Uuden mikrobiologisen diagnostisen testin arviointi piilevän mykobakteerituberkuloosiinfektion varalta (MICRO-LTBI)

Tavoitteet:

i) Määrittää, voidaanko M. tuberculosis (Mtb) DNA havaita CD34+ perifeerisen veren mononukleaarisoluista (PBMC), jotka on eristetty

• oireettomat aikuiset, jotka seulotaan LTBI:n varalta (LTBI-seulonnat)
• aikuiset, joilla on äskettäin diagnosoitu aktiivinen tuberkuloosi (aktiiviset tapaukset) ii) Selvittää, ovatko viimeaikaisten kotitalouden tuberkuloosikontaktien CD34+ PBMC:stä eristetyt Mtb-kannat geneettisesti identtisiä niiden kanssa, jotka on eristetty ysköksestä sellaisten keuhkotuberkuloositapausten kanssa, joille he ovat altistuneet iii) ) karakterisoida immunologisia, kliinisiä ja epidemiologisia korrelaatioita kyvystä havaita Mtb CD34+ PBMC:ssä IGRA-positiivisten ja -negatiivisten LTBI-seulottujen heterogeeninen populaatio.

iv) Sen määrittämiseksi, liittyykö Mtb DNA:n läsnäolo IGRA-positiivisten LTBI-seulottujen CD34+ PBMC:ssä perifeerisen veren transkription allekirjoitukseen, jonka on hiljattain raportoitu ennustavan riskin etenemisestä aktiiviseksi tuberkuloosiksi v) Arvioida pitkittäismuutos CD34+ PCR -määrityksen tuloksena

- LTBI-seulonnat suorittavat LTBI:n kemoprofylaksiaa

• LTBI-seulotut, jotka eivät saa kemoprofylaksia
• Potilaat, jotka ovat saaneet päätökseen aktiivisen tuberkuloosin hoidon

4.1. Tausta

Tuberkuloosi (TB) on M. tuberculosis -kompleksin (MTBC) organismien aiheuttama tartuntatauti. Ensisijainen patogeeni ihmisillä on M.tuberculosis (Mtb). Tuberkuloosi vaikuttaa tavallisesti keuhkoihin ja tarttuu aktiivista keuhkotuberkuloosia sairastavan potilaan yskäämien pisaroiden hengittämisen kautta. Tuberkuloosi on ollut merkittävä sairastuvuuden ja kuolleisuuden aiheuttaja läpi ihmiskunnan historian. Euroopassa ja Pohjois-Amerikassa tuberkuloositapausten lisääntymistä 1600- ja 1700-luvulla seurasi nopea lasku, joka johtui ensisijaisesti parantuneista sosioekonomisista olosuhteista, kansanterveystoimenpiteiden soveltamisesta ja tuberkuloosipotilaiden eristämisestä.1 1800-luvun loppua kohti, Tuberkuloositapausten ja -kuolemien laskusuuntauksen jälkeen Euroopassa ja Pohjois-Amerikassa kahdesta merkittävästä tapahtumasta, Mtb:n ja röntgensäteen löytämisestä, tuli keskeinen tekijä tuberkuloosin diagnosoinnissa ja hoidossa. TB.1 M. bovis -bacilli Calmette-Guérin (BCG) -rokotus ja antibioottihoito 1900-luvun alkupuoliskolla johtivat maailmanlaajuiseen optimismiin siitä, että tuberkuloosin hallinta ja eliminointi oli käden ulottuvilla. Tuberkuloosi on kuitenkin edelleen vakava kansanterveysuhka tähän päivään asti, ja se on toiseksi yleisin tartuntatautien aiheuttama kuolinsyy maailmanlaajuisesti. 2, 3 WHO:n vuoden 2015 raportin mukaan vuonna 2014 maailmanlaajuisesti arviolta 9,6 miljoonaa uutta tuberkuloositapausta (joista 12 % oli HIV-tartunnan saaneita) ja 1,5 miljoonaa kuolemantapausta (joista 0,4 miljoonaa HIV-tartunnan saaneiden ihmisten keskuudessa.4) Lisäksi kolmannella maailman väestöstä arvioidaan olevan piilevä Mtb-infektio (LTBI), joista noin 10 %:lle kehittyy aktiivinen tuberkuloosi elämänsä aikana.

Vaikka vain 22 matalan tai keskituloisen maan (LMIC) osuus on 80 prosenttia maailmanlaajuisesta taakasta, tuberkuloosi on edelleen tärkeä sairaus korkean tulotason maiden maahanmuuttajaväestön keskuudessa. Yhdistyneessä kuningaskunnassa (Yhdistynyt kuningaskunta) 1900-luvulla saavutettu tuberkuloosin ilmaantuvuuden väheneminen on kääntynyt päinvastaiseksi, kun tuberkuloosiilmoitukset ovat lisääntyneet 50 % vuosina 1998–2009.6 Vuonna 2013 ilmoitettiin yhteensä 7 892 tuberkuloositapausta, mikä vastaa 12,3 tapausta 100 000 asukasta kohden vuodessa, mikä on korkein korkean tulotason maista.7 Suuri osa (37,8 %) TB-tapauksista Isossa-Britanniassa löytyy Lontoosta, jossa tuberkuloosin ilmaantuvuus on 35,5 tapausta 100 000 asukasta kohden vuodessa; Intiasta (30 %), Pakistanista (20 %) ja Somaliasta (5 %) tulevat maahanmuuttajat olivat suurimman osan tapauksista.

