Ocena nowego mikrobiologicznego testu diagnostycznego do wykrywania utajonej infekcji Mycobacterium tuberculosis (MICRO-LTBI)

Cele:

i) Ustalenie, czy DNA M. tuberculosis (Mtb) można wykryć w jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej CD34+ (PBMC) wyizolowanych z

• bezobjawowi dorośli poddawani badaniom przesiewowym w kierunku LTBI (osoby przesiewowe LTBI)
• dorośli z nowo zdiagnozowaną aktywną gruźlicą (aktywne przypadki) ii) Ustalenie, czy szczepy Mtb wyizolowane z CD34+ PBMC osób, które niedawno miały kontakt z gruźlicą w gospodarstwach domowych, są genetycznie identyczne z tymi wyizolowanymi z plwociny przypadków indeksowych z gruźlicą płuc, na które byli narażeni iii ) Scharakteryzowanie immunologicznych, klinicznych i epidemiologicznych korelatów zdolności do wykrywania Mtb w CD34+ PBMC w heterogenicznej populacji IGRA-dodatnich i -negatywni przesiewacze LTBI.

iv) Aby ustalić, czy obecność DNA Mtb w CD34+ PBMC osób przesiewowych LTBI z pozytywnym wynikiem IGRA wiąże się z obecnością sygnatury transkrypcyjnej krwi obwodowej, o której ostatnio donoszono, że pozwala przewidywać ryzyko progresji do aktywnej gruźlicy v) Ocena zmiany podłużnej w wynikach testu PCR CD34+ w

- Osoby przeprowadzające badanie LTBI realizujące chemioprofilaktykę w kierunku LTBI

• Osoby przesiewowe LTBI nie otrzymują chemioprofilaktyki
• Pacjenci kończący leczenie z powodu aktywnej gruźlicy

4.1. Tło

Gruźlica (TB) jest chorobą zakaźną wywoływaną przez organizmy z grupy M. tuberculosis complex (MTBC). Głównym patogenem u ludzi jest M.tuberculosis (Mtb). Gruźlica zwykle atakuje płuca i jest przenoszona przez wdychanie zakaźnych kropelek wydalanych przez pacjenta z aktywną gruźlicą płuc. Gruźlica była główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności w całej historii ludzkości. W Europie i Ameryce Północnej, po gwałtownym wzroście liczby zachorowań na gruźlicę w XVII i XVIII wieku, nastąpił gwałtowny spadek, który przypisywano głównie poprawie warunków społeczno-ekonomicznych, stosowaniu środków ochrony zdrowia publicznego i izolacji chorych na gruźlicę.1 Pod koniec XIX wieku po tendencji spadkowej liczby przypadków i zgonów na gruźlicę w Europie i Ameryce Północnej, dwa główne wydarzenia, odkrycie Mtb i badania rentgenowskiego, stały się kluczowe w diagnostyce i leczeniu gruźlicy.1 Następnie szczepienie M. bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) i leczenie antybiotykami w pierwszej połowie XX wieku doprowadziły do ​​​​światowego optymizmu, że kontrola i eliminacja gruźlicy jest w zasięgu ręki. Jednakże gruźlica do dziś pozostaje poważnym zagrożeniem dla zdrowia publicznego i jest drugą najczęstszą zakaźną przyczyną zgonów na świecie. 2, 3 Według raportu WHO z 2015 r. w 2014 r. na całym świecie wystąpiło około 9,6 miliona nowych przypadków gruźlicy (z czego 12% to osoby zakażone wirusem HIV) i 1,5 miliona zgonów (w tym 0,4 miliona wśród osób współzakażonych wirusem HIV).4 Ponadto szacuje się, że jedna trzecia światowej populacji ma utajoną infekcję Mtb (LTBI), z czego u około 10% w ciągu życia rozwinie się aktywna gruźlica.5

Chociaż tylko 22 kraje o niskich i średnich dochodach (LMIC) odpowiadają za 80% światowego obciążenia, gruźlica jest nadal ważną chorobą wśród populacji imigrantów w krajach o wysokich dochodach. W Wielkiej Brytanii (UK) spadek zapadalności na gruźlicę osiągnięty w XX wieku uległ odwróceniu, przy wzroście liczby zgłoszeń gruźlicy o 50% w latach 1998–2009.6 W 2013 r. zgłoszono łącznie 7 892 przypadków gruźlicy, co odpowiada zapadalności 12,3 na 100 000 mieszkańców rocznie, co stanowi najwyższą liczbę wśród krajów o wysokich dochodach.7 Wysoki odsetek (37,8%) przypadków gruźlicy w Wielkiej Brytanii występuje w Londynie, gdzie wskaźnik zapadalności na gruźlicę wynosi 35,5 na 100 000 mieszkańców rocznie; Większość tych przypadków stanowili imigranci z Indii (30%), Pakistanu (20%) i Somalii (5%).7

Obecnie kluczowymi strategiami kontroli gruźlicy jest dokładna i szybka diagnoza aktywnej choroby wraz ze skutecznym leczeniem zapobiegającym transmisji. Jednak opóźniona diagnoza jest głównym wyzwaniem ułatwiającym przenoszenie w społecznościach.8 Zwykle od wystąpienia objawów do rozpoczęcia leczenia u pacjenta z gruźlicą mija kilka miesięcy. Na przykład w Wielkiej Brytanii prawie jedna trzecia pacjentów z gruźlicą płuc rozpoczyna leczenie 4 miesiące od wystąpienia objawów.7 Tak duże opóźnienia w połączeniu z dużą pulą LTBI sugerują potrzebę interwencji mających na celu identyfikację i leczenie osób z LTBI w celu uzyskania kontroli gruźlicy. Leczenie przeciwdrobnoustrojowe LTBI (chemoprofilaktyka) skutecznie zmniejsza ryzyko reaktywacji i jest rutynowo stosowane w placówkach o wysokich dochodach i niskiej zapadalności. Jednakże wdrożenie tej polityki, zwłaszcza w warunkach dużego obciążenia, utrudnia brak testu diagnostycznego umożliwiającego identyfikację podgrupy osób uczulonych na Mtb, które są narażone na ryzyko rozwoju aktywnej gruźlicy, u których powinna być ukierunkowana chemioprofilaktyka.

Obecnie diagnozę LTBI stawia się na podstawie wykrycia adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej na zakażenie Mtb in vivo (przy użyciu skórnego testu tuberkulinowego) lub ex vivo (przy użyciu testów uwalniania interferonu gamma [IGRA]). Podejście to, które nie wykrywa bezpośrednio Mtb, ma ograniczenia w tym sensie, że nie pozwala na odróżnienie 10% osób uczulonych, które są zagrożone reaktywacją (u których korzystna może być chemioprofilaktyka) od 90% osób uczulonych immunologicznie, ale które nie postęp do aktywnej choroby (u których chemioprofilaktyka nie przynosi korzyści). Ta ostatnia grupa jest potencjalnie niejednorodna: niektórzy mogli wyeliminować infekcję, podczas gdy inni mogą mieć LTBI, ale mogą ją powstrzymać na czas nieokreślony.9 Narzędzia do analizy tych możliwych fenotypów mogłyby pozwolić na bardziej precyzyjne ukierunkowanie chemioprofilaktyki, ale obecnie ich brakuje. W tym badaniu badacze sprawdzą, czy Mtb można wykryć w komórkach CD34+ wyizolowanych z krwi obwodowej a) dorosłych poddawanych badaniom przesiewowym w kierunku LTBI (osoby przesiewowe LTBI) oraz b) dorosłych z nowo zdiagnozowaną aktywną gruźlicą (aktywne przypadki).

4.2. Uzasadnienie badania

Badanie to opiera się na niedawnych obserwacjach jednego ze współbadaczy (Stephena Reece'a), który był częścią grupy w Instytucie Biologii Zakażeń im. Maxa Plancka w Berlinie, który wykrył DNA Mtb w długoterminowo repopulujących pluripotencjalnych hematopoetycznych komórkach macierzystych CD34+ (LTpHSC) wyizolowane ze 100 ml krwi obwodowej siedmiu zdrowych dorosłych chorych na LTBI (dodatni IGRA, z wyłączeniem aktywnej gruźlicy); DNA Mtb nie wykryto w LTpHSC siedmiu zdrowych dorosłych z ujemnym wynikiem testu IGRA. 10 Jeżeli to niezwykłe odkrycie uda się powtórzyć w innym kontekście, może to doprowadzić do opracowania nowego testu mikrobiologicznego („test CD34+ PCR”) o kilku potencjalnych zastosowaniach:

a) identyfikacja osób, które są latentnie zakażone Mtb opornym na antybiotyki (umożliwiając wybór odpowiedniego schematu chemioprofilaktyki), b) monitorowanie skuteczności chemioprofilaktyki i interwencji zapobiegających nabyciu LTBI, takich jak szczepionki i programy suplementacji mikroelementami, c ) śledzenie rozprzestrzeniania się poszczególnych szczepów w populacji (zapewniając narzędzie do interwencji w zakresie zdrowia publicznego), d) rozróżnianie zagrożonych osób uczulonych na jazdę na rowerze górskim progresji do aktywnej choroby w porównaniu z tymi, którzy nie są, co umożliwi ukierunkowanie chemioprofilaktyki na populacje, które mogą z niej skorzystać, oraz e) dostarczenie nowych informacji na temat immunobiologii LTBI i patogenezy gruźlicy u ludzi.

4.3. Hipotezy

i) DNA Mtb można wykryć w CD34+ PBMC u bezobjawowych dorosłych IGRA-dodatnich i aktywnych przypadków gruźlicy w chwili rozpoznania, ale nie u dorosłych IGRA-ujemnych.

ii) Szczepy Mtb wyizolowane z CD34+ PBMC bezobjawowych kontaktów z gruźlicą IGRA-dodatnią będą genetycznie identyczne z tymi wyizolowanymi z plwociny przypadków wskaźnikowych gruźlicy płuc, na którą byli ostatnio narażeni.

iii) Możliwość wykrycia DNA Mtb w CD34+ PBMC osób przesiewowych LTBI powiązanych z wynikami IGRA, jak również uznanych klinicznych i epidemiologicznych czynników ryzyka LTBI iv) Zdolność do wykrycia DNA Mtb w CD34+ PBMC osób przesiewowych LTBI z dodatnim wynikiem IGRA, powiązanych z sygnaturami transkryptomicznymi krwi obwodowej wcześniej zdefiniowano jako związany z progresją do aktywnej gruźlicy v) Terapia przeciwdrobnoustrojowa jest skuteczna w eliminowaniu Mtb z CD34+ PBMC wyizolowane od osób z LTBI lub aktywną gruźlicą, u których była ona wykrywalna na początku badania; oraz że wyniki testu PCR CD34+ są powtarzalne u osób przesiewowych LTBI, które nie otrzymały chemioprofilaktyki

5. Cele

5.1. Główny cel

Aby określić, czy DNA M. tuberculosis (Mtb) można wykryć w jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej CD34+ (PBMC) wyizolowanych z

• bezobjawowi dorośli poddawani rutynowym badaniom przesiewowym w kierunku LTBI (osoby przesiewowe LTBI)
• dorośli z nowo zdiagnozowaną aktywną gruźlicą (aktywne przypadki)

5.2. Cele drugorzędne

• Aby określić, czy szczepy Mtb wyizolowane z CD34+ PBMC osób kontaktowych z gruźlicą są genetycznie identyczne z tymi wyizolowanymi z plwociny przypadków indeksowych z gruźlicą płuc, na które były narażone
• Scharakteryzowanie immunologicznych, klinicznych i epidemiologicznych korelatów zdolności do wykrywania Mtb w CD34+ PBMC w heterogenicznej populacji osób przesiewowych LTBI z dodatnim i ujemnym wynikiem IGRA.
• Aby ustalić, czy obecność DNA Mtb w CD34+ PBMC osób przesiewowych z pozytywnym wynikiem IGRA wiąże się z obecnością sygnatury transkrypcyjnej krwi obwodowej, o której ostatnio donoszono, że pozwala przewidywać ryzyko progresji do aktywnej gruźlicy TB11
• Aby ocenić zmianę podłużną w wynikach testu PCR CD34+
• Osoby przesiewowe LTBI realizujące chemioprofilaktykę w kierunku LTBI
• Osoby przesiewowe LTBI nie otrzymują chemioprofilaktyki
• pacjentów kończących leczenie aktywnej gruźlicy

Projekt badania i wizyty studyjne

Badacze przeprowadzą badanie podłużne. Zostaną zrekrutowane dwie grupy uczestników: dorośli poddawani badaniom przesiewowym w kierunku LTBI (osoby przesiewowe LTBI) oraz pacjenci, którzy mają rozpocząć leczenie z powodu aktywnej gruźlicy (aktywne przypadki). Osoby przesiewowe LTBI to osoby, które są poddawane badaniom przesiewowym pod kątem LTBI w ramach standardowej opieki: są to osoby, które miały niedawno kontakt z przypadkiem gruźlicy o wskaźniku zakaźności, nowi uczestnicy z krajów o wysokim wskaźniku zachorowań na gruźlicę, pracownicy służby zdrowia poddawani badaniom przesiewowym w zakresie higieny pracy oraz pacjenci, którzy mają zostać poddani terapii immunosupresyjnej . Pacjenci z aktywną gruźlicą to pacjenci, u których zdiagnozowano aktywną gruźlicę i którzy mają wkrótce rozpocząć leczenie przeciwgruźlicze.

Na początku badania (wizyta 1) uczestnicy, którzy spełnią kryteria włączenia i wyrażą pisemną świadomą zgodę na udział w badaniu, zostaną poproszeni o podanie informacji socjodemograficznych, w tym szczegółów dotyczących wieku, płci i pochodzenia etnicznego, a także szczegółów historii narażenia na gruźlicę (w tym konkretnego narażenia na uczestnikom z aktywną gruźlicą włączonym do badania) i inne klinicznie istotne dane, z których wszystkie zostaną zapisane w formularzu zgłoszenia przypadku (CRF). Jeśli nie jest to już wykonywane w ramach rutynowej opieki, zostanie wykonane badanie serologiczne na obecność wirusa HIV. Zostanie pobrana próbka krwi o objętości 120 ml (117 ml, jeśli w ramach rutynowej opieki wykonano już test na obecność wirusa HIV) do badania IGRA (QFT-Plus), posiewu krwi w kierunku Mtb, analizy sygnatury ryzyka transkryptomu krwi obwodowej oraz testu CD34+ PCR w kierunku DNA Mtb na poziomie podstawowym. Uczestnikom z dodatnim wynikiem testu IGRA, u których na podstawie oceny klinicznej i prześwietlenia klatki piersiowej wykluczono aktywną gruźlicę (w ramach standardowej opieki), zostanie zaoferowany 3-miesięczny kurs chemioprofilaktyki ryfampicyną i izoniazydem, jeśli spełniają kryteria tej terapii (również w ramach standardowej terapii). opieka).12

Przekazywanie informacji o pozytywnych wynikach testu na obecność wirusa HIV będzie rozpatrywane zgodnie z zaleceniami brytyjskich krajowych wytycznych dotyczących wykonywania testów na obecność wirusa HIV z 2008 r. Pozytywne wyniki testu na obecność wirusa HIV zostaną przekazane podczas bezpośredniej rozmowy z lekarzem prowadzącym badanie, w obecności pielęgniarki z kliniki Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) (lokalna służba zajmująca się HIV). Uczestnicy, którzy uzyskają wynik testu na obecność wirusa HIV, zostaną skierowani do najbliższej kliniki GUM w celu potwierdzenia wyników i, w razie potrzeby, dalszego leczenia.

Po 3 miesiącach (wizyta 2) zostaną zapisane szczegóły dotyczące przepisania i przestrzegania chemioprofilaktyki, a także zostanie pobrana druga próbka krwi (117 ml) w celu powtórzenia IGRA (QFT-Plus), posiewu krwi i testu PCR CD34+. W przypadku uczestników, którzy zastosowali chemioprofilaktykę, podczas wizyty 2 zostanie pobrana także rurka Tempus.

Na początku badania (wizyta 1) uczestnicy, którzy spełnią kryteria włączenia i wyrażą pisemną świadomą zgodę na udział w badaniu, zostaną poproszeni o podanie podstawowych informacji socjodemograficznych, w tym szczegółów dotyczących wieku, płci i pochodzenia etnicznego, a także czasu trwania objawów, kontaktu z jakimkolwiek zarejestrowanego pracownika przesiewowego LTBI oraz inne klinicznie istotne dane, z których wszystkie zostaną zapisane w CRF. W ramach rutynowej opieki w tej grupie pacjentów wykonuje się badania serologiczne w kierunku HIV, pełną morfologię krwi, mikroskopię rozmazu plwociny i pobranie nacięcia w kierunku M.tuberculosis. Na początku badania zostanie pobrana próbka krwi o objętości 114 ml do badania IGRA (QFT-Plus), posiewu krwi w kierunku Mtb i testu PCR CD34+ na obecność DNA Mtb. Pacjenci z gruźlicą będą leczeni z powodu aktywnej choroby zgodnie z wytycznymi Wielkiej Brytanii. 12

Po zakończeniu chemioterapii (wizyta 2, zwykle po 6 miesiącach), zostaną zapisane szczegóły dotyczące przepisania i przestrzegania leczenia przeciwgruźliczego oraz pobrana zostanie druga próbka krwi (114 ml) do badania IGRA (QFT-Plus), posiewu krwi dla Mtb i testu CD34+ PCR.

Procedury badawcze

Procedury zaproszeń i świadomej zgody

Zaproszenie

W Londynie badania przesiewowe w kierunku LTBI przy użyciu IGRA są powszechnie przeprowadzane w czterech grupach: niedawne kontakty pacjentów z aktywną gruźlicą; nowi uczestnicy z krajów o dużym obciążeniu gruźlicą; pacjenci, którzy mają rozpocząć leczenie immunosupresyjne; oraz pracownicy służby zdrowia poddawani badaniom przesiewowym w zakresie higieny pracy. Grupy ryzyka LTBI można początkowo zidentyfikować w różnych środowiskach (klinika gruźlicy, podstawowa opieka zdrowotna, kliniki reumatologiczne, służba zdrowia w miejscu pracy), ale wszystkie są kierowane albo do poradni gruźlicy (kontakty, nowi pacjenci, pacjenci rozpoczynający terapię immunosupresyjną ) lub do Poradni Medycyny Pracy (pracownicy służby zdrowia poddawani badaniom przesiewowym w zakresie higieny pracy) w celu wykonania badań przesiewowych LTBI. W związku z tym zostaną zidentyfikowani potencjalnie kwalifikujący się kandydaci do badania LTBI i zrekrutowani do badania w klinikach gruźlicy lub poradni medycyny pracy. Pacjenci z aktywną gruźlicą będą identyfikowani i rekrutowani w klinikach przeciwgruźliczych Barts Health NHS Trust.

Potencjalnie kwalifikujące się osoby zostaną poinformowane o badaniu przez pielęgniarki lub lekarzy pracujących w poradniach gruźlicy lub poradni medycyny pracy, którzy wykonują badania przesiewowe w kierunku gruźlicy w ramach zwykłej opieki klinicznej. Osobom, które wyrażą zainteresowanie badaniem, członek zespołu opieki klinicznej udostępni kartę informacyjną dla uczestnika. Wyjaśni to cele, metody, przewidywane korzyści i potencjalne zagrożenia związane z badaniem i zostanie przedstawione w języku nietechnicznym, w języku angielskim lub, w razie potrzeby, w innych językach. Osoby, które wypełnią Arkusz informacyjny dla uczestnika, zostaną poproszone o wypełnienie „Karty kontaktowej”, podając swoje dane kontaktowe i upoważniając zespół badawczy do nawiązania z nimi kontaktu, gdy tylko będą mieli okazję zapoznać się z informacjami; niniejszy „Karta kontaktowa” zostanie przesłana zespołowi badawczemu przez zespół opiekujący się uczestnikiem.

Procedury świadomej zgody

Świadoma zgoda zostanie udzielona zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi JRMO. Świadoma zgoda zostanie wyrażona w prywatnym pomieszczeniu przez personel, który przeszedł specjalne przeszkolenie w zakresie Dobrej Praktyki Klinicznej i udzielania świadomej zgody, którym mogą być lekarze, pielęgniarki lub asystenci naukowi. W trakcie procesu wyrażania zgody uczestnicy zostaną poinformowani, że udział w badaniu jest dobrowolny i że mogą odmówić udziału w badaniu lub wycofać się w dowolnym momencie obserwacji, z dowolnego powodu.

Uczestnicy zostaną poproszeni o wyrażenie zgody na udział poprzez podpisanie i wydrukowanie swojego imienia i nazwiska. Bezstronny świadek będzie musiał kontrasygnować zgodę w przypadku osób, które wymagają tłumacza w trakcie procesu uzyskiwania zgody. Uczestnicy otrzymają zwrot kosztów podróży związanych z każdą wizytą.

Procedury rejestracji i dalszych działań

Rekrutacja na poziomie podstawowym

Potencjalni uczestnicy zostaną ocenieni pod kątem kwalifikowalności w oparciu o kryteria włączenia i wykluczenia określone powyżej. Po zakończeniu procesu uzyskiwania zgody i po wyrażeniu przez uczestnika pisemnej świadomej zgody na udział zostanie mu nadany unikalny numer identyfikacyjny. Oceny kwalifikowalności do udziału w badaniu dokona odpowiednio przeszkolony personel, którym mogą być lekarze, pielęgniarki lub asystenci naukowi.

Procedura gromadzenia danych

Korzystając z CRF, podczas wizyty 1 (V1) wszyscy uczestnicy zostaną poproszeni o podanie informacji socjodemograficznych i historii medycznej, w tym historii leków. Osoby przeprowadzające kontrolę LTBI zostaną poproszone o podanie szczegółowych informacji na temat niedawnego i poprzedniego narażenia na kontakt z pacjentami z gruźlicą, historii gruźlicy i innych potencjalnych czynników warunkujących LTBI, takich jak fizyczna bliskość pacjentów z aktywną gruźlicą, średni dzienny czas narażenia, a także całkowity czas trwania narażenia w przypadkach indeksowych . CRF będą również zawierać następujące dane: listę kontrolną kryteriów kwalifikowalności, wyniki podstawowych badań klinicznych i testów laboratoryjnych oraz informacje zebrane podczas obserwacji, w tym szczegóły dotyczące wycofania, jeśli ma to zastosowanie. Członkowie zespołu projektowego odpowiedzialni za wypełnienie CRF, którymi mogą być pracownicy naukowi lub pracownicy terenowi, zostaną wpisani do dziennika delegacji.

Pobieranie próbek podstawowych i oceny laboratoryjne

Próbki zostaną pobrane zgodnie z rysunkiem 1 oraz tabelami 1 i 2, a analizy laboratoryjne zostaną przeprowadzone zgodnie z opisem w tabelach 3 i 4. W przypadku wykonywania badań w ramach rutynowej opieki (np. pełna morfologia krwi w przypadku pacjentów z aktywną gruźlicą, badania serologiczne w kierunku HIV w przypadku pacjentów z aktywną gruźlicą i osoby przesiewowe LTBI z wynikiem IGRA-dodatnim), dostęp do wyników będzie można uzyskać za pośrednictwem CRS i udokumentować w CRF. Osobom, które przeszły badanie LTBI z wynikiem ujemnym pod względem IGRA oraz uczestnikom nienarażonym na kontakt, zostanie zaproponowane wykonanie testu na obecność wirusa HIV podczas wizyty 1.

W celu zbadania, czy szczepy Mtb wyizolowane z CD34+ PBMC osób kontaktowych z gruźlicą odpowiadają szczepom wyizolowanym z plwociny przypadków indeksowych, na które były narażone, próbki plwociny zostaną pobrane od 10 pacjentów z aktywną gruźlicą z indeksem, którzy mają pozytywne kontakty w teście CD34+ PCR, włączonych do badania, a analiza sekwencjonowania całego genomu zostanie przeprowadzona na izolatach wyhodowanych z tych próbek. Na podstawie tej analizy startery do tworzenia bibliotek amplikonów Mtb zostaną zaprojektowane przy użyciu podejść bioinformatycznych w celu uchwycenia różnorodności szczepów. Startery te zostaną następnie użyte do wygenerowania bibliotek amplikonu Mtb z komórek CD34+ zawierających genomowy DNA Mtb wyizolowany z kontaktów z gruźlicą. Biblioteki te zostaną następnie zsekwencjonowane i porównane z genomem Mtb przypadku indeksowego, aby określić, czy szczepy wyizolowane z przypadków indeksowych i kontaktów pasują do siebie.

Uczestnicy z pozytywnym wynikiem testu na obecność wirusa HIV/IGRA zostaną skierowani odpowiednio do klinik zajmujących się HIV/gruźlicą w celu dalszej oceny. Jeżeli testy na obecność wirusa HIV i IGRA zostały wykonane w celach badawczych (tj. jeśli nie stanowią one części rutynowej opieki), pracownicy naukowi przekażą te wyniki uczestnikom, gdy będą dostępne.

Dalsze procedury

• Osoby poddane kontroli LTBI: Wizyty i oceny uzupełniające przedstawiono szczegółowo na Rycinie 1, Tabeli 1 i Tabeli 3. Uczestnicy wezmą udział w wizycie 2 po 3 miesiącach (wizyta 2, V2). Uczestnicy, którzy ukończyli chemioprofilaktykę, zostaną poddani rutynowej ocenie klinicznej po zakończeniu leczenia. Osoby, które nie stosują chemioprofilaktyki, również zostaną poddane kontroli po 3 miesiącach od V1. Oprócz wypełnienia CRF zawierającego szczegółowe informacje na temat objawów aktywnej gruźlicy (wszyscy uczestnicy) i przestrzegania chemioprofilaktyki (osoby otrzymujące chemioprofilaktykę), zostanie pobrana próbka krwi o objętości 117 ml do analizy immunologicznej i molekularnej, jak opisano szczegółowo w sekcji 13.3 poniżej. Po zakończeniu drugiej wizyty udział w badaniu zakończy się.
• Pacjenci z aktywną gruźlicą: Wizyty i okresy kontrolne opisano szczegółowo na Ryc. 1, w Tabeli 2 i Tabeli 4. Po zakończeniu leczenia uczestnicy poddawani leczeniu przeciwgruźliczemu zostaną poddani rutynowej ocenie klinicznej, a w trakcie leczenia zostanie pobrana druga próbka krwi o objętości 114 ml. podczas tej wizyty w celu przeprowadzenia analizy immunologicznej i molekularnej, jak opisano szczegółowo w sekcji 13.3 poniżej. Po odbyciu drugiej wizyty udział w badaniu zakończy się.

Wyniki testu CD34+ PCR nie będą wykorzystywane do kierowania postępowaniem klinicznym, ponieważ test ten jest narzędziem badawczym we wczesnych fazach rozwoju, a jego wyniki nie zostały skorelowane z żadnym wynikiem klinicznym.

Wycofanie się uczestnika

Uczestnicy zostaną wycofani w przypadku wycofania zgody na udział lub w przypadku uznania, że ​​wycofanie zgody leży w najlepiej pojętym interesie uczestnika. Uznaje się, że uczestnicy wycofali się z udziału w badaniu, jeśli nie stawią się na drugą zaplanowaną wizytę studyjną pomimo pisemnych i telefonicznych przypomnień. Jeżeli uczestnik wycofa się z badania, przyczyna wycofania zostanie odnotowana w CRF.

Dane zebrane do momentu wycofania się zostaną uwzględnione w analizach badań, chyba że uczestnik zażąda inaczej. Wszelkie próbki kliniczne pobrane przed wycofaniem się uczestnika zostaną wykorzystane do analiz badawczych.

Definicja zakończenia badania

Badanie zakończy się po zakończeniu wszystkich ocen klinicznych i laboratoryjnych u wszystkich uczestników biorących udział w obserwacji kontrolnej.

9. Rozważania statystyczne

9.1 Wielkość próbki

Głównym celem tego badania jest walidacja i rozszerzenie wyników z innego kontekstu, w którym genomowy DNA Mtb wykryto w komórkach CD34+ wyizolowanych z krwi obwodowej siedmiu dorosłych bez objawów IGRA-dodatnich.10 Aby osiągnąć ten cel, do badania przekrojowego zostanie zatrudnionych łącznie 100 osób przeprowadzających selekcję LTBI (20 uczestników na każdą zmienną niezależną testowaną w analizie regresji). Oczekuje się, że około pięćdziesięciu z tych uczestników będzie miało wynik pozytywny w skali IGRA, a około czterdziestu zostanie przepisana chemioprofilaktyka: obserwacja 25 z tych uczestników da >80% mocy na poziomie istotności 5% w celu wykazania zmniejszenia odsetek osób CD34+ PCR-dodatnich z 80% na początku badania do 30% w okresie obserwacji.

10. Względy etyczne

Przed rozpoczęciem badania należy uzyskać zgodę NHS REC na protokół badania, formularze świadomej zgody i inne istotne dokumenty. Badanie nie rozpocznie się do czasu uzyskania niezbędnych zgód komisji etycznej i uzyskania przez sponsora „zielonego światła” na aktywację ośrodków. CI zapewni, że badanie to zostanie przeprowadzone zgodnie z Deklaracją Helsińską (2013) i zasadami etycznymi zawartymi w Ramach zarządzania badaniami w zakresie zdrowia i opieki społecznej, wydanie drugie, 2005 z późniejszymi zmianami. Decyzje, czy zmiana jest zmianą drobną czy istotną, będą należeć do sponsora. Istotne zmiany wymagające przeglądu przez KE nie zostaną wdrożone do czasu ich zatwierdzenia przez odpowiedni organ. Wszelka korespondencja ze Sponsorem i KE zostanie zachowana w aktach głównych badania. CI powiadomi KE i Sponsora po zakończeniu badania.

Przed udziałem w tym badaniu odpowiednio przeszkolona osoba (którą może być lekarz, pielęgniarka lub asystent badawczy) uzyska od uczestników pisemną świadomą zgodę. Arkusze informacyjne zostaną udostępnione w języku angielskim i, w razie potrzeby, w innych językach. Potencjalni uczestnicy otrzymają arkusz informacyjny i zostaną wyjaśnione cele, metody, przewidywane korzyści i potencjalne zagrożenia związane z badaniem. W trakcie procesu wyrażania zgody uczestnicy zostaną wyjaśnieni, że udział w badaniu jest dobrowolny i mogą odmówić udziału w badaniu lub wycofać się w dowolnym momencie obserwacji, z dowolnego powodu.

Konflikt interesów

Nie zidentyfikowano żadnych finansowych ani innych konkurencyjnych interesów IK ani żadnego współprowadzącego dochodzenie.

11. Względy bezpieczeństwa

Ponieważ badanie ma charakter obserwacyjny, ryzyko wystąpienia działań niepożądanych związanych z badaniem jest znikome. Jednakże każde zdarzenie niepożądane uznane za związane z badaniem zostanie zgłoszone sponsorowi w ciągu 24 godzin. Niektórzy uczestnicy mogą postrzegać objętość krwi do pobrania (do 120 ml) jako dużą, ale dorośli oddający krew zwykle oddają jednorazowo 500 ml, nie powodując przy tym anemii. Badacze nie przewidują zatem żadnych działań niepożądanych związanych z pobraniem takiej objętości krwi. Informacje dotyczące objętości próbki krwi oraz tego, czy będzie to miało niepożądane skutki zdrowotne, zostaną wyjaśnione uczestnikom w arkuszu informacyjnym. Wszyscy pacjenci z gruźlicą zostaną poddani badaniom przesiewowym pod kątem anemii w ramach zwykłej opieki klinicznej, a pacjenci z poziomem hemoglobiny poniżej 10 g/dl przy przyjęciu zostaną wykluczeni. Ponadto zostaną podjęte następujące środki w celu zminimalizowania potencjalnych niedogodności, dyskomfortu i ryzyka, których uczestnicy mogą doświadczyć w trakcie badania:

- wykorzystanie odpowiednio przeszkolonego personelu do wykonania upuszczania krwi

12. Przetwarzanie danych i prowadzenie rejestrów

12.1. Poufność

Chronione informacje zdrowotne (PHI) niezbędne do przeprowadzenia i analizy badania zostaną zebrane w przypadku wszystkich uczestników poddanych badaniu przesiewowemu; informacje te będą obejmować imię i nazwisko każdego uczestnika, datę urodzenia, płeć, adres, numer telefonu, numer dokumentacji medycznej, jeśli ma to zastosowanie, adres e-mail, jeśli ma to zastosowanie, oraz pochodzenie etniczne. Personel badawczy wymagający dostępu do PHI w celu przeprowadzenia lub analizy badania zostanie wymieniony w dzienniku delegacji. PHI pozostaną poufne i będą przetwarzane, przetwarzane, przechowywane i niszczone zgodnie z Ustawą o ochronie danych z 1998 r. Uczestnicy zachowują prawo do cofnięcia swojej zgody na wykorzystanie ich PHI w dowolnym momencie trwania badania. Wszyscy uczestnicy zostaną zanonimizowani w publikacjach powstałych w wyniku tego badania. Dane będą pseudoanonimizowane w następujący sposób. PHI będą przechowywane w bezpiecznej bazie danych powiązanej z unikalnym kodem identyfikacyjnym. Informacje kliniczne będą przechowywane w oddzielnej bezpiecznej bazie danych, powiązanej z tym samym unikalnym kodem identyfikacyjnym. CI i współbadacze będą mieli dostęp do pseudoanonimowego końcowego zbioru danych badania.

W trakcie badań za całą dokumentację odpowiada IK i będzie ona przechowywana w bezpiecznych warunkach. Po zakończeniu badania sponsor ma obowiązek przechowywania dokumentacji i danych przez kolejne 20 lat. IK będzie pełnić funkcję „opiekuna” danych badawczych. Dostęp do PHI będzie ograniczony do minimalnej liczby osób niezbędnych do przeprowadzenia badania, kontroli jakości, audytu i analizy. Dokumenty źródłowe będą obejmować następujące dokumenty: logi badań przesiewowych, świadomą zgodę i papierowy CRF. Wszystkie dokumenty źródłowe będą bezpiecznie przechowywane w zamykanych szafach aktowych. Przesyłanie i przesyłanie danych będzie odbywać się zgodnie z brytyjską ustawą o ochronie danych z 1998 r. Informacje umożliwiające identyfikację osoby nie będą przechowywane, transportowane ani wysyłane do lub z żadnego urządzenia przenośnego, chyba że urządzenie to zostanie zaszyfrowane.

12.2. Gromadzenie, rejestrowanie i przetwarzanie danych

Podpisane formularze zgody i dokumenty papierowe zawierające dane źródłowe będą bezpiecznie przechowywane. Dane z badania zostaną wprowadzone do bazy danych w oprogramowaniu EpiData Entry. Personel zostanie odpowiednio przeszkolony w zakresie korzystania z bazy danych do wprowadzania danych. Dane laboratoryjne zostaną wprowadzone do bazy danych.

CI i współbadacze będą mieli dostęp do danych badawczych w trakcie badania. Personel badawczy, który potrzebuje takiego dostępu w celu przeprowadzenia badania, również otrzyma taki dostęp, jaki jest niezbędny. Dostęp do danych badawczych w trakcie badania będą również przyznani upoważnionym przedstawicielom Sponsora, instytucji goszczącej i organów regulacyjnych, jeśli będzie to konieczne.

12.3. Kontrola jakości i zapewnienie jakości

Dokumentacja badania zostanie udostępniona przedstawicielom Sponsora i KE w celu kontroli i zapewnienia jakości, zgodnie z żądaniem.

13. Laboratoria

13.1. Pobieranie próbek, etykietowanie i przetwarzanie

Próbki krwi zostaną pobrane przez personel badawczy, oznaczone identyfikatorem uczestnika i opatrzone datą. Probówki Tempus zostaną energicznie wstrząśnięte natychmiast po pobraniu, zgodnie z zaleceniami producenta. Próbki do posiewu krwi i serologii HIV będą transportowane do Laboratoriów Centralnych w celu przetworzenia. Pozostałe próbki krwi zostaną przetransportowane do Instytutu Blizard, gdzie zostanie podana data i godzina otrzymania próbki oraz jej stan (np. nieskrzepnięte) zostaną odnotowane w dzienniku laboratoryjnym. Próbki do testu QFT-Plus będą inkubowane w temperaturze 37°C wkrótce po otrzymaniu próbek przez 18 godzin, przed odwirowaniem i aspiracją supernatantów, które będą przechowywane w temperaturze -80°C do czasu analizy stężenia IFN-gamma. Próbki krwi w probówkach Tempus będą przechowywane w temperaturze -80°C w oznaczonym stojaku do czasu transportu do Wydziału Zakażeń i Odporności University College London w celu ekstrakcji RNA i profilowania ekspresji genów. PBMC zostaną oddzielone od pozostałej próbki (100 ml), a następnie wyizolowane zostaną komórki CD34+ za pomocą sortowania za pomocą kulek magnetycznych. Czystość wyizolowanych komórek CD34+ zostanie sprawdzona za pomocą cytometrii przepływowej.