Эта страница была переведена автоматически, точность перевода не гарантируется. Пожалуйста, обратитесь к английской версии для исходного текста.

Влияние системы легочной перфузии ex-vivo на микробиом легочных трансплантатов и их воспалительную реакцию. (ExBioma)

31 января 2024 г. обновлено: Irene Bello, Vall d'Hebron Institute Research

Известно, что взаимодействие микробиома трансплантата и реципиента способно модулировать иммунные реакции, индуцировать устойчивость или обострение различных воспалительных или фиброзных процессов, поэтому изменения легочного микробиома связаны с иммунологическими изменениями в трансплантированном легком.

Основная цель — понять влияние новых систем кондиционирования и улучшения субоптимальных трансплантатов легких с перфузией ex vivo (EVLP) на микробиом легких и его связь с воспалением тканей.

Гипотеза состоит в том, что манипуляции с легочными трансплантатами и перфузией антибиотиков широкого спектра действия во время кондиционирования EVLP меняют микробиом легких, создавая менее провоспалительную среду.

Методика: Это одноцентровое проспективное обсервационное исследование. В исследование будут включены 7 последовательных доноров со смертью мозга, которые не соответствуют критериям донорства легких. Они будут осуществляться:

  • П1. Обнаружение: Донор, не имеющий критериев, позволяющий считаться донором легких или отвергнутый всеми бригадами трансплантологов.
  • П2. Экстракция.
  • П3. Хранение в холоде: левое легкое будет консервировано в холоде.
  • П4. Сохранение EVLP: правое легкое будет подготовлено и кондиционировано в течение 3 часов с использованием EVLP.

Следующие пробы будут взяты дважды:

  • T0: В конце извлечения
  • Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). Перед пережатием трахеи БАЛ будет взят из левого главного бронха с помощью бронхоскопии. BAL будет выполнен на правом легком непосредственно перед началом P4.
  • Биопсия легких: будет выполнена биопсия легких нижней доли обоих трансплантатов.
  • Консервационная жидкость или перфузионная жидкость: 20 мл консервационной жидкости, контактирующей с левым трансплантатом перед хранением, в качестве контроля стерильности (P3) и 20 мл перфузионной жидкости перед кондиционированием, в качестве контроля стерильности (P4).
  • Т1: По окончании протоколов консервации (P3 или P4).
  • Б.А.Л.
  • Биопсия легкого: левая нижняя доля.
  • Консервационная жидкость или инфузионная жидкость: 20 мл консервационной жидкости, контактирующей с левым трансплантатом, или 20 мл перфузионной жидкости.

Из-за манипуляций с трансплантатами во время извлечения и использования техники, которая включает экстубацию донора и последующую повторную интубацию трансплантатов, а также перфузию антибиотиками в течение как минимум 3 часов, использование ЭВЛП может изменить микробиом трансплантата. трансплантаты. Это изменение может повлиять на получение жизнеспособных органов для трансплантации как в ближайшем послеоперационном периоде, так и на отдаленные результаты. Нет исследований, анализирующих изменение микробиома после кондиционирования с помощью EVLP или его связь с параметрами воспаления.

Обзор исследования

Статус

Рекрутинг

Условия

Вмешательство/лечение

Подробное описание

ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ

  • БАЛ:
  • Техника: Бронхоскоп вводят в сегмент 6, закапывают аликвоты стерильного физиологического раствора. Процедуру повторят в сегментах 3 и 5 в случае правого легкого, а также в сегменте 6 и язычке левого легкого. Для каждого трансплантата будет получено 20–30 куб.см БАЛ.
  • Хранение: Образцы замораживаются сразу после сбора и передаются в лабораторию с аккумулятором холода, чтобы гарантировать, что они не оттают.
  • Анализ: Будет проанализирован легочный микробиом.
  • Биопсия легких:
  • Техника: Биопсия легкого объемом минимум 2 см3 будет взята с использованием нерассасывающегося автоматического шовного материала.
  • Хранение: Образцы будут храниться в растворе для стабилизации РНК (QIAGEN), который позволяет хранить образцы при комнатной температуре до замораживания, избегая деградации РНК.
  • Анализ: секвенирование РНК транскрипции воспалительных сигналов.
  • Жидкий перфузионный раствор ex vivo:
  • Техника: Взятие стерильных образцов шприцем объемом 20 куб.см.
  • Хранение: Образцы замораживаются сразу после сбора и передаются в лабораторию с аккумулятором холода, чтобы гарантировать, что они не оттают.
  • Анализ: анализ микробиома
  • Консервирующий жидкий раствор:
  • Техника: Взятие стерильных образцов шприцем объемом 20 куб.см.
  • Хранение: Образцы замораживаются сразу после сбора и передаются в лабораторию с аккумулятором холода, чтобы гарантировать, что они не оттают.
  • Анализ: анализ микробиома и цитокинов.

Все образцы будут храниться в морозильной камере при температуре -80.

- Анализ микробиома. Для анализа микробного разнообразия вариабельная область V4 гена 16S будет амплифицирована из бактериальной ДНК с помощью ПЦР. Ампликоны будут секвенированы с использованием технологии Illumina (MiSeq). Образцы будут обработаны, и будет создано более 10 000 последовательностей размером 300 пар оснований на последовательность на образец.

Анализ экспрессии генов. Экстракцию РНК будут проводить с использованием коммерческого набора RNeasy Mini Kit (QIAGEN). Анализ экспрессии генов будет проводиться с помощью количественной ПЦР (кПЦР) с использованием предварительно разработанной панели TransplantRejection от SignArray (AnyGenes®, Париж, Франция), которая включает 84 гена, которые, как было описано, связаны с иммунным ответом при отторжении трансплантата. Это: Гены, включенные в панель: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD40LG, CD80, CD86, CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44. , CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL13, IL16, IL1B, IL2, IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5 , IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, CASP8, CCR2, CCR3, CD14, CD28, CD8A, FAS, FASLG, FCGR1A, GZMA , GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10.

- Анализ цитокинов. Определение цитокинов в перфузионной жидкости будет проводиться с использованием иммуноанализов на основе технологии Luminex™ xMAP™ (мультианалитное профилирование), которые позволяют одновременно проводить количественную оценку и обнаружение различных секретируемых белков (цитокинов, хемокинов, факторов роста и т. д.). .) Мы будем использовать панели, разработанные специально для интересующих генных продуктов.

Уровни цитокинов измеряются с помощью иммуноанализа на основе технологии Luminex™ xMAP™, которая позволяет проводить многопараметрический анализ различных цитокинов. С этой целью разработана персонализированная панель цитокинов на основе опубликованной литературы о влиянии статинов на продукцию цитокинов и других провоспалительных хемокинов на системном уровне, а также библиографических данных о цитокинах, участвующих в трансплантации легких. Цитокины, анализируемые на панели, созданной для этой цели, включают IFN гамма, IL-1 бета, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-. 1 альфа (CCL3), TNF альфа, VEGF-D (индивидуальная мультиплексная панель Procartaplex, Invitrogen, ThermoFisher Scientific, Массачусетс, США). Иммунологический анализ будет проводиться с использованием программного обеспечения Invitrogen ProcartaPlex Analyst 1.0, поставляемого вместе с реагентами.

- Биоинформатический анализ последовательностей. Для получения микробного состава каждого образца мы будем использовать программное обеспечение QIIME. QIIME — это программный конвейер, который использует филогенетическую информацию и методы многомерной статистики для сравнения микробных сообществ и определения, например, того, различаются ли они статистически. Программа также определяет виды, которые в наибольшей степени способствуют этим различиям, и обнаруживает закономерности различных типов, характеризующие конкретные группы образцов.

Тип исследования

Интервенционный

Регистрация (Оцененный)

7

Фаза

  • Непригодный

Контакты и местонахождение

В этом разделе приведены контактные данные лиц, проводящих исследование, и информация о том, где проводится это исследование.

Контакты исследования

Учебное резервное копирование контактов

  • Имя: Alberto Sandiumenge Camps, Professor
  • Номер телефона: +34639955585
  • Электронная почта: albertosandiumenge@gmail.com

Места учебы

  • Испания
      • Barcelona, Испания, 08036
        • Рекрутинг
        • Hospital Clinic de Barcelona
        • Контакт:
        • Контакт:

Критерии участия

Исследователи ищут людей, которые соответствуют определенному описанию, называемому критериям приемлемости. Некоторыми примерами этих критериев являются общее состояние здоровья человека или предшествующее лечение.

Критерии приемлемости

Возраст, подходящий для обучения

  • Взрослый
  • Пожилой взрослый

Принимает здоровых добровольцев

Нет

Описание

Критерии включения:

  • доноры со смертью мозга и доноры после сердечно-сосудистой смерти, отвергнутые для трансплантации легких

Критерий исключения:

  • Односторонняя пневмония
  • Отсутствие согласия семьи донора.

Учебный план

В этом разделе представлена ​​подробная информация о плане исследования, в том числе о том, как планируется исследование и что оно измеряет.

Как устроено исследование?

Детали дизайна

  • Основная цель: Уход
  • Распределение: Нерандомизированный
  • Интервенционная модель: Параллельное назначение
  • Маскировка: Нет (открытая этикетка)

Оружие и интервенции

Группа участников / Армия
Вмешательство/лечение
Экспериментальный: ЭВЛП
Устройство: ЕВЛП
Правое легкое будет перфузироваться в течение 3 часов с помощью EVLP.
Активный компаратор: Холодная консервация
Устройство: Холодная консервация
Левое легкое будет храниться в холоде по обычному протоколу.

Что измеряет исследование?

Первичные показатели результатов

Мера результата
Мера Описание
Временное ограничение
Изменение отдельных операционных таксономических единиц (ОТЕ) в паренхиме легких после exvivo перфузии легких в течение 3 часов
Временное ограничение: Через 3 часа перфузии при перфузии легких ex vivo
Проанализируйте микробиом легких и альфа-разнообразие перед использованием перфузии легких exvivo и после сравнения микрологических образцов.
Через 3 часа перфузии при перфузии легких ex vivo
Анализ с помощью количественной ПЦР генетической экспрессии 84 генов, связанных с иммунным ответом при трансплантации легких, после перфузии легких в течение 3 часов в системе перфузии легких exvivo.
Временное ограничение: Через 3 часа перфузии при перфузии легких ex vivo
Анализ с помощью количественной ПЦР генетической экспрессии 84 генов, связанных с иммунным ответом при трансплантации легких: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD40LG, CD80, CD86. , CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44, CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL13, IL16, IL1B, IL2 , IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5, IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, CASP8, CCR2, CCR3, CD14, CD28 , CD8A, FAS, FASLG, FCGR1A, GZMA, GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10 в образцах легких до использования перфузии легких exvivo и после, сравнение их
Через 3 часа перфузии при перфузии легких ex vivo
Анализ концентрации воспалительных цитокинов после перфузии легких exvivo.
Временное ограничение: Через 3 часа перфузии при перфузии легких ex vivo
Анализ концентрации воспалительных цитокинов: IFN гамма, IL-1 бета, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1 альфа (CCL3). ), TNF альфа, VEGF-D, с использованием техники Luminex xMAP, в перфузионном растворе до и после использования перфузии легких exvivo и их сравнение
Через 3 часа перфузии при перфузии легких ex vivo
Изменение отдельных операционных таксономических единиц (ОТЕ) в паренхиме легких после холодового хранения
Временное ограничение: После 3 часов хранения в холодильнике
Проанализируйте микробиом легких и альфа-разнообразие до и после хранения в холодильнике и сравните микрологические образцы.
После 3 часов хранения в холодильнике
Анализ концентрации воспалительных цитокинов после хранения в холодильнике
Временное ограничение: После 3 часов хранения в холодильнике
Анализ концентрации воспалительных цитокинов: IFN гамма, IL-1 бета, IL-6, IL-8 (CXCL8), IL-18, IP-10 (CXCL10), MCP-1 (CCL2), MIP-1 альфа (CCL3). ), TNF альфа, VEGF-D, с использованием техники Luminex xMAP, в перфузионном растворе до и после холодного хранения и их сравнение
После 3 часов хранения в холодильнике
Анализ с помощью количественной ПЦР генетической экспрессии 84 генов, связанных с иммунным ответом при трансплантации легких после холодного хранения.
Временное ограничение: После 3 часов хранения в холодильнике
Анализ с помощью количественной ПЦР генетической экспрессии 84 генов, связанных с иммунным ответом при трансплантации легких: CX3CR1, ICAM1, ITGA2, ITGAE, ITGAM, PECAM1, THBS1, THBS2, VCAM1, COL1A2, CCR5, CCR7, CD40, CD40LG, CD80, CD86. , CTLA4, CXCR3, STAT4, TGFB1, CD44, CTGF, MMP1, MMP2, MMP7, MMP9, BMP7, CCL11, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CSF2, CXCL10, IFNG, IL10, IL12A, IL13, IL16, IL1B, IL2 , IL2RA, IL3, IL32, IL4, IL5, IL6, IL8, TNF, TGFB2, TGFB3, TIMP1, VEGFA, MS4A1, CXCL11, CXCL9, CXCR4, ADAM17, C3, CASP1, CASP3, CASP8, CCR2, CCR3, CD14, CD28 , CD8A, FAS, FASLG, FCGR1A, GZMA, GZMB, NFKB1, NOS2, PRF1, PSMB9, STAT1, STAT6, TAP1, TLR3, TLR4, TLR9, TNFAIP3, TNFSF10 в образцах легких до и после холодного хранения, их сравнение
После 3 часов хранения в холодильнике

Соавторы и исследователи

Здесь вы найдете людей и организации, участвующие в этом исследовании.

Спонсор

Vall d'Hebron Institute Research

Соавторы

Hospital Clinic of Barcelona

Следователи

  • Директор по исследованиям: Irene Bello Rodríguez, Professor, Hospital Clinic of Barcelona

Даты записи исследования

Эти даты отслеживают ход отправки отчетов об исследованиях и сводных результатов на сайт ClinicalTrials.gov. Записи исследований и сообщаемые результаты проверяются Национальной медицинской библиотекой (NLM), чтобы убедиться, что они соответствуют определенным стандартам контроля качества, прежде чем публиковать их на общедоступном веб-сайте.

Изучение основных дат

Начало исследования (Действительный)

1 июня 2021 г.

Первичное завершение (Оцененный)

1 апреля 2024 г.

Завершение исследования (Оцененный)

1 июня 2024 г.

Даты регистрации исследования

Первый отправленный

23 декабря 2023 г.

Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества

31 января 2024 г.

Первый опубликованный (Оцененный)

9 февраля 2024 г.

Обновления учебных записей

Последнее опубликованное обновление (Оцененный)

9 февраля 2024 г.

Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества

31 января 2024 г.

Последняя проверка

1 января 2024 г.

Дополнительная информация

Термины, связанные с этим исследованием

Дополнительные соответствующие термины MeSH

Другие идентификационные номера исследования

  • ExBioma

Планирование данных отдельных участников (IPD)

Планируете делиться данными об отдельных участниках (IPD)?

НЕТ

Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы

Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.

Нет

Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.

Нет

Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .

Подписаться