Tällä hetkellä tuberkuloosin hallinnan keskeiset strategiat ovat aktiivisen taudin tarkka ja nopea diagnosointi sekä tehokas hoito taudin leviämisen keskeyttämiseksi. Viivästynyt diagnoosi on kuitenkin suuri haaste, joka helpottaa leviämistä yhteisöissä.8 Yleensä kestää useita kuukausia oireiden alkamisesta ennen kuin tuberkuloosipotilas aloittaa hoidon. Esimerkiksi Isossa-Britanniassa lähes kolmasosa keuhkotuberkuloosipotilaista aloittaa hoidon 4 kuukauden kuluttua oireiden alkamisesta. Tällaiset pitkät viiveet yhdistettynä suureen LTBI-valikoimaan viittaavat siihen, että tarvitaan interventioita LTBI-potilaiden tunnistamiseksi ja hoitamiseksi tuberkuloosin hallinnan saavuttamiseksi. LTBI:n antimikrobinen hoito (kemoprofylaksia) vähentää tehokkaasti uudelleenaktivoitumisriskiä, ​​ja sitä käytetään rutiininomaisesti korkeatuloisissa ja alhaisen ilmaantuvuuden olosuhteissa. Tämän politiikan täytäntöönpanoa, erityisesti raskaan kuormituksen olosuhteissa, haittaa kuitenkin diagnostisen testin puute tunnistaa Mtb-herkistettyjen henkilöiden alaryhmä, jolla on riski saada aktiivinen tuberkuloosi ja joille kemoprofylaksia tulisi kohdistaa.

Tällä hetkellä LTBI-diagnoosi tehdään havaitsemalla adaptiivinen immuunivaste Mtb-infektiolle joko in vivo (käyttämällä tuberkuliini-ihotestiä) tai ex vivo (käyttäen interferoni-gamma-vapautumismäärityksiä [IGRA:t]). Tämä lähestymistapa, joka ei havaitse Mtb:tä suoraan, on rajoitettu siinä, että se ei pysty erottamaan 10 prosenttia herkistyneistä henkilöistä, joilla on uudelleenaktivoitumisriski (joille kemoprofylaksia voi olla hyötyä) 90 prosentista, jotka ovat immunologisesti herkistyneitä, mutta jotka eivät. edetä aktiiviseksi sairaudeksi (joille kemoprofylaksista ei ole hyötyä). Tämä jälkimmäinen ryhmä on mahdollisesti heterogeeninen: jotkut ovat saattaneet eliminoida infektion, kun taas toisilla saattaa olla LTBI, mutta ne voivat hillitä sitä loputtomiin.9 Työkalut näiden mahdollisten fenotyyppien erottamiseksi voisivat mahdollistaa kemoprofylaksin tarkemman kohdistamisen, mutta niitä ei tällä hetkellä ole. Tässä tutkimuksessa tutkijat tutkivat, voidaanko Mtb:tä havaita CD34+-soluissa, jotka on eristetty a) aikuisten, joille seulotaan LTBI:n varalta (LTBI-seulotut) ja b) aikuisilla, joilla on äskettäin diagnosoitu aktiivinen tuberkuloosi (aktiiviset tapaukset).

4.2. Tutkimuksen perustelut

Tämä tutkimus perustuu äskettäiseen havaintoon, jonka on tehnyt yksi tutkijoista (Stephen Reece), joka kuului Berliinin Max Planck Institute for Infection Biology -instituutin ryhmään, joka on havainnut Mtb-DNA:ta CD34+:n pitkäaikaisista uudelleenpopulaatioista, pluripotenteista hematopoieettisista kantasoluista. (LTpHSC:t), jotka on eristetty 100 ml:sta perifeeristä verta seitsemältä terveeltä aikuiselta, joilla on LTBI (positiivinen IGRA, aktiivinen tuberkuloosi poissuljettu); Mtb-DNA:ta ei havaittu seitsemän IGRA-negatiivisen terveen aikuisen LTpHSC:ssä. 10 Jos tämä merkittävä löydös voidaan toistaa toisessa ympäristössä, se voi johtaa uuden mikrobiologisen testin (”CD34+ PCR-määritys”) kehittämiseen, jolla on useita mahdollisia sovelluksia:

a) tunnistaa henkilöt, jotka ovat piilevästi saaneet antibioottiresistentin Mtb-tartunnan (mahdollistaa sopivan kemoprofylaksia-ohjelman valinnan), b) seurata kemoprofylaksia ja LTBI:n saamisen estämiseen suunniteltujen toimenpiteiden tehokkuutta, kuten rokotteita ja hivenravintolisäohjelmia, c) ) seurata tiettyjen kantojen leviämistä populaatiossa (tarjoamalla välineen kansanterveystoimiin), d) syrjiä Mtb-herkistyneet yksilöt, joilla on riski eteneä aktiiviseksi sairaudeksi verrattuna niihin, jotka eivät ole, mahdollistaen kemoprofylaksin kohdistamisen populaatioihin, jotka voivat hyötyä siitä, ja e) tarjota uusia näkemyksiä LTBI:n immunobiologiasta ja ihmisen patogeneesistä tuberkuloosi.

4.3. Hypoteesit

i) Mtb DNA voidaan havaita oireettomien IGRA-positiivisten aikuisten CD34+ PBMC:ssä ja aktiivisissa tuberkuloositapauksissa diagnoosin yhteydessä, mutta ei IGRA-negatiivisilla aikuisilla.

ii) Oireettomien IGRA-positiivisten tuberkuloosikontaktien CD34+ PBMC:stä eristetyt Mtb-kannat ovat geneettisesti identtisiä niiden keuhko-TB-indeksitapausten ysköksestä eristettyjen kanssa, joille ne ovat äskettäin altistuneet.

iii) Kyky havaita Mtb-DNA LTBI-seulottujen CD34+ PBMC:ssä liittyy IGRA-tuloksiin sekä tunnustettuihin kliinisiin ja epidemiologisiin riskitekijöihin LTBI:lle. iv) Kyky havaita Mtb-DNA IGRA-positiivisten LTBI-seulottavien CD34+ PBMC:ssä liittyy perifeerisen veren transkriptomisiin allekirjoituksiin aiemmin määritelty liittyvän etenemiseen aktiiviseksi tuberkuloosiksi v) Antimikrobinen hoito on tehokasta Mtb:n eliminoinnissa CD34+ PBMC:stä, joka on eristetty henkilöistä, joilla on LTBI tai aktiivinen tuberkuloosi ja joissa se oli havaittavissa lähtötasolla; ja että CD34+ PCR -määrityksen tulokset ovat toistettavissa LTBI-seulonnaisilla, jotka eivät ole saaneet kemoprofylaksiaa

5. Tavoitteet

5.1. Ensisijainen tavoite

Sen määrittämiseksi, voidaanko M. tuberculosis (Mtb) DNA havaita CD34+ perifeerisen veren mononukleaarisoluista (PBMC), jotka on eristetty

• oireettomat aikuiset, joille tehdään rutiiniseulonta LTBI:n varalta (LTBI-seulonnat)
• aikuiset, joilla on äskettäin diagnosoitu aktiivinen tuberkuloosi (aktiiviset tapaukset)

5.2. Toissijaiset tavoitteet

• Sen määrittämiseksi, ovatko tuberkuloosikontaktien CD34+ PBMC:stä eristetyt Mtb-kannat geneettisesti identtisiä niiden kanssa, jotka on eristetty keuhko-TB-tapausten ysköksestä, joille ne ovat altistuneet
• Karakterisoida immunologisia, kliinisiä ja epidemiologisia korrelaatioita kyvystä havaita Mtb CD34+ PBMC:ssä heterogeenisessä populaatiossa IGRA-positiivisia ja -negatiivisia LTBI-seulottuja.
• Sen määrittämiseksi, liittyykö Mtb DNA:n läsnäolo IGRA-positiivisten seulottujen CD34+ PBMC:ssä perifeerisen veren transkription allekirjoitukseen, jonka on äskettäin raportoitu ennustavan riskin etenemisestä aktiiviseksi TB11:ksi.
• Pitkittäisen muutoksen arvioimiseksi CD34+ PCR -määrityksen tuloksena
• LTBI seuloo kemoprofylaksia suorittamassa LTBI:n varalta
• LTBI-seulotut, jotka eivät saa kemoprofylaksia
• potilaat, jotka ovat saaneet päätökseen aktiivisen tuberkuloosin hoidon

Opintosuunnitelma ja opintovierailut

Tutkijat tekevät pitkittäistutkimuksen. Rekrytoidaan kaksi osallistujaryhmää: aikuiset, jotka seulotaan LTBI:n varalta (LTBI-seulonnat) ja potilaat, jotka ovat aloittamassa aktiivisen tuberkuloosin hoitoa (aktiiviset tapaukset). LTBI-seulonnaisia ​​ovat LTBI-seulonnat osana tavanomaista hoitoa: he ovat äskettäin kontakteja tarttuvaan tuberkuloositapaukseen, uudet tulokkaat korkean tuberkuloositaakan maista, työterveysseulonnassa käyvät terveydenhuollon työntekijät ja potilaat, jotka ovat saamassa immunosuppressiivista hoitoa. . Aktiivista tuberkuloosia sairastavia potilaita ovat ne, joilla on diagnosoitu aktiivinen tuberkuloosi ja jotka ovat aloittamassa tuberkuloosin vastaisen hoidon.

Lähtötilanteessa (käynti 1) osallistujia, jotka täyttävät osallistumiskriteerit ja antavat kirjallisen suostumuksensa tutkimukseen osallistumiseen, pyydetään toimittamaan sosiodemografisia tietoja, mukaan lukien tiedot iästä, sukupuolesta ja etnisestä alkuperästä sekä tiedot tuberkuloosialtistushistoriasta (mukaan lukien erityinen altistuminen tutkimukseen osallistuneille, joilla on aktiivinen tuberkuloosi) ja muut kliinisesti merkitykselliset tiedot, jotka kaikki kirjataan tapausraporttilomakkeelle (CRF). HIV-serologinen testi tehdään, jos sitä ei vielä tehdä osana rutiinihoitoa. 120 ml (117 ml, jos HIV-testi on jo tehty osana rutiinihoitoa) verinäyte otetaan IGRA (QFT-Plus), veriviljelmä Mtb:tä, ääreisveren transkriptioriskin allekirjoitusanalyysiä ja CD34+ PCR-määritystä varten Mtb DNA:ta varten. lähtötasolla. IGRA-positiivisille osallistujille, joilta aktiivinen tuberkuloosi on suljettu pois kliinisen arvioinnin ja keuhkojen röntgenkuvauksen avulla (osa normaalihoitoa), tarjotaan 3 kuukauden rifampisiinin ja isoniatsidin kemoprofylaksia, jos he täyttävät tämän hoidon kriteerit (myös osa standardia). hoito).12

Positiivisista HIV-testituloksista tiedottaminen hoidetaan Yhdistyneen kuningaskunnan kansallisten HIV-testausohjeiden 2008 suositusten mukaisesti. Positiiviset HIV-testitulokset ilmoitetaan kasvokkain suoritettavassa haastattelussa tutkimuslääkärin kanssa Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) -klinikan (paikallinen HIV-palvelu) sairaanhoitajan läsnä ollessa. Osallistujat, jotka testaavat HIV-positiivisia, ohjataan lähimpään GUM-klinikalle tulosten vahvistamista ja tarvittaessa jatkohoitoa varten.

Kolmen kuukauden kuluttua (käynti 2) kirjataan kemoprofylaksin määräämisen ja noudattamisen yksityiskohdat, ja otetaan toinen verinäyte (117 ml) toistuvaa IGRAa (QFT-Plus), veriviljelyä ja CD34+ PCR -määritystä varten. Kemoprofylaksia saaneille osallistujille otetaan myös Tempus-letku vierailulla 2.

Lähtötilanteessa (käynti 1) osallistujia, jotka täyttävät osallistumiskriteerit ja antavat kirjallisen suostumuksensa tutkimukseen osallistumiseen, pyydetään toimittamaan sosiodemografiset perustiedot, mukaan lukien tiedot iästä, sukupuolesta ja etnisestä alkuperästä sekä oireidensa kestosta, kontakteista rekisteröity LTBI-seulonnainen ja muut kliinisesti merkitykselliset tiedot, jotka kaikki tallennetaan CRF:ään. HIV-serologia, täydellinen verenkuva ja yskösnäytteen mikroskopia sekä M.tuberculosis-leikkaus tehdään osana rutiinihoitoa tälle potilasryhmälle. Lähtötilanteessa otetaan 114 ml:n verinäyte IGRA:lle (QFT-Plus), veriviljelmälle Mtb:lle ja CD34+ PCR -määritykselle Mtb DNA:lle. Tuberkuloosipotilaita hoidetaan aktiivisen sairauden vuoksi Yhdistyneen kuningaskunnan ohjeiden mukaisesti. 12

Kemoterapian päätyttyä (käynti 2, yleensä 6 kuukauden iässä) anti-TB-hoidon määräyksestä ja noudattamisesta kirjataan tiedot ja otetaan toinen verinäyte (114 ml) IGRAa (QFT-Plus) varten, veriviljelyä varten. Mtb- ja CD34+-PCR-määrityksessä.

Tutkimusmenettelyt

Kutsu- ja tietoisen suostumuksen menettelyt

Kutsu

Lontoossa LTBI:n seulonta IGRA:lla tehdään yleensä neljässä ryhmässä: aktiivisten tuberkuloosipotilaiden viimeaikaiset kontaktit; uudet tulokkaat korkean tuberkuloositaakan maista; potilaat, jotka ovat aloittamassa immunosuppressiivisia hoitoja; ja terveydenhuollon työntekijät, jotka käyvät työterveysseulonnassa. LTBI-riskiryhmät voidaan aluksi tunnistaa useissa eri ympäristöissä (TB-klinikka, perusterveydenhuolto, reumatologian klinikat, työterveyspalvelut), mutta ne kaikki ohjataan joko tuberkuloosiklinikalle (kontaktit, uudet tulokkaat, immunosuppressiivisen hoidon aloittavat potilaat ) tai työterveysklinikalle (työterveysseulonnassa olevat terveydenhuollon työntekijät) LTBI-seulonnan suorittamista varten. Mahdollisesti kelvolliset LTBI-seulonnat tunnistetaan ja värvätään tutkimukseen tuberkuloosiklinikalla tai työterveysklinikalla. Potilaat, joilla on aktiivinen tuberkuloosi, tunnistetaan ja rekrytoidaan Barts Health NHS Trust TB Clinicsissä.

Mahdollisesti kelpoisille henkilöille tiedottavat tutkimuksesta TB-klinikalla tai työterveysklinikalla työskentelevät sairaanhoitajat tai lääkärit, jotka suorittavat tuberkuloosiseulonnan osana tavanomaista kliinistä hoitoa. Niille, jotka ilmaisevat kiinnostuksensa tutkimukseen, kliinisen hoitoryhmän jäsen toimittaa osallistujatietolomakkeen. Siinä selostetaan tutkimuksen tavoitteet, menetelmät, odotetut hyödyt ja mahdolliset vaarat, ja se esitetään ei-teknisellä kielellä joko englanniksi tai tarvittaessa muilla kielillä. Osallistujatietolomakkeen ottajia pyydetään täyttämään "Yhteystietolomake", jossa ilmoitetaan yhteystietonsa ja valtuutetaan tutkimusryhmä ottamaan heihin yhteyttä, kun heillä on ollut mahdollisuus lukea tiedot. Osallistujan tavanomainen hoitotiimi lähettää tämän yhteystietolomakkeen tutkimusryhmälle.

Tietoisen suostumuksen menettelyt

Tietoinen suostumus suoritetaan JRMO:n standarditoimintamenettelyjen mukaisesti. Tietoisen suostumuksen ottavat yksityisessä huoneessa hyvästä kliinisestä käytännöstä ja tietoon perustuvan suostumuksen saaneet henkilöt, jotka voivat olla lääkäreitä, sairaanhoitajia tai tutkimusapulaisia. Suostumusprosessin aikana osallistujille kerrotaan, että osallistuminen on vapaaehtoista ja että he voivat kieltäytyä osallistumasta tutkimukseen tai vetäytyä milloin tahansa seurannan aikana mistä tahansa syystä.

Osallistujia pyydetään ilmoittamaan suostumuksensa osallistumiseen allekirjoittamalla ja tulostamalla nimensä. Puolueeton todistaja vaaditaan allekirjoittamaan suostumus niiltä, ​​jotka tarvitsevat tulkin suostumusprosessin aikana. Osallistujat saavat taloudellisen korvauksen jokaiseen vierailuun liittyvistä matkakuluista.

Ilmoittautumis- ja seurantamenettelyt

Rekrytointi lähtötilanteessa

Mahdollisten osallistujien kelpoisuus arvioidaan edellä mainittujen osallistumis- ja poissulkemiskriteerien perusteella. Suostumusprosessin jälkeen ja sen jälkeen, kun osallistuja on antanut kirjallisen suostumuksen osallistumiseen, hänelle annetaan yksilöllinen tunnusnumero. Osallistumiskelpoisuuden arvioinnin suorittaa asianmukaisesti koulutettu henkilöstö, joka voi olla lääkäreitä, sairaanhoitajia tai tutkimusapulaisia.

Tiedonkeruumenettely

CRF:n avulla vierailulla 1 (V1) kaikkia osallistujia pyydetään antamaan sosiodemografisia tietoja ja sairaushistoriaa, mukaan lukien lääkityshistoria. LTBI-seulonnaisia ​​pyydetään toimittamaan tiedot viimeaikaisesta ja aikaisemmasta altistumisesta tuberkuloosipotilaille, tuberkuloosin historiasta ja muista mahdollisista LTBI-potilaiden tekijöistä, kuten fyysinen läheisyys aktiivisiin tuberkuloosipotilaisiin, keskimääräinen päivittäinen altistuksen kesto sekä altistumisen kokonaiskesto indeksitapauksille. . CRF:t sisältävät myös seuraavat tiedot: kelpoisuuskriteerien tarkistusluettelo, kliinisten perustutkimusten ja laboratoriotutkimusten tulokset sekä seurannan aikana kerätyt tiedot, mukaan lukien tarvittaessa peruutustiedot. CRF:ien täyttämisestä vastaavat projektiryhmän jäsenet, jotka voivat olla tutkijoita tai kenttätyöntekijöitä, luetellaan delegaatiolokiin.

Lähtötilanteen näytteenotto ja laboratorioarvioinnit

Näytteet kerätään kuvan 1 ja taulukoiden 1 ja 2 mukaisesti, ja laboratorioanalyysit suoritetaan taulukoissa 3 ja 4 kuvatulla tavalla. Kun testit tehdään osana rutiinihoitoa (esim. täysi verenkuva aktiivista tuberkuloosia sairastaville potilaille, HIV-serologia potilaille, joilla on aktiivinen tuberkuloosi ja IGRA-positiiviset LTBI-seulonnat), tulokset saadaan CRS:n kautta ja ne dokumentoidaan CRF:ssä. IGRA-negatiivisille LTBI-seulonnaisille ja altistumattomille osallistujille tarjotaan HIV-testiä vierailulla 1.

Sen tutkimiseksi, vastaavatko TB-kontaktien CD34+ PBMC:stä eristetyt Mtb-kannat niitä indeksitapausten ysköksestä eristettyjä, joille ne ovat altistuneet, yskösnäytteitä kerätään 10 indeksiaktiivisesta tuberkuloosipotilaasta, joilla on CD34+ PCR -määrityksen positiivisia kontakteja tutkimukseen. ja koko genomin sekvensointianalyysi suoritetaan näistä näytteistä viljellyille isolaateille. Tämän analyysin perusteella alukkeet Mtb-amplikonikirjastojen luomiseksi suunnitellaan käyttämällä bioinformaattisia lähestymistapoja kantojen monimuotoisuuden sieppaamiseksi. Näitä alukkeita käytetään sitten Mtb-amplikonikirjastojen muodostamiseen CD34+-soluista, joissa on Mtb-genominen DNA, joka on eristetty TB-kontakteista. Nämä kirjastot sekvensoidaan ja verrataan indeksitapauksen Mtb-genomiin sen määrittämiseksi, vastaavatko indeksitapauksista ja kontakteista eristetyt kannat.

Osallistujat, joilla on positiivinen HIV-testi/IGRA-testi, ohjataan HIV/TB-klinikoihin lisäarviointia varten. Jos HIV-testejä ja IGRA-testejä on tehty tutkimustarkoituksiin (esim. jos ne eivät ole osa rutiinihoitoa), tutkimushenkilöstö välittää nämä tulokset osallistujille, kun ne tulevat saataville.

Seurantamenettelyt

• LTBI-seulonnat: Käynnit ja seuranta-arvioinnit on kuvattu yksityiskohtaisesti kuvassa 1, taulukossa 1 ja taulukossa 3. Osallistujat osallistuvat vierailulle 2 3 kuukauden kuluttua (käynti 2, V2). Osallistujat, jotka ovat suorittaneet kemoprofylaksia, saavat rutiininomaisen kliinisen arvioinnin hoidon päätyttyä. Niitä, jotka eivät käytä kemoprofylaksiaa, seurataan myös 3 kuukauden kuluttua V1:stä. Sen lisäksi, että täytetään CRF, joka sisältää yksityiskohtaiset aktiivisen tuberkuloosin oireet (kaikki osallistujat) ja sitoutuminen kemoprofylaksiaan (kemoprofylaksia saaneet), kerätään 117 ml:n verinäyte immunologista ja molekyylianalyysiä varten jäljempänä kohdassa 13.3 kuvatulla tavalla. Toisen vierailun päätyttyä tutkimukseen osallistuminen päättyy.
• Potilaat, joilla on aktiivinen tuberkuloosi: Käynnit ja seuranta on kuvattu yksityiskohtaisesti kuvassa 1, taulukossa 2 ja taulukossa 4. Anti-TB-hoitoa saaville osallistujille tehdään rutiini kliininen arviointi hoidon päätyttyä ja toinen 114 ml:n verinäyte otetaan hoidon aikana. tämä immunologisen ja molekyylianalyysin käynti jäljempänä kohdassa 13.3 kuvatulla tavalla. Toisen vierailun päätyttyä tutkimukseen osallistuminen päättyy.

CD34+ PCR -testin tuloksia ei käytetä kliinisen hoidon ohjaamiseen, koska tämä testi on kehitystyön alkuvaiheessa oleva tutkimustyökalu, eikä sen tuloksia ole korreloitu minkään kliinisen tuloksen kanssa.

Osallistujan vetäytyminen

Osallistujat peruutetaan, jos he peruuttavat suostumuksensa osallistumiseen tai jos katsotaan, että eroaminen on osallistujan edun mukaista. Osallistujien katsotaan myös vetäytyneen, jos he jättävät saapumatta toiselle suunniteltuun opintomatkalleen kirjallisista ja puhelinmuistutuksista huolimatta. Jos osallistuja vetäytyy tutkimuksesta, peruutuksen syy kirjataan CRF:ään.

Peruuttamishetkeen asti kerätyt tiedot sisällytetään tutkimusanalyyseihin, ellei osallistuja toisin pyydä. Kaikkia kliinisiä näytteitä, jotka on otettu ennen osallistujan vetäytymistä, käytetään tutkimusanalyyseihin.

Opintojen lopun määritelmä

Tutkimus päättyy, kun kaikki kliiniset ja laboratorioarvioinnit on suoritettu kaikkien seurantaan osallistuvien osallistujien osalta.

9. Tilastolliset näkökohdat

9.1 Näytteen koko

Tämän tutkimuksen päätavoitteena on validoida ja laajentaa löydöksiä toisesta ympäristöstä, jossa Mtb:n genominen DNA havaittiin CD34+-soluissa, jotka oli eristetty seitsemän IGRA-positiivisen oireettoman aikuisen ääreisverestä.10 Tämän tavoitteen saavuttamiseksi poikkileikkaustutkimukseen rekrytoidaan yhteensä 100 LTBI-seulottua (20 osallistujaa per riippumaton muuttuja, joka testataan regressioanalyysissä). On odotettavissa, että noin 50 näistä osallistujista on IGRA-positiivisia, ja heistä noin 40:lle määrätään kemoprofylaksia: 25 osallistujan seuranta antaa > 80 % tehon 5 %:n merkitsevyystasolla osoittaakseen CD34+ PCR-positiivisten henkilöiden osuus 80 %:sta lähtötilanteessa 30 %:iin seurannassa.

10. Eettiset näkökohdat

Ennen tutkimuksen aloittamista haetaan hyväksyntä NHS REC:ltä tutkimusprotokollalle, tietoon perustuville suostumuslomakkeille ja muille asiaankuuluville asiakirjoille. Tutkimusta ei aloiteta ennen kuin eettiseltä komitealta on saatu tarvittavat hyväksynnät ja sponsori antaa "vihreän valon" sivustojen aktivoimiseksi. CI varmistaa, että tämä tutkimus toteutetaan Helsingin julistuksen (2013) ja eettisten periaatteiden mukaisesti, jotka on esitetty Sosiaali- ja terveysalan tutkimuksen ohjauskehyksessä, toinen painos, 2005 ja sen myöhemmät muutokset. Päätökset siitä, onko muutos vähäinen vai olennainen muutos, kuuluu toimeksiantajalle. Merkittäviä muutoksia, jotka edellyttävät REC:n tarkastelua, ei toteuteta ennen kuin asianomainen elin on hyväksynyt ne. Kaikki kirjeenvaihto Sponsorin ja REC:n kanssa säilytetään tutkimuksen perustiedostossa. CI ilmoittaa asiasta REC:lle ja sponsorille tutkimuksen päätyttyä.

Sopivasti koulutettu henkilö (joka voi olla lääkäri, sairaanhoitaja tai tutkimusassistentti) hankkii osallistujilta kirjallisen tietoisen suostumuksen ennen osallistumista tähän tutkimukseen. Tietolomakkeet ovat saatavilla englanniksi ja tarvittaessa muilla kielillä. Mahdollisille osallistujille toimitetaan tietolomake ja selvitetään tutkimuksen tavoitteet, menetelmät, odotetut hyödyt ja mahdolliset vaarat. Suostumusprosessin aikana osallistujille selitetään, että osallistuminen on vapaaehtoista ja he voivat kieltäytyä tutkimuksesta tai vetäytyä milloin tahansa seurannan aikana mistä tahansa syystä.

Eturistiriita

CI:llä tai kenelläkään osatutkijalla ei ole havaittu taloudellisia tai muita kilpailevia etuja.

11. Turvallisuusnäkökohdat

Koska tutkimus on havainnollinen, tutkimukseen liittyvien haittatapahtumien riski on mitätön. Kuitenkin kaikista haitallisista tapahtumista, joiden katsotaan liittyvän tutkimukseen, ilmoitetaan toimeksiantajalle 24 tunnin kuluessa. Jotkut osallistujat pitävät kerättävää veritilavuutta (jopa 120 ml) suurena, mutta verta luovuttavat aikuiset antavat yleensä 500 ml kerrallaan ilman anemiaa. Siksi tutkijat eivät ennakoi mitään haittavaikutuksia, jotka liittyvät tämän verimäärän ottamiseen. Tiedot verinäytteen tilavuudesta ja siitä, onko sillä ei-toivottuja terveysvaikutuksia, selitetään osallistujille tietolomakkeessa. Kaikki tuberkuloosipotilaat seulotaan anemian varalta osana heidän tavanomaista kliinistä hoitoaan, ja ne, joiden hemoglobiinitaso on alle 10 g/dl tulovaiheessa, suljetaan pois. Lisäksi toteutetaan seuraavat toimenpiteet mahdollisten haittojen, epämukavuuden ja riskien minimoimiseksi, joita osallistujat voivat kokea tämän tutkimuksen aikana:

- asianmukaisesti koulutetun henkilöstön käyttö flebotomian suorittamiseen

12. Tietojen käsittely ja kirjaaminen

12.1. Luottamuksellisuus

Tutkimuksen suorittamiseen ja analysointiin tarvittavat suojatut terveystiedot (PHI) kerätään kaikilta tutkimukseen seulotuilta osallistujilta. nämä tiedot sisältävät kunkin osallistujan nimen, syntymäajan, sukupuolen, osoitteen, puhelinnumeron, sairauskertomuksen numeron, tarvittaessa sähköpostiosoitteen ja etnisen alkuperän. Tutkimushenkilöstö, joka tarvitsee pääsyn PHI-tietoihin tutkimuksen suorittamiseksi tai analysoimiseksi, luetellaan delegaatiolokiin. PHI pysyy luottamuksellisina, ja niitä käsitellään, käsitellään, säilytetään ja tuhotaan vuoden 1998 tietosuojalain mukaisesti. Osallistujat säilyttävät oikeuden peruuttaa valtuutuksensa PHI-tietojensa käyttöön milloin tahansa tutkimuksen aikana. Kaikki osallistujat anonymisoidaan tämän tutkimuksen julkaisuissa. Tiedot pseudoanonymisoidaan seuraavasti. PHI säilytetään suojatussa tietokannassa, joka on yhdistetty yksilölliseen tunnistekoodiin. Kliiniset tiedot säilytetään erillisessä suojatussa tietokannassa, joka on linkitetty samaan yksilölliseen tunnistuskoodiin. CI:llä ja rinnakkaistutkijoilla on pääsy pseudoanonymisoituun lopulliseen tutkimustietoaineistoon.

Tutkimuksen aikana kaikki tiedot ovat CI:n vastuulla ja niitä säilytetään turvallisissa olosuhteissa. Kun tutkimus on valmis, toimeksiantaja vaatii, että asiakirjat ja tiedot säilytetään vielä 20 vuotta. CI toimii tutkimusdatan "säilyttäjänä". Pääsy PHI:iin rajoitetaan vähimmäismäärään henkilöitä, jotka ovat tarpeen tutkimuksen, laadunvalvonnan, auditoinnin ja analyysin suorittamiseksi. Lähdeasiakirjat ovat seuraavat: seulontalokit, tietoinen suostumus ja paperillinen CRF. Kaikki lähdeasiakirjat säilytetään turvallisesti lukituissa arkistokaapeissa. Tietojen siirto ja kuljetus tapahtuu Yhdistyneen kuningaskunnan vuoden 1998 tietosuojalain mukaisesti. Henkilökohtaisia ​​tietoja ei tallenneta, kuljeteta tai lähetetä mihinkään kannettavaan laitteeseen tai mistä tahansa kannettavasta laitteesta, ellei kyseistä laitetta ole salattu.

12.2. Tiedonkeruu, tallennus ja käsittely

Allekirjoitetut suostumuslomakkeet ja lähdetiedot sisältävät paperiasiakirjat säilytetään turvallisesti. Tutkimustiedot syötetään tietokantaan EpiData Entry -ohjelmistossa. Henkilökunta saa asianmukaisen koulutuksen tietokannan käyttöön tietojen syöttämiseen. Laboratoriotiedot syötetään tietokantaan.

CI:llä ja yhteistutkijoilla on pääsy tutkimustietoihin tutkimuksen aikana. Tutkimushenkilöstölle, joka tarvitsee pääsyn tutkimuksen suorittamiseen, myönnetään myös tarvittavat oikeudet. Pääsy tutkimustietoihin tutkimuksen aikana myönnetään tarvittaessa myös sponsorin, isäntälaitoksen ja valvontaviranomaisten valtuutetuille edustajille.

12.3. Laadunvalvonta ja laadunvarmistus

Tutkimusasiakirjat asetetaan sponsorin ja REC:n edustajien saataville laadunvalvontaa ja laadunvarmistusta varten pyynnöstä.

13. Laboratoriot

13.1. Näytteiden kerääminen, merkitseminen ja käsittely

Tutkimushenkilöstö ottaa verinäytteitä, merkitään osallistujatunnuksella ja päivämäärällä. Tempus-putkia ravistetaan voimakkaasti välittömästi keräyksen jälkeen valmistajan suositusten mukaisesti. Näytteet veriviljelyyn ja HIV-serologiaan kuljetetaan keskuslaboratorioihin käsittelyä varten. Loput verinäytteet kuljetetaan The Blizard Instituteen, jossa näytteen vastaanottopäivä ja -aika sekä näytteen kunto (esim. hyytymätön) kirjataan laboratoriopäiväkirjaan. QFT-Plus-testin näytteitä inkuboidaan 37 °C:ssa pian näytteiden vastaanottamisen jälkeen 18 tuntia ennen sentrifugointia ja supernatanttien aspiraatiota, jotka säilytetään -80 °C:ssa IFN-gamma-konsentraation analysointia odotettaessa. Tempus-putkissa olevat verinäytteet säilytetään -80 °C:ssa leimatussa telineessä, kunnes ne siirretään University College Londonin infektio- ja immuniteettiosastoon RNA:n erottamista ja geeniekspression profilointia varten. PBMC erotetaan jäljelle jääneestä näytteestä (100 ml), minkä jälkeen CD34+-solut eristetään käyttämällä magneettihelmien lajittelua. Eristettyjen CD34+-solujen puhtaus tarkistetaan virtaussytometrialla.