
-
Kapcsolatba lépni:
- Irene bello, Prof
- Telefonszám: +34620664172
- E-mail: irene.bello.rodriguez@gmail.com
-
Kapcsolatba lépni:
- Alberto Sandiumenge, Prof
- Telefonszám: +34639955585
- E-mail: albertosandiumenge@gmail.com
-
-
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
- Felnőtt
- Idősebb felnőtt
Egészséges önkénteseket fogad
Leírás
Bevételi kritériumok:
- agyhalálos donorok és a tüdőtranszplantáció miatt elutasított szív-keringési halált követő donorok
Kizárási kritériumok:
- Egyoldali tüdőgyulladás
- Az adományozó családjának beleegyezésének hiánya.
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
- Elsődleges cél: Kezelés
- Kiosztás: Nem véletlenszerű
- Beavatkozó modell: Párhuzamos hozzárendelés
- Maszkolás: Nincs (Open Label)
Fegyverek és beavatkozások
Résztvevő csoport / kar |
Beavatkozás / kezelés |
|---|---|
|
Kísérleti: EVLP
|
A jobb tüdőt 3 órán át perfundáljuk EVLP-vel
|
|
Aktív összehasonlító: Hidegen tartósítás
|
A bal tüdőt a szokásos protokoll szerint hidegen konzerváljuk
|
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
Az egyes operatív taxonómiai egységek (OTU) változása a tüdő parenchymában az exvivo tüdőperfúziót követően 3 órán keresztül
Időkeret: 3 órás in vivo tüdőperfúzió után
|
A tüdő mikrobiómának és alfa-diverzitásának elemzése exvivo tüdőperfúzió alkalmazása előtt, majd a mikrobiológiai minták összehasonlítása után
|
3 órás in vivo tüdőperfúzió után
|
|
84 gén immunválaszhoz kapcsolódó genetikai expressziójának kvantitatív PCR elemzése tüdőtranszplantációban a tüdőperfúziót követően 3 órán keresztül exvivo tüdőperfúziós rendszerben.
Időkeret: 3 órás in vivo tüdőperfúzió után
|
84 tüdőtranszplantációs immunválaszhoz kapcsolódó gén genetikai expressziójának kvantitatív PCR elemzése: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD80 , CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44, CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL16, IL12A, IL16 , IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5, IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, C4CR, CD1,2,8 , CD8A, FAS, FASLG, FCGR1A, GZMA, GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10 tüdőmintákban az exvivo, lungcom perfúziós és lungcom perfúziós alkalmazása előtt őket
|
3 órás in vivo tüdőperfúzió után
|
|
Elemezze a gyulladásos citokinek koncentrációját exvivo tüdőperfúzió után
Időkeret: 3 órás in vivo tüdőperfúzió után
|
A gyulladásos citokinek koncentrációjának elemzése: IFN gamma, IL-1 béta, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1 alfa (CCL3) ), TNF alfa,VEGF-D, Luminex xMAP technikával, perfúziós oldatban exvivo tüdőperfúzió alkalmazása előtt és után, és ezek összehasonlítása
|
3 órás in vivo tüdőperfúzió után
|
|
Az egyes működési taxonómiai egységek (OTU-k) változása a tüdő parenchymában hűtőtárolás után
Időkeret: 3 óra hideg tárolás után
|
Elemezze a tüdő mikrobiómát és az alfa diverzitást a hűtőtárolás előtt és után, és hasonlítsa össze a mikrobiológiai mintákat.
|
3 óra hideg tárolás után
|
|
A gyulladásos citokinek koncentrációjának elemzése hideg tárolás után
Időkeret: 3 óra hideg tárolás után
|
A gyulladásos citokinek koncentrációjának elemzése: IFN gamma, IL-1 béta, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1 alfa (CCL3) ), TNF alfa,VEGF-D, Luminex xMAP technikával, perfúziós oldatban a hűtőtárolás előtt és után és összehasonlításuk
|
3 óra hideg tárolás után
|
|
Hűtés utáni tüdőtranszplantációban az immunválaszhoz kapcsolódó 84 gén genetikai expressziójának kvantitatív PCR-rel történő elemzése
Időkeret: 3 óra hideg tárolás után
|
84 tüdőtranszplantációs immunválaszhoz kapcsolódó gén genetikai expressziójának kvantitatív PCR elemzése: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD80 , CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44, CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL16, IL12A, IL16 , IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5, IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, C4CR, CD1,2,8 , CD8A, FAS, FASLG, FCGR1A, GZMA, GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10 tüdőmintákban a hűtőtárolás előtt és után, comparing
|
3 óra hideg tárolás után
|
Együttműködők és nyomozók
Szponzor
Együttműködők
Nyomozók
- Tanulmányi igazgató: Irene Bello Rodríguez, Professor, Hospital Clinic of Barcelona
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete (Tényleges)
Elsődleges befejezés (Becsült)
A tanulmány befejezése (Becsült)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Becsült)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Becsült)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
További vonatkozó MeSH feltételek
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- ExBioma
Terv az egyéni résztvevői adatokhoz (IPD)
Tervezi megosztani az egyéni résztvevői adatokat (IPD)?
Gyógyszer- és eszközinformációk, tanulmányi dokumentumok
Egy amerikai FDA által szabályozott gyógyszerkészítményt tanulmányoz
Egy amerikai FDA által szabályozott eszközterméket tanulmányoz
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .