肺移植片のマイクロバイオームおよびその炎症反応に対する体外肺灌流システムの影響。 (ExBioma)
移植片とレシピエントのマイクロバイオームの相互作用は、免疫応答を調節し、さまざまな炎症または線維化プロセスの回復力または悪化を誘導することができることが知られており、したがって、肺マイクロバイオームの変動は、移植された肺における免疫学的変化と関連している。
主な目的は、体外灌流(EVLP)による次善の肺移植片のコンディショニングと改善のための新しいシステムが肺マイクロバイオームに及ぼす影響と組織炎症との関連を理解することです。
仮説は、EVLP コンディショニング中の肺移植片の操作と広域抗生物質による灌流により、肺マイクロバイオームが変化し、炎症誘発性の低い環境にコンディショニングされるというものです。
方法論: これは単一施設の前向き観察研究です。 肺ドナーの基準を満たさない連続7人の脳死ドナーが研究に含まれる。 それらは以下のように実行されます。
- P1.検出: 肺ドナーであるための基準を満たしていないドナー、またはすべての移植チームによって拒否されたドナー。
- P2。抽出。
- P3.冷蔵保存:左肺を冷蔵保存します。
- P4. EVLP 保存: 右肺は EVLP を使用して 3 時間準備および調整されます。
次のサンプルは 2 回採取されます。
- T0: 抽出終了時
- 気管支肺胞洗浄(BAL):気管クランプの前に、気管支鏡を使用して左主気管支からBALを採取します。 BAL は P4 を開始する直前に右肺に対して実行されます。
- 肺生検: 両方の移植片の下葉の肺生検が実行されます。
- 保存液または灌流液:無菌コントロール (P3) として、保管前に左グラフトと接触している保存液 20 mL、および無菌コントロール (P4) としてコンディショニング前の灌流液 20 mL を使用します。
- T1: 保全プロトコルの終了時 (P3 または P4)。
- B.A.L.
- 肺生検:左下葉。
- 保存液または注入液: 左グラフトと接触する保存液 20 mL、または灌流液 20 mL。
摘出中の移植片の操作と、ドナーの抜管とその後の移植片の再挿管、および抗生物質による最低 3 時間の灌流を含む技術の使用により、EVLP の使用は臓器のマイクロバイオームを変化させる可能性があります。移植片。 この変化は、手術直後だけでなく長期的な結果においても、移植に適した生存可能な臓器の取得に影響を与える可能性があります。 EVLP によるコンディショニング後のマイクロバイオームの変化、または炎症パラメーターとの関係を分析した研究はありません。
調査の概要
詳細な説明
サンプルの採取と保管
- バル:
- 技術: 気管支鏡がセグメント 6 に挿入され、滅菌生理食塩水のアリコートが注入されます。 この手順は、右肺の場合はセグメント 3 と 5 で繰り返され、左肺の場合はセグメント 6 と舌側で繰り返されます。 各グラフトあたり 20 ~ 30cc の BAL が完成します。
- 保管: サンプルは採取後すぐに凍結され、解凍されないように冷却アキュムレーターを備えた研究室に移送されます。
- 分析: 肺マイクロバイオームが分析されます。
- 肺生検:
- 技術: 非吸収性の自動縫合糸を使用して、最小 2 cm3 の肺生検が行われます。
- 保管: サンプルは RNA Stabilization solution Reagent (QIAGEN) に保存されます。これにより、凍結するまで標本を室温で保存でき、RNA の分解が回避されます。
- 分析: 炎症シグナル転写の RNA シーケンス。
- 体外灌流液溶液:
- 手法: 20cc シリンジを使用して無菌サンプルを採取します。
- 保管: サンプルは採取後すぐに凍結され、解凍されないように冷却アキュムレーターを備えた研究室に移送されます。
- 分析: マイクロバイオーム分析
- 保存液:
- 手法: 20cc シリンジを使用して無菌サンプルを採取します。
- 保管: サンプルは採取後すぐに凍結され、解凍されないように冷却アキュムレーターを備えた研究室に移送されます。
- 分析: マイクロバイオームおよびサイトカイン分析
すべてのサンプルは-80℃の冷凍庫に保管されます。
- マイクロバイオーム分析 微生物の多様性を分析するために、16S 遺伝子の V4 可変領域が PCR によって細菌の DNA から増幅されます。 アンプリコンはイルミナ (MiSeq) テクノロジーを使用して配列決定されます。 サンプルが処理され、サンプルごとに 1 シーケンスあたり 10,000 を超える 300 bp シーケンスが生成されます。
遺伝子発現解析 RNA 抽出は市販の RNeasy Mini Kit (QIAGEN) を使用して実行されます。 遺伝子発現解析は、SignArray (AnyGenes®、パリ、フランス) の事前設計された TransplantRejection パネルを使用して、定量的 PCR (qPCR) によって実行されます。このパネルには、移植拒絶における免疫応答に関連すると記載されている 84 個の遺伝子が含まれます。 パネルに含まれる遺伝子: CX3CR1、ICAM1、ITGA2、ITGAE、ITGAM、PECAM1、THBS1、THBS2、VCAM1、COL1A2、CCR5、CCR7、CD40、CD40LG、CD80、CD86、CTLA4、CXCR3、STAT4、TGFB1、CD44 、CTGF、MMP1、MMP2、MMP7、MMP9、BMP7、CCL11、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CSF2、CXCL10、IFNG、IL10、IL12A、IL13、IL16、IL1B、IL2、IL2RA、IL3、IL32、IL4、IL5 、IL6、IL8、TNF、TGFB2、TGFB3、TIMP1、VEGFA、MS4A1、CXCL11、CXCL9、CXCR4、ADAM17、C3、CASP1、CASP3、CASP8、CCR2、CCR3、CD14、CD28、CD8A、FAS、FASLG、FCGR1A、GZMA 、GZMB、NFKB1、NOS2、PRF1、PSMB9、STAT1、STAT6、TAP1、TLR3、TLR4、TLR9、TNFAIP3、TNFSF10。
