Valutazione di un nuovo test diagnostico microbiologico per l'infezione latente da Mycobacterium Tuberculosis (MICRO-LTBI)

Obiettivi:

i) Determinare se il DNA di M. tuberculosis (Mtb) può essere rilevato nelle cellule mononucleate del sangue periferico CD34+ (PBMC) isolate da

• adulti asintomatici sottoposti a screening per LTBI (screening LTBI)
• adulti con tubercolosi attiva di nuova diagnosi (casi attivi) ii) Determinare se i ceppi di Mtb isolati da PBMC CD34+ di recenti contatti familiari con tubercolosi sono geneticamente identici a quelli isolati dall'espettorato di casi indice con tubercolosi polmonare a cui sono stati esposti iii ) Caratterizzare i correlati immunologici, clinici ed epidemiologici della capacità di rilevare Mtb nei PBMC CD34+ in una popolazione eterogenea di IGRA-positivi e - screening LTBI negativi.

iv) Determinare se la presenza di DNA di Mtb nei PBMC CD34+ dei soggetti sottoposti a screening per LTBI IGRA-positivi si associa alla presenza di una firma trascrizionale del sangue periferico recentemente segnalata per predire il rischio di progressione a tubercolosi attiva v) Valutare il cambiamento longitudinale nei risultati del test PCR CD34+ in

- Screening per LTBI che hanno completato la chemioprofilassi per LTBI

• Screening LTBI che non ricevono chemioprofilassi
• Pazienti che hanno completato il trattamento per la tubercolosi attiva

4.1. Sfondo

La tubercolosi (TBC) è una malattia infettiva causata da organismi del complesso M. tuberculosis (MTBC). L'agente patogeno principale nell'uomo è M.tuberculosis (Mtb). La tubercolosi colpisce comunemente i polmoni e viene trasmessa attraverso l'inalazione di goccioline infettive espettorate da un paziente con tubercolosi polmonare attiva. La tubercolosi è stata una delle principali cause di morbilità e mortalità nel corso della storia umana. In Europa e Nord America, un aumento dei casi di tubercolosi nel XVII e XVIII secolo fu seguito da un rapido declino attribuito principalmente al miglioramento delle condizioni socioeconomiche, all’applicazione di misure di sanità pubblica e all’isolamento dei pazienti affetti da tubercolosi.1 Verso la fine del XIX secolo, dopo la tendenza al ribasso dei casi e dei decessi di tubercolosi in Europa e Nord America, due eventi importanti, la scoperta di Mtb e i raggi X, sono diventati fondamentali nella diagnosi e nella gestione della tubercolosi.1 Successivamente, la vaccinazione con M. bovis bacillo Calmette-Guérin (BCG) e il trattamento antibiotico nella prima metà del XX secolo hanno portato all’ottimismo globale sul fatto che il controllo e l’eliminazione della tubercolosi fossero a portata di mano. Tuttavia, la tubercolosi rimane ancora oggi una seria minaccia per la salute pubblica ed è la seconda causa di morte infettiva a livello globale. 2, 3 Secondo il rapporto dell’OMS del 2015, nel 2014 si sono verificati a livello globale circa 9,6 milioni di nuovi casi di tubercolosi (il 12% dei quali erano coinfetti da HIV) e 1,5 milioni di decessi (di cui 0,4 milioni tra persone coinfettate da HIV). Inoltre, si stima che un terzo della popolazione mondiale abbia un’infezione latente da Mtb (LTBI), di cui circa il 10% svilupperà una tubercolosi attiva nel corso della vita.5

Sebbene solo 22 paesi a basso e medio reddito (LMIC) rappresentino l’80% del carico globale, la tubercolosi è ancora una malattia importante tra le popolazioni immigrate nei paesi ad alto reddito. Nel Regno Unito (UK), le riduzioni dell’incidenza della tubercolosi ottenute nel XX secolo si sono invertite con un aumento del 50% delle notifiche di tubercolosi tra il 1998 e il 2009.6 Nel 2013 sono stati segnalati un totale di 7.892 casi di tubercolosi equivalenti a un’incidenza di 12,3 ogni 100.000 abitanti all’anno, la più alta tra i paesi ad alto reddito.7 Una percentuale elevata (37,8%) dei casi di tubercolosi nel Regno Unito si riscontra a Londra, dove il tasso di incidenza della tubercolosi è di 35,5 ogni 100.000 abitanti all'anno; gli immigrati provenienti dall’India (30%), dal Pakistan (20%) e dalla Somalia (5%) rappresentavano la maggior parte di questi casi.7

Attualmente, le strategie chiave nel controllo della tubercolosi sono la diagnosi accurata e rapida della malattia attiva insieme a un trattamento efficace per interrompere la trasmissione. Tuttavia, la diagnosi ritardata rappresenta una sfida importante nel facilitare la trasmissione nelle comunità.8 In genere, trascorrono diversi mesi dalla comparsa dei sintomi prima che un paziente affetto da tubercolosi inizi il trattamento. Ad esempio, nel Regno Unito, quasi un terzo dei pazienti affetti da tubercolosi polmonare inizia il trattamento 4 mesi dopo la comparsa dei sintomi.7 Ritardi così lunghi, insieme all’ampio pool di LTBI, suggeriscono la necessità di interventi per identificare e trattare gli individui con LTBI per ottenere il controllo della tubercolosi. Il trattamento antimicrobico dell'LTBI (chemioprofilassi) è efficace nel ridurre il rischio di riattivazione ed è implementato di routine in contesti ad alto reddito e a bassa incidenza. Tuttavia, l’attuazione di questa politica, in particolare in contesti ad alto carico, è ostacolata dalla mancanza di un test diagnostico per identificare il sottogruppo di individui sensibilizzati a Mtb che sono a rischio di sviluppare tubercolosi attiva, a cui dovrebbe essere mirata la chemioprofilassi.

Attualmente, la diagnosi di LTBI viene effettuata rilevando una risposta immunitaria adattativa all'infezione da Mtb, sia in vivo (utilizzando il test cutaneo alla tubercolina) o ex vivo (utilizzando i test di rilascio dell'interferone gamma [IGRA]). Questo approccio, che non rileva direttamente Mtb, è limitato in quanto non può distinguere il 10% dei soggetti sensibilizzati che sono a rischio di riattivazione (nei quali la chemioprofilassi può essere utile) dal 90% che sono immunologicamente sensibilizzati ma che non lo fanno. progressione verso la malattia attiva (in cui la chemioprofilassi non conferisce alcun beneficio). Quest’ultimo gruppo è potenzialmente eterogeneo: alcuni potrebbero aver eliminato l’infezione, mentre altri potrebbero avere LTBI ma essere in grado di contenerla indefinitamente.9 Gli strumenti per analizzare questi possibili fenotipi potrebbero consentire un targeting più preciso della chemioprofilassi, ma attualmente mancano. In questo studio, i ricercatori valuteranno se Mtb può essere rilevato nelle cellule CD34+ isolate dal sangue periferico di a) adulti sottoposti a screening per LTBI (screening LTBI) e b) adulti con tubercolosi attiva di nuova diagnosi (casi attivi).

4.2. Motivazione dello studio

Questo studio si basa su una recente osservazione di uno dei co-investigatori (Stephen Reece) che faceva parte di un gruppo presso l'Istituto Max Planck per la biologia delle infezioni, a Berlino, che ha rilevato DNA di Mtb nelle cellule staminali ematopoietiche pluripotenti CD34+ ripopolanti a lungo termine (LTpHSC) isolati da 100 ml di sangue periferico di sette adulti sani con LTBI (IGRA positivo, tubercolosi attiva esclusa); Il DNA di Mtb non è stato rilevato nelle LTpHSC di sette adulti sani IGRA-negativi. 10 Se questa straordinaria scoperta potesse essere replicata in un altro contesto, potrebbe portare allo sviluppo di un nuovo test microbiologico ("il test PCR CD34+") con diverse potenziali applicazioni:

a) identificare gli individui che sono latentemente infetti da Mtb resistente agli antibiotici (permettendo la selezione di un regime di chemioprofilassi appropriato), b) monitorare l'efficacia della chemioprofilassi e degli interventi progettati per prevenire l'acquisizione di LTBI, come vaccini e programmi di integrazione di micronutrienti, c ) per monitorare la diffusione di ceppi particolari attraverso una popolazione (fornendo uno strumento per l'intervento di sanità pubblica), d) per discriminare tra individui sensibilizzati a Mtb che sono a rischio di progressione verso la malattia attiva rispetto a quelli che non lo sono, consentendo che la chemioprofilassi sia mirata alle popolazioni che potrebbero trarne beneficio, ed e) fornire nuove conoscenze sull’immunobiologia dell’LTBI e sulla patogenesi della tubercolosi umana.

4.3. Ipotesi

i) Il DNA di Mtb può essere rilevato nei PBMC CD34+ di adulti asintomatici IGRA-positivi e di casi attivi di tubercolosi alla diagnosi, ma non negli adulti IGRA-negativi.

ii) I ceppi di Mtb isolati da PBMC CD34+ di contatti di tubercolosi asintomatici IGRA-positivi saranno geneticamente identici a quelli isolati dall'espettorato di casi indice di tubercolosi polmonare a cui sono stati recentemente esposti.

iii) Capacità di rilevare il DNA di Mtb nei PBMC CD34+ degli screening per LTBI associato ai risultati dell'IGRA nonché a fattori di rischio clinici ed epidemiologici riconosciuti per LTBI iv) Capacità di rilevare il DNA di Mtb nei PBMC CD34+ degli screening per LTBI IGRA-positivi associati alle firme trascrittomiche del sangue periferico precedentemente definita associata alla progressione verso la tubercolosi attiva v) La terapia antimicrobica è efficace nell'eliminare Mtb CD34+ PBMC isolato da individui con LTBI o tubercolosi attiva in cui era rilevabile al basale; e che i risultati del test CD34+ PCR sono riproducibili alla ripetizione nei soggetti sottoposti a screening per LTBI che non hanno ricevuto chemioprofilassi

5. Obiettivi

5.1. Obiettivo primario

Per determinare se il DNA di M. tuberculosis (Mtb) può essere rilevato nelle cellule mononucleate del sangue periferico CD34+ (PBMC) isolate da

• adulti asintomatici sottoposti a screening di routine per LTBI (screening LTBI)
• adulti con tubercolosi attiva di nuova diagnosi (casi attivi)

5.2. Obiettivi secondari

• Determinare se i ceppi di Mtb isolati da PBMC CD34+ di contatti di tubercolosi sono geneticamente identici a quelli isolati dall'espettorato di casi indice con tubercolosi polmonare a cui sono stati esposti
• Caratterizzare i correlati immunologici, clinici ed epidemiologici della capacità di rilevare Mtb nelle PBMC CD34+ in una popolazione eterogenea di soggetti sottoposti a screening per LTBI IGRA-positivi e negativi.
• Determinare se la presenza di DNA Mtb nei PBMC CD34+ dei soggetti sottoposti a screening con IGRA-positivo si associa alla presenza di una firma trascrizionale del sangue periferico recentemente segnalata per predire il rischio di progressione verso la TB11 attiva
• Per valutare il cambiamento longitudinale nei risultati del test PCR CD34+
• Screening LTBI che completano la chemioprofilassi per LTBI
• Screening LTBI che non ricevono chemioprofilassi
• pazienti che hanno completato il trattamento per la tubercolosi attiva

Progettazione dello studio e visite di studio

I ricercatori condurranno uno studio longitudinale. Verranno reclutati due gruppi di partecipanti: adulti sottoposti a screening per LTBI (screening LTBI) e pazienti in procinto di iniziare il trattamento per tubercolosi attiva (casi attivi). Gli screening per LTBI sono coloro che vengono sottoposti a screening per LTBI come parte delle cure standard: includono contatti recenti di un caso di tubercolosi con indice infettivo, nuovi soggetti provenienti da paesi ad alto carico di tubercolosi, operatori sanitari sottoposti a screening di salute sul lavoro e pazienti che stanno per essere sottoposti a terapia immunosoppressiva . I pazienti con tubercolosi attiva sono quelli a cui è stata diagnosticata la tubercolosi attiva e che stanno per iniziare la terapia anti-TBC.

Al basale (Visita 1), ai partecipanti che soddisfano i criteri di inclusione e danno il consenso informato scritto per partecipare allo studio verrà chiesto di fornire informazioni sociodemografiche inclusi dettagli su età, sesso e origine etnica, nonché dettagli sulla storia di esposizione alla tubercolosi (inclusa esposizione specifica ai partecipanti con tubercolosi attiva arruolati nello studio) e altri dati clinicamente rilevanti, che saranno tutti registrati su un Case Report Form (CRF). Verrà eseguito un test sierologico per l'HIV se questo non è già stato eseguito come parte delle cure di routine. Verrà raccolto un campione di sangue da 120 ml (117 ml se il test HIV è già stato eseguito come parte delle cure di routine) per l'IGRA (QFT-Plus), l'emocoltura per Mtb, l'analisi della firma del rischio del trascrittoma del sangue periferico e il test PCR CD34+ per il DNA di Mtb. al basale. Ai partecipanti IGRA positivi nei quali la tubercolosi attiva è stata esclusa mediante valutazione clinica e radiografia del torace (parte della cura standard) verrà offerto un ciclo di 3 mesi di chemioprofilassi con rifampicina e isoniazide se soddisfano i criteri per questa terapia (anche parte della terapia standard). cura).12

La comunicazione dei risultati positivi del test HIV sarà gestita secondo le raccomandazioni delle Linee guida nazionali del Regno Unito per i test HIV del 2008. I risultati positivi del test HIV verranno comunicati in un colloquio faccia a faccia con un medico dello studio, alla presenza di un'infermiera della clinica Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) (il servizio HIV locale). I partecipanti che risultano positivi all'HIV verranno indirizzati alla clinica GUM più vicina per la conferma dei loro risultati e l'ulteriore gestione, a seconda dei casi.

A 3 mesi (Visita 2), verranno registrati i dettagli della prescrizione e dell'adesione alla chemioprofilassi e verrà prelevato un secondo campione di sangue (117 ml) per ripetere l'IGRA (QFT-Plus), l'emocoltura e il test PCR CD34+. Per i partecipanti che hanno effettuato la chemioprofilassi, durante la Visita 2 verrà prelevata anche una provetta Tempus.

Al basale (Visita 1), ai partecipanti che soddisfano i criteri di inclusione e danno il consenso informato scritto per partecipare allo studio verrà chiesto di fornire informazioni sociodemografiche di base inclusi dettagli su età, sesso e origine etnica, nonché durata dei sintomi, contatto con qualsiasi screening LTBI iscritto e altri dati clinicamente rilevanti, che saranno tutti registrati su una CRF. La sierologia dell'HIV, l'emocromo completo, la microscopia dello striscio dell'espettorato e l'esame cutaneo per M.tuberculosis vengono eseguiti come parte delle cure di routine in questo gruppo di pazienti. Verrà raccolto un campione di sangue da 114 ml per l'IGRA (QFT-Plus), l'emocoltura per Mtb e il test PCR CD34+ per il DNA di Mtb al basale. I pazienti affetti da tubercolosi saranno trattati per la malattia attiva secondo le linee guida del Regno Unito. 12

Dopo il completamento della chemioterapia (Visita 2, solitamente a 6 mesi), verranno registrati i dettagli della prescrizione e dell'adesione al trattamento anti-TBC e verrà raccolto un secondo campione di sangue (114 ml) per IGRA (QFT-Plus), emocoltura per Mtb e il test CD34+ PCR.

Procedure di studio

Procedure di invito e consenso informato

Invito

A Londra, lo screening per LTBI utilizzando un IGRA viene comunemente eseguito in quattro gruppi: contatti recenti di pazienti affetti da tubercolosi attiva; nuovi operatori provenienti da paesi ad alto tasso di tubercolosi; pazienti che stanno per iniziare terapie immunosoppressive; e gli operatori sanitari sottoposti a screening sanitario sul lavoro. I gruppi a rischio di LTBI possono inizialmente essere identificati in vari contesti diversi (clinica per la tubercolosi, cure primarie, cliniche di reumatologia, servizi di medicina del lavoro), ma vengono tutti indirizzati a una clinica per la tubercolosi (contatti, nuovi pazienti, pazienti in procinto di iniziare la terapia immunosoppressiva ) o alla clinica di salute sul lavoro (operatori sanitari sottoposti a screening di salute sul lavoro) per l'esecuzione dello screening LTBI. Gli screening LTBI potenzialmente idonei verranno quindi identificati e reclutati per lo studio presso le cliniche per la tubercolosi o la clinica di salute sul lavoro. I pazienti con tubercolosi attiva verranno identificati e reclutati presso le cliniche per la tubercolosi del Barts Health NHS Trust.

Le persone potenzialmente ammissibili saranno informate dello studio da infermieri o medici che lavorano nelle cliniche per la tubercolosi o nelle cliniche di medicina del lavoro, che eseguono lo screening della tubercolosi come parte della consueta assistenza clinica. Coloro che esprimono interesse per lo studio riceveranno un foglio informativo per il partecipante da un membro del team di assistenza clinica. Ciò spiegherà gli scopi, i metodi, i benefici previsti e i potenziali rischi dello studio e sarà presentato in un linguaggio non tecnico in inglese o in altre lingue, ove necessario. A coloro che prendono una scheda informativa per il partecipante verrà chiesto di completare una "scheda di contatto" fornendo i propri dettagli di contatto e autorizzando il gruppo di ricerca a mettersi in contatto con loro una volta che avranno avuto la possibilità di leggere le informazioni; questa "scheda di contatto" verrà inoltrata al gruppo di ricerca dal team di assistenza abituale del partecipante.

Procedure di consenso informato

Il consenso informato sarà condotto secondo le procedure operative standard della JRMO. Il consenso informato sarà raccolto in una stanza privata da personale che ha ricevuto una formazione specifica sulla buona pratica clinica e sulla raccolta del consenso informato, che possono essere medici, infermieri o assistenti di ricerca. Durante il processo di consenso, i partecipanti verranno informati che la partecipazione è volontaria e che possono rifiutarsi di entrare nello studio o ritirarsi in qualsiasi momento durante il follow-up, per qualsiasi motivo.

Ai partecipanti verrà chiesto di esprimere il proprio consenso alla partecipazione firmando e stampando il proprio nome. Sarà richiesto un testimone imparziale per controfirmare il consenso per coloro che necessitano di un interprete durante il processo di consenso. I partecipanti riceveranno un compenso finanziario per le spese di viaggio associate a ciascuna visita.

Procedure di iscrizione e follow-up

Reclutamento al basale

L'idoneità dei potenziali partecipanti verrà valutata in base ai criteri di inclusione ed esclusione sopra indicati. Dopo il processo di consenso e dopo che un partecipante ha dato il consenso informato scritto a partecipare, verrà assegnato un numero identificativo univoco. La valutazione dell'idoneità alla partecipazione sarà effettuata da personale adeguatamente formato che potrà essere medico, infermieri o assistenti di ricerca.

Procedura di raccolta dati

Utilizzando un CRF, alla Visita 1 (V1), a tutti i partecipanti verrà chiesto di fornire informazioni sociodemografiche e anamnesi medica, inclusa la storia dei farmaci. Agli intervistati per LTBI verrà chiesto di fornire dettagli sull'esposizione recente e precedente a pazienti affetti da tubercolosi, storia di tubercolosi e altri potenziali determinanti di LTBI come la vicinanza fisica a pazienti affetti da tubercolosi attivi, la durata media giornaliera dell'esposizione e la durata totale dell'esposizione ai casi indice . Le CRF includeranno anche i seguenti dati: elenco di controllo dei criteri di ammissibilità, risultati degli esami clinici di base e dei test di laboratorio e informazioni raccolte durante il follow-up compresi i dettagli sul ritiro, se applicabile. I membri del team di progetto responsabili del completamento delle CRF, che possono essere assegnisti di ricerca o operatori sul campo, saranno elencati in un registro della delegazione.

Raccolta dei campioni di base e valutazioni di laboratorio

I campioni verranno raccolti come dettagliato nella Figura 1 e nelle Tabelle 1 e 2 e le analisi di laboratorio verranno eseguite come dettagliato nelle Tabelle 3 e 4. Laddove i test vengono eseguiti come parte delle cure di routine (ad es. emocromo completo per i pazienti con tubercolosi attiva, sierologia HIV per i pazienti con tubercolosi attiva e screening LTBI IGRA-positivi), i risultati saranno accessibili tramite CRS e documentati sulla CRF. Agli screening LTBI IGRA negativi e ai partecipanti non esposti verrà offerto un test HIV durante la visita 1.

Per indagare se i ceppi di Mtb isolati da CD34+ PBMC di contatti di tubercolosi corrispondono a quelli isolati dall'espettorato di casi indice a cui sono stati esposti, i campioni di espettorato saranno raccolti da 10 pazienti con tubercolosi attiva indice che hanno contatti positivi al test PCR CD34+ arruolati nello studio, e l'analisi del sequenziamento dell'intero genoma verrà eseguita sugli isolati coltivati ​​da questi campioni. Sulla base di questa analisi, i primer per creare librerie di ampliconi di Mtb saranno progettati utilizzando approcci bioinformatici per catturare la diversità dei ceppi. Questi primer verranno poi utilizzati per generare librerie di ampliconi di Mtb da cellule CD34+ che ospitano DNA genomico di Mtb isolato dai contatti della tubercolosi. Queste librerie verranno quindi sequenziate e confrontate con il genoma Mtb del caso indice per determinare se i ceppi isolati dai casi indice e dai contatti corrispondono.

I partecipanti con test HIV/IGRA positivi verranno indirizzati rispettivamente alle cliniche HIV/TBC per un'ulteriore valutazione. Laddove i test HIV e gli IGRA sono stati eseguiti a fini di ricerca (ad es. dove non fanno parte delle cure di routine), il personale di ricerca comunicherà questi risultati ai partecipanti non appena saranno disponibili.

Procedure di follow-up

• Screening LTBI: le visite e le valutazioni di follow-up sono dettagliate nella Figura 1, Tabella 1 e Tabella 3. I partecipanti parteciperanno alla visita 2 a 3 mesi (visita 2, V2). I partecipanti che hanno completato la chemioprofilassi avranno una valutazione clinica di routine al termine del trattamento. Coloro che non assumono la chemioprofilassi verranno seguiti anche a 3 mesi dopo V1. Oltre a completare una CRF che dettaglia i sintomi della tubercolosi attiva (tutti i partecipanti) e l'adesione alla chemioprofilassi (quelli che ricevono la chemioprofilassi), verrà raccolto un campione di sangue da 117 ml per l'analisi immunologica e molecolare come dettagliato nella sezione 13.3 di seguito. Al termine della seconda visita, la partecipazione allo studio terminerà.
• Pazienti con tubercolosi attiva: le visite e il follow-up sono dettagliati nella Figura 1, Tabella 2 e Tabella 4. I partecipanti che assumono un trattamento anti-TB avranno una valutazione clinica di routine al completamento del trattamento e un secondo campione di sangue da 114 ml verrà raccolto durante questa visita per analisi immunologiche e molecolari come dettagliato nella sezione 13.3 di seguito. Una volta completata la seconda visita, la partecipazione allo studio terminerà.

I risultati del test CD34+ PCR non verranno utilizzati per guidare la gestione clinica, poiché questo test è uno strumento di ricerca nelle prime fasi di sviluppo e i suoi risultati non sono stati correlati ad alcun risultato clinico.

Ritiro del partecipante

I partecipanti verranno ritirati se ritirano il loro consenso a partecipare o se si conclude che il ritiro è nel migliore interesse del partecipante. I partecipanti verranno considerati ritirati anche se non si presenteranno alla seconda visita di studio programmata nonostante i solleciti scritti e telefonici. Se un partecipante si ritira dallo studio, il motivo del ritiro verrà registrato nella CRF.

I dati raccolti fino al momento del ritiro saranno inclusi nelle analisi dello studio, se non diversamente richiesto da un partecipante. Tutti i campioni clinici prelevati prima del ritiro di un partecipante verranno utilizzati per le analisi dello studio.

Definizione di fine studio

Lo studio terminerà quando tutte le valutazioni cliniche e di laboratorio saranno completate per tutti i partecipanti al follow-up.

9. Considerazioni statistiche

9.1 Dimensione del campione

Lo scopo principale di questo studio è convalidare ed estendere i risultati di un altro contesto in cui il DNA genomico di Mtb è stato rilevato in cellule CD34+ isolate dal sangue periferico di sette adulti asintomatici IGRA-positivi.10 Per raggiungere questo obiettivo, un totale di 100 soggetti selezionati per LTBI verranno reclutati nello studio trasversale (20 partecipanti per variabile indipendente da testare nell'analisi di regressione). Si prevede che circa cinquanta di questi partecipanti saranno IGRA-positivi, di cui a circa quaranta verrà prescritta la chemioprofilassi: il follow-up di 25 di questi partecipanti darà una potenza >80% al livello di significatività del 5% per dimostrare una riduzione della percentuale di individui positivi alla PCR CD34+ dall'80% al basale al 30% al follow-up.

10. Considerazioni etiche

Prima dell'inizio dello studio, verrà richiesta l'approvazione del NHS REC per il protocollo dello studio, i moduli di consenso informato e altri documenti pertinenti. Lo studio non avrà inizio finché non saranno ottenute le necessarie approvazioni da parte del comitato etico e finché lo sponsor non avrà dato il via libera all'attivazione dei siti. L'IC garantirà che questo studio sia condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki (2013) e i principi etici contenuti nel Research Governance Framework for Health and Social Care, Seconda edizione, 2005 e suoi successivi emendamenti. La decisione se un emendamento costituisce un emendamento minore o sostanziale spetta allo sponsor. Le modifiche sostanziali che richiedono la revisione da parte del REC non saranno implementate finché non saranno approvate dall'organismo competente. Tutta la corrispondenza con lo Sponsor e il REC verrà conservata nel Master File dello studio. Il CI avviserà il REC e lo Sponsor al termine dello studio.

Il consenso informato scritto sarà ottenuto dai partecipanti da una persona adeguatamente formata (che può essere un medico, un infermiere o un assistente di ricerca) prima della partecipazione a questo studio. Le schede informative saranno rese disponibili in inglese e in altre lingue ove necessario. Ai potenziali partecipanti verrà fornita la scheda informativa e verranno spiegati gli obiettivi, i metodi, i benefici attesi e i potenziali rischi dello studio. Durante il processo di consenso, ai partecipanti verrà spiegato che la partecipazione è volontaria e che possono rifiutarsi di entrare nello studio o ritirarsi in qualsiasi momento durante il follow-up, per qualsiasi motivo.

Conflitto di interessi

Non sono stati identificati interessi finanziari o altri interessi concorrenti per l'IC o per qualsiasi co-investigatore.

11. Considerazioni sulla sicurezza

Poiché lo studio è osservazionale, il rischio di eventi avversi correlati allo studio è trascurabile. Tuttavia, qualsiasi evento avverso ritenuto correlato allo studio verrà segnalato allo sponsor entro 24 ore. Il volume di sangue da raccogliere (fino a 120 ml) può essere percepito come elevato da alcuni partecipanti, ma gli adulti che donano il sangue comunemente donano 500 ml alla volta senza soffrire di anemia. Gli investigatori non prevedono quindi alcun evento avverso correlato al prelievo di questo volume di sangue. Le informazioni riguardanti il ​​volume del campione di sangue e le eventuali conseguenze indesiderate sulla salute verranno spiegate ai partecipanti nel foglio informativo. Tutti i pazienti affetti da tubercolosi saranno sottoposti a screening per l'anemia come parte della loro consueta assistenza clinica e quelli con livello di emoglobina inferiore a 10 g/dl all'ingresso saranno esclusi. Inoltre, verranno adottate le seguenti misure per ridurre al minimo i potenziali disagi, disagi e rischi che i partecipanti potrebbero riscontrare durante il corso di questo studio:

- utilizzo di personale adeguatamente formato per l'esecuzione dei salassi

12. Trattamento dei dati e tenuta dei registri

12.1. Riservatezza

Verranno raccolte informazioni sanitarie protette (PHI) necessarie per la conduzione e l'analisi dello studio per tutti i partecipanti selezionati per lo studio; queste informazioni includeranno il nome, la data di nascita, il sesso, l'indirizzo, il numero di telefono, il numero della cartella clinica se applicabile, l'indirizzo e-mail se applicabile e l'origine etnica di ciascun partecipante. Il personale dello studio che necessita dell'accesso alle PHI per condurre o analizzare lo studio sarà elencato in un registro della delegazione. Le PHI rimarranno riservate e saranno gestite, elaborate, archiviate e distrutte secondo il Data Protection Act 1998. I partecipanti manterranno il diritto di revocare la propria autorizzazione all'uso delle proprie PHI in qualsiasi momento durante lo studio. Tutti i partecipanti saranno resi anonimi nelle pubblicazioni derivanti da questo studio. I dati saranno pseudo-anonimi come segue. Le PHI saranno conservate in un database sicuro collegato a un codice identificativo univoco. Le informazioni cliniche saranno conservate in un database sicuro separato, collegato allo stesso codice identificativo univoco. L'IC e i co-investigatori avranno accesso al set di dati dello studio finale pseudo-anonimo.

Nel corso della ricerca, tutti i documenti saranno sotto la responsabilità del CI e saranno conservati in condizioni di sicurezza. Una volta completato lo studio, lo sponsor richiede che le registrazioni e i dati siano conservati per altri 20 anni. Il CI fungerà da "custode" dei dati di ricerca. L'accesso alle PHI sarà limitato al numero minimo di persone necessarie per la conduzione dello studio, del controllo di qualità, dell'audit e dell'analisi. Di seguito saranno compresi i documenti di origine: registri di screening, consenso informato e CRF cartacea. Tutti i documenti originali verranno archiviati in modo sicuro in schedari chiusi a chiave. Il trasferimento e il trasporto dei dati saranno condotti in conformità con il Data Protection Act del 1998 del Regno Unito. Le informazioni di identificazione personale non verranno archiviate, trasportate o inviate a o da qualsiasi dispositivo portatile a meno che tale dispositivo non sia crittografato.

12.2. Raccolta, registrazione e trattamento dei dati

I moduli di consenso firmati e i documenti cartacei contenenti i dati di origine saranno conservati in modo sicuro. I dati dello studio verranno inseriti in un database nel software EpiData Entry. Il personale riceverà una formazione adeguata per utilizzare il database per l'immissione dei dati. I dati di laboratorio verranno inseriti nel database.

L'IC e i co-investigatori avranno accesso ai dati dello studio durante lo studio. Anche il personale dello studio che richiede tale accesso per condurre lo studio avrà l'accesso necessario. L'accesso ai dati dello studio durante lo studio sarà concesso anche ai rappresentanti autorizzati dello Sponsor, dell'istituto ospitante e delle autorità di regolamentazione, se necessario.

12.3. Controllo qualità e garanzia della qualità

La documentazione dello studio sarà messa a disposizione dei rappresentanti dello Sponsor e del REC per il controllo e la garanzia della qualità, come richiesto.

13. Laboratori

13.1. Raccolta, etichettatura ed elaborazione dei campioni

I campioni di sangue verranno raccolti dal personale dello studio, etichettati con l'ID del partecipante e datati. Le provette Tempus verranno agitate vigorosamente subito dopo la raccolta secondo le raccomandazioni del produttore. I campioni per l'emocoltura e la sierologia dell'HIV verranno trasportati ai laboratori centrali per l'elaborazione. I campioni di sangue rimanenti verranno trasportati al Blizard Institute, dove verranno indicate la data e l'ora di ricezione del campione, nonché le condizioni del campione (ad es. non coagulati) saranno registrati in un registro di laboratorio. I campioni per il test QFT-Plus verranno incubati a 37 °C subito dopo il ricevimento dei campioni per 18 ore, prima della centrifugazione e dell'aspirazione dei surnatanti che verranno conservati a -80 °C in attesa dell'analisi per la concentrazione di IFN-gamma. I campioni di sangue nelle provette Tempus verranno conservati a -80 °C in un rack etichettato in attesa del trasporto alla Divisione di infezione e immunità, University College London per l'estrazione dell'RNA e il profilo dell'espressione genica. Le PBMC verranno separate dal campione rimanente (100 ml), con successivo isolamento delle cellule CD34+ mediante magnetic bead sorting. La purezza delle cellule CD34+ isolate sarà controllata mediante citometria a flusso.