Évaluation d'un nouveau test de diagnostic microbiologique pour l'infection latente à Mycobacterium Tuberculosis (MICRO-LTBI)

Objectifs :

i) Déterminer si l'ADN de M. tuberculosis (Mtb) peut être détecté dans les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) CD34+ isolées de

• adultes asymptomatiques soumis à un dépistage de la LTBI (personnes dépistées pour la LTBI)
• adultes atteints de tuberculose active nouvellement diagnostiquée (cas actifs) ii) Déterminer si les souches de Mtb isolées de PBMC CD34+ de contacts familiaux récents de tuberculose sont génétiquement identiques à celles isolées des crachats de cas index atteints de tuberculose pulmonaire auxquels ils ont été exposés iii ) Caractériser les corrélats immunologiques, cliniques et épidémiologiques de la capacité à détecter Mtb dans les PBMC CD34+ dans une population hétérogène de patients IGRA-positifs et -personnes dépistées pour la LTBI négatives.

iv) Déterminer si la présence de l'ADN de Mtb dans les PBMC CD34+ des personnes dépistées pour l'ITL TLIG-positives est associée à la présence d'une signature transcriptionnelle du sang périphérique récemment rapportée pour prédire le risque de progression vers une tuberculose active. v) Évaluer le changement longitudinal dans les résultats du test PCR CD34+

- Personnes dépistées pour la LTBI suivant une chimioprophylaxie pour la LTBI

• Personnes dépistées pour la LTBI ne recevant pas de chimioprophylaxie
• Patients terminant un traitement contre une tuberculose active

4.1. Arrière-plan

La tuberculose (TB) est une maladie infectieuse causée par des organismes du complexe M. tuberculosis (MTBC). Le principal agent pathogène chez l'homme est M. tuberculosis (Mtb). La tuberculose affecte généralement les poumons et se transmet par l'inhalation de gouttelettes infectieuses expectorées par un patient atteint de tuberculose pulmonaire active. La tuberculose a été une cause majeure de morbidité et de mortalité tout au long de l’histoire de l’humanité. En Europe et en Amérique du Nord, une augmentation des cas de tuberculose aux XVIIe et XVIIIe siècles a été suivie d'un déclin rapide principalement attribué à l'amélioration des conditions socio-économiques, à l'application de mesures de santé publique et à l'isolement des patients tuberculeux.1 Vers la fin du XIXe siècle, après la tendance à la baisse des cas et des décès de tuberculose en Europe et en Amérique du Nord, deux événements majeurs, la découverte de Mtb et les rayons X, sont devenus essentiels dans le diagnostic et la prise en charge de la tuberculose.1 Par la suite, la vaccination avec le bacille M. bovis Calmette-Guérin (BCG) et le traitement antibiotique dans la première moitié du 20e siècle ont suscité l'optimisme mondial selon lequel le contrôle et l'élimination de la tuberculose étaient à portée de main. Cependant, la tuberculose reste à ce jour une menace sérieuse pour la santé publique et constitue la deuxième cause infectieuse de décès dans le monde. 2, 3 Selon le rapport de l'OMS de 2015, environ 9,6 millions de nouveaux cas de tuberculose (dont 12 % étaient co-infectés par le VIH) et 1,5 million de décès (dont 0,4 million parmi les personnes co-infectées par le VIH) sont survenus dans le monde en 2014.4 En outre, on estime qu’un tiers de la population mondiale souffre d’une infection latente à Mtb (LTBI), et environ 10 % d’entre eux développeront une tuberculose active au cours de leur vie.5

Bien que seuls 22 pays à revenu faible ou intermédiaire (PRFI) représentent 80 % du fardeau mondial, la tuberculose reste une maladie importante parmi les populations immigrées des pays à revenu élevé. Au Royaume-Uni (RU), les réductions de l'incidence de la tuberculose obtenues au 20e siècle se sont inversées avec une augmentation de 50 % des notifications de tuberculose entre 1998 et 2009.6 En 2013, un total de 7 892 cas de tuberculose équivalant à une incidence de 12,3 pour 100 000 habitants par an, la plus élevée parmi les pays à revenu élevé, ont été signalés.7 Une proportion élevée (37,8 %) des cas de tuberculose au Royaume-Uni se trouve à Londres, où le taux d'incidence de la tuberculose est de 35,5 pour 100 000 habitants par an ; les immigrants venus d'Inde (30 %), du Pakistan (20 %) et de Somalie (5 %) représentaient la majorité de ces cas.7

Actuellement, les stratégies clés de la lutte contre la tuberculose reposent sur un diagnostic précis et rapide de la maladie active ainsi que sur un traitement efficace pour interrompre la transmission. Cependant, le retard du diagnostic constitue un défi majeur qui facilite la transmission au sein des communautés.8 En général, il faut compter plusieurs mois entre l'apparition des symptômes et le début du traitement chez un patient tuberculeux. Par exemple, au Royaume-Uni, près d’un tiers des patients atteints de tuberculose pulmonaire commencent le traitement 4 mois après l’apparition des symptômes.7 Des délais aussi longs, associés au grand nombre de LTBI, suggèrent la nécessité d'interventions pour identifier et traiter les personnes atteintes de LTBI afin de parvenir à contrôler la tuberculose. Le traitement antimicrobien de la LTBI (chimioprophylaxie) est efficace pour réduire le risque de réactivation et est régulièrement mis en œuvre dans les contextes à revenus élevés et à faible incidence. Cependant, la mise en œuvre de cette politique, en particulier dans les contextes à forte charge, est entravée par l’absence de test de diagnostic permettant d’identifier le sous-ensemble d’individus sensibilisés au Mtb qui risquent de développer une tuberculose active et sur lesquels la chimioprophylaxie devrait être ciblée.

Actuellement, le diagnostic de LTBI repose sur la détection d'une réponse immunitaire adaptative à l'infection par Mtb, soit in vivo (en utilisant le test cutané à la tuberculine), soit ex vivo (en utilisant des tests de libération d'interféron gamma [IGRA]). Cette approche, qui ne détecte pas directement Mtb, est limitée dans la mesure où elle ne permet pas de distinguer les 10 % d'individus sensibilisés qui présentent un risque de réactivation (chez lesquels la chimioprophylaxie peut être bénéfique) des 90 % qui sont immunologiquement sensibilisés mais qui ne le font pas. évolution vers une maladie active (chez laquelle la chimioprophylaxie ne confère aucun bénéfice). Ce dernier groupe est potentiellement hétérogène : certains peuvent avoir éliminé l’infection, tandis que d’autres peuvent souffrir de la tuberculose-infection mais être capables de la contenir indéfiniment.9 Des outils permettant d’analyser ces phénotypes possibles pourraient permettre un ciblage plus précis de la chimioprophylaxie, mais ils font actuellement défaut. Dans cette étude, les enquêteurs examineront si Mtb peut être détecté dans les cellules CD34+ isolées du sang périphérique de a) adultes dépistés pour la LTBI (dépistés de LTBI) et b) adultes atteints de tuberculose active nouvellement diagnostiquée (cas actifs).

4.2. Justification de l'étude

Cette étude s'appuie sur une observation récente de l'un des co-chercheurs (Stephen Reece) qui faisait partie d'un groupe de l'Institut Max Planck de biologie des infections de Berlin, qui a détecté l'ADN de Mtb dans des cellules souches hématopoïétiques pluripotentes CD34+ repeuplant à long terme. (LTpHSC) isolés à partir de 100 ml de sang périphérique de sept adultes en bonne santé atteints de LTBI (TLIG positifs, tuberculose active exclue) ; L’ADN de Mtb n’a pas été détecté dans les LTpHSC de sept adultes en bonne santé négatifs aux IGRA. 10 Si cette découverte remarquable peut être reproduite dans un autre contexte, elle pourrait conduire au développement d'un nouveau test microbiologique (« le test PCR CD34+ ») avec plusieurs applications potentielles :

a) identifier les individus infectés de manière latente par un Mtb résistant aux antibiotiques (permettant de sélectionner un schéma thérapeutique de chimioprophylaxie approprié), b) surveiller l'efficacité de la chimioprophylaxie et des interventions conçues pour prévenir l'acquisition de la LTBI, telles que les vaccins et les programmes de supplémentation en micronutriments, c ) pour suivre la propagation de souches particulières au sein d'une population (fournissant un outil d'intervention de santé publique), d) pour faire la distinction entre les individus sensibilisés au Mtb qui risquent de progresser vers une maladie active par rapport à ceux qui ne le sont pas, permettant de cibler la chimioprophylaxie sur les populations qui pourraient en bénéficier, et e) fournir de nouvelles informations sur l'immunobiologie de la LTBI et la pathogenèse de la tuberculose humaine.

4.3. Hypothèses

i) L'ADN de Mtb peut être détecté dans les PBMC CD34+ d'adultes asymptomatiques positifs pour les IGRA et de cas actifs de tuberculose au moment du diagnostic, mais pas chez les adultes négatifs pour les IGRA.

ii) Les souches de Mtb isolées des PBMC CD34+ de contacts tuberculeux asymptomatiques TLIG-positifs seront génétiquement identiques à celles isolées des crachats des cas index de tuberculose pulmonaire auxquels ils ont été récemment exposés.

iii) Capacité à détecter l'ADN de Mtb dans les PBMC CD34+ des personnes dépistées pour la LTBI associées aux résultats des TLIG ainsi que les facteurs de risque cliniques et épidémiologiques reconnus pour la LTBI iv) Capacité à détecter l'ADN de Mtb dans les PBMC CD34+ des personnes dépistées pour la LTBI s'associant aux signatures transcriptomiques du sang périphérique précédemment défini comme étant associé à la progression vers une tuberculose active v) Le traitement antimicrobien est efficace pour éliminer la tuberculose de PBMC CD34+ isolées chez des personnes atteintes de LTBI ou de tuberculose active chez lesquelles elles étaient détectables au départ ; et que les résultats du test PCR CD34+ sont reproductibles lors de la répétition chez les personnes dépistées pour la LTBI qui n'ont pas reçu de chimioprophylaxie

5. Objectifs

5.1. Objectif principal

Déterminer si l'ADN de M. tuberculosis (Mtb) peut être détecté dans les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) CD34+ isolées de

• adultes asymptomatiques subissant un dépistage systématique de la LTBI (personnes dépistées pour la LTBI)
• adultes atteints de tuberculose active nouvellement diagnostiquée (cas actifs)

5.2. Objectifs secondaires

• Déterminer si les souches de Mtb isolées des PBMC CD34+ de contacts tuberculeux sont génétiquement identiques à celles isolées des crachats des cas index atteints de tuberculose pulmonaire auxquels ils ont été exposés.
• Caractériser les corrélats immunologiques, cliniques et épidémiologiques de la capacité à détecter Mtb dans les PBMC CD34+ dans une population hétérogène de personnes dépistées pour la LTBI TLIG-positives et négatives.
• Déterminer si la présence de l'ADN de Mtb dans les PBMC CD34+ des personnes dépistées positives pour les IGRA est associée à la présence d'une signature transcriptionnelle du sang périphérique récemment rapportée pour prédire le risque de progression vers une tuberculose active11.
• Évaluer le changement longitudinal dans les résultats du test PCR CD34+
• Personnes dépistées pour la LTBI suivant une chimioprophylaxie pour la LTBI
• Personnes dépistées pour la LTBI ne recevant pas de chimioprophylaxie
• patients terminant un traitement contre la tuberculose active

Conception de l'étude et visites d'étude

Les enquêteurs mèneront une étude longitudinale. Deux groupes de participants seront recrutés : adultes dépistés pour la LTBI (dépistés pour la LTBI) et patients sur le point de commencer un traitement contre la tuberculose active (cas actifs). Les personnes dépistées pour la LTBI sont celles qui font l'objet d'un dépistage de la LTBI dans le cadre des soins standard : ils comprennent les contacts récents d'un cas index de tuberculose infectieuse, les nouveaux arrivants en provenance de pays à forte charge de tuberculose, les agents de santé subissant un dépistage de médecine du travail et les patients qui sont sur le point de suivre un traitement immunosuppresseur. . Les patients atteints de tuberculose active sont ceux chez qui on a diagnostiqué une tuberculose active et qui sont sur le point de commencer un traitement antituberculeux.

Au départ (visite 1), les participants qui remplissent les critères d'inclusion et donnent leur consentement éclairé écrit pour participer à l'étude seront invités à fournir des informations sociodémographiques, y compris des détails sur l'âge, le sexe et l'origine ethnique, ainsi que des détails sur les antécédents d'exposition à la tuberculose (y compris l'exposition spécifique aux participants atteints de tuberculose active inscrits à l'étude) et d'autres données cliniquement pertinentes, qui seront toutes enregistrées sur un formulaire de rapport de cas (CRF). Un test sérologique VIH sera réalisé si cela n’est pas déjà fait dans le cadre des soins de routine. Un échantillon de sang de 120 ml (117 ml si le test VIH est déjà effectué dans le cadre des soins de routine) sera prélevé pour l'IGRA (QFT-Plus), l'hémoculture pour Mtb, l'analyse de la signature du risque du transcriptome du sang périphérique et le test PCR CD34+ pour l'ADN de Mtb. au départ. Les participants TLIG-positifs chez qui la tuberculose active a été exclue à l'aide d'une évaluation clinique et d'une radiographie pulmonaire (faisant partie des soins standard) se verront proposer un traitement de 3 mois par chimioprophylaxie à la rifampicine et à l'isoniazide s'ils remplissent les critères de cette thérapie (fait également partie des soins standard). soins).12

La communication des résultats positifs du test VIH sera traitée conformément aux recommandations des lignes directrices nationales britanniques pour le dépistage du VIH 2008. Les résultats positifs du test VIH seront communiqués lors d'un entretien en face-à-face avec un médecin de l'étude, en présence d'une infirmière de la clinique Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) (le service local du VIH). Les participants dont le test est séropositif seront référés à la clinique GUM la plus proche pour confirmation de leurs résultats et prise en charge ultérieure, le cas échéant.

À 3 mois (visite 2), les détails de la prescription et du respect de la chimioprophylaxie seront enregistrés, et un deuxième échantillon de sang (117 ml) sera prélevé pour répéter l'IGRA (QFT-Plus), l'hémoculture et le test PCR CD34+. Pour les participants ayant suivi une chimioprophylaxie, un tube Tempus sera également prélevé lors de la visite 2.

Au départ (visite 1), les participants qui remplissent les critères d'inclusion et donnent leur consentement éclairé écrit pour participer à l'étude seront invités à fournir des informations sociodémographiques de base, y compris des détails sur l'âge, le sexe et l'origine ethnique ainsi que la durée de leurs symptômes, les contacts avec tout personne inscrite au dépistage de la LTBI et d'autres données cliniquement pertinentes, qui seront toutes enregistrées sur un CRF. La sérologie du VIH, la formule sanguine complète, l'examen microscopique des frottis d'expectoration et la détection de M.tuberculosis sont effectués dans le cadre des soins de routine dans ce groupe de patients. Un échantillon de sang de 114 ml sera collecté pour l'IGRA (QFT-Plus), l'hémoculture pour Mtb et le test PCR CD34+ pour l'ADN de Mtb au départ. Les patients tuberculeux seront traités pour une maladie active conformément aux directives britanniques. 12

Une fois la chimiothérapie terminée (visite 2, généralement à 6 mois), les détails de la prescription et de l'observance du traitement antituberculeux seront enregistrés et un deuxième échantillon de sang (114 ml) sera prélevé pour les IGRA (QFT-Plus), l'hémoculture. pour Mtb et le test PCR CD34+.

Procédures d'étude

Procédures d’invitation et de consentement éclairé

Invitation

À Londres, le dépistage de la LTBI à l'aide d'un TLIG est généralement effectué dans quatre groupes : les contacts récents de patients tuberculeux actifs ; les nouveaux arrivants en provenance de pays à forte prévalence de tuberculose ; les patients qui sont sur le point de commencer un traitement immunosuppresseur ; et les agents de santé subissant un examen de santé au travail. Les groupes à risque de LTBI peuvent initialement être identifiés dans différents contextes (clinique antituberculeuse, soins primaires, cliniques de rhumatologie, services de santé au travail), mais ils sont tous orientés soit vers une clinique antituberculeuse (contacts, nouveaux arrivants, patients sur le point de commencer un traitement immunosuppresseur). ) ou à la Clinique de Santé au Travail (agents de santé subissant un dépistage de santé au travail) pour qu'un dépistage de la LTBI soit effectué. Les personnes potentiellement éligibles au dépistage de la LTBI seront donc identifiées et recrutées pour l'étude dans les cliniques antituberculeuses ou à la clinique de santé au travail. Les patients atteints de tuberculose active seront identifiés et recrutés dans les cliniques antituberculeuses Barts Health NHS Trust.

Les personnes potentiellement éligibles