- サイトカイン分析 灌流液中のサイトカインの測定は、さまざまな分泌タンパク質 (サイトカイン、ケモカイン、成長因子など) の同時定量と検出を可能にする Luminex™ xMAP™ テクノロジー (複数分析物プロファイリング) に基づくイムノアッセイを使用して実行されます。 .) 対象の遺伝子産物用に特別に設計されたパネルを使用します。
サイトカイン レベルは、さまざまなサイトカインのマルチパラメトリック分析を可能にする Luminex™ xMAP™ テクノロジーに基づくイムノアッセイを使用して測定されます。 この目的を達成するために、全身レベルでのサイトカインおよびその他の炎症誘発性ケモカインの産生に対するスタチンの影響に関する出版文献、および肺移植に関与するサイトカインに関する文献的証拠に基づいて、パーソナライズされたサイトカインパネルが設計されます。 この目的のために設計されたパネルで分析されたサイトカインは、IFN ガンマ、IL-1 ベータ、IL-6、IL-8 (CXCL8)、IL-18、IP-10 (CXCL10)、MCP-1 (CCL2)、MIP-1 です。 1 アルファ (CCL3)、TNF アルファ、VEGF-D (カスタム プロカルタプレックス マルチプレックス パネル、Invitrogen、ThermoFisher Scientific、マサチューセッツ州、米国)。 免疫学的分析は、試薬に付属の Invitrogen ProcartaPlex Analyst 1.0 ソフトウェアを使用して実行されます。
- 配列のバイオインフォマティクス分析 各サンプルの微生物組成を取得するには、QIIME ソフトウェアを使用します。 QIIME は、系統発生情報と多変量統計手法を使用して微生物群集を比較し、たとえば微生物群集が統計的に異なるかどうかを判断するソフトウェア パイプラインです。 このプログラムはまた、これらの違いに最も寄与する種を特定し、サンプルの特定のグループを特徴付けるさまざまなタイプのパターンを発見します。
研究の種類
入学 (推定)
段階
- 適用できない
連絡先と場所
研究連絡先
- 名前:Irene Bello Rodríguez, Professor
- 電話番号:+34620664172
- メール:irene.bello.rodriguez@gmail.com
研究連絡先のバックアップ
- 名前:Alberto Sandiumenge Camps, Professor
- 電話番号:+34639955585
- メール:albertosandiumenge@gmail.com
研究場所
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Barcelona、スペイン、08036
- 募集
- Hospital Clínic de Barcelona
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コンタクト:
- Irene bello, Prof
- 電話番号:+34620664172
- メール:irene.bello.rodriguez@gmail.com
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コンタクト:
- Alberto Sandiumenge, Prof
- 電話番号:+34639955585
- メール:albertosandiumenge@gmail.com
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
- 大人
- 高齢者
健康ボランティアの受け入れ
説明
包含基準:
- 脳死ドナーと肺移植を拒否された心循環死後のドナー
除外基準:
- 片側性肺炎
- ドナーの家族の同意の欠如。
研究計画
研究はどのように設計されていますか?
デザインの詳細
- 主な目的:処理
- 割り当て:非ランダム化
- 介入モデル:並列代入
- マスキング:なし(オープンラベル)
武器と介入
参加者グループ / アーム |
介入・治療 |
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実験的:EVLP
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右肺はEVLPで3時間灌流されます。
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アクティブコンパレータ:冷蔵保存
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左肺は通常のプロトコルに従って冷蔵保存されます
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この研究は何を測定していますか?
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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3 時間の生体外肺灌流後の肺実質における個々の操作分類単位 (OTU) の変化
時間枠:Ex vivo 肺灌流での 3 時間の灌流後
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生体外肺灌流の使用前と顕微鏡サンプルの比較後に、肺マイクロバイオームとアルファ多様性を分析します。
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Ex vivo 肺灌流での 3 時間の灌流後
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生体外肺灌流システムでの 3 時間の肺灌流後の肺移植における免疫応答に関連する 84 個の遺伝子の遺伝子発現を定量的 PCR で分析します。
時間枠:Ex vivo 肺灌流での 3 時間の灌流後
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肺移植における免疫応答に関連する 84 個の遺伝子の遺伝子発現を定量 PCR で解析: CX3CR1、ICAM1、ITGA2、ITGAE、ITGAM、PECAM1、THBS1、THBS2、VCAM1、COL1A2、CCR5、CCR7、CD40、CD40LG、CD80、CD86 、CTLA4、CXCR3、STAT4、TGFB1、CD44、CTGF、MMP1、MMP2、MMP7、MMP9、BMP7、CCL11、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CSF2、CXCL10、IFNG、IL10、IL12A、IL13、IL16、IL1B、IL2 、IL2RA、IL3、IL32、IL4、IL5、IL6、IL8、TNF、TGFB2、TGFB3、TIMP1、VEGFA、MS4A1、CXCL11、CXCL9、CXCR4、ADAM17、C3、CASP1、CASP3、CASP8、CCR2、CCR3、CD14、CD28 、体外肺灌流の使用前と使用後の肺サンプルにおける CD8A、FAS、FASLG、FCGR1A、GZMA、GZMB、NFKB1、NOS2、PRF1、PSMB9、STAT1、STAT6、TAP1、TLR3、TLR4、TLR9、TNFAIP3、TNFSF10 の比較彼ら
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Ex vivo 肺灌流での 3 時間の灌流後
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生体外肺灌流後の炎症性サイトカインの濃度を分析する
時間枠:Ex vivo 肺灌流での 3 時間の灌流後
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炎症性サイトカインの濃度を分析: IFN ガンマ、IL-1 ベータ、IL-6、IL-8 (CXCL8)、IL-18、IP-10 (CXCL10)、MCP-1 (CCL2)、MIP-1 α (CCL3) )、TNF α、VEGF-D、Luminex xMAP 技術による、体外肺灌流の使用前後の灌流溶液とそれらの比較
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Ex vivo 肺灌流での 3 時間の灌流後
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冷蔵保存後の肺実質における個々の操作分類単位 (OTU) の変化
時間枠:3時間冷蔵保存後
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冷蔵保存前後の肺微生物叢とアルファ多様性を分析し、微生物サンプルを比較します。
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3時間冷蔵保存後
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冷蔵保存後の炎症性シトカイン濃度の分析
時間枠:3時間冷蔵保存後
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炎症性サイトカインの濃度を分析: IFN ガンマ、IL-1 ベータ、IL-6、IL-8 (CXCL8)、IL-18、IP-10 (CXCL10)、MCP-1 (CCL2)、MIP-1 α (CCL3) )、TNF α、VEGF-D、Luminex xMAP 技術による、冷蔵保存前後の灌流溶液とそれらの比較
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3時間冷蔵保存後
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冷蔵保存後の肺移植における免疫応答に関連する84遺伝子の遺伝子発現を定量的PCRで解析
時間枠:3時間冷蔵保存後
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肺移植における免疫応答に関連する 84 個の遺伝子の遺伝子発現を定量 PCR で解析: CX3CR1、ICAM1、ITGA2、ITGAE、ITGAM、PECAM1、THBS1、THBS2、VCAM1、COL1A2、CCR5、CCR7、CD40、CD40LG、CD80、CD86 、CTLA4、CXCR3、STAT4、TGFB1、CD44、CTGF、MMP1、MMP2、MMP7、MMP9、BMP7、CCL11、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CSF2、CXCL10、IFNG、IL10、IL12A、IL13、IL16、IL1B、IL2 、IL2RA、IL3、IL32、IL4、IL5、IL6、IL8、TNF、TGFB2、TGFB3、TIMP1、VEGFA、MS4A1、CXCL11、CXCL9、CXCR4、ADAM17、C3、CASP1、CASP3、CASP8、CCR2、CCR3、CD14、CD28 、冷蔵保存前後の肺サンプル中の CD8A、FAS、FASLG、FCGR1A、GZMA、GZMB、NFKB1、NOS2、PRF1、PSMB9、STAT1、STAT6、TAP1、TLR3、TLR4、TLR9、TNFAIP3、TNFSF10 の比較
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3時間冷蔵保存後
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協力者と研究者
捜査官
- スタディディレクター:Irene Bello Rodríguez, Professor、Hospital Clinic of Barcelona
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (推定)
研究の完了 (推定)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (推定)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (推定)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。
EVLPの臨床試験
-
Policlinico HospitalSan Gerardo Hospitalわからない
-
Centre hospitalier de l'Université de Montréal...Fondation Pour La Recherche en Chirurgie Thoracique De Montreal; Centre de Recherche du Centre... と他の協力者募集
-
Jordan FeldUniversity Health Network, Toronto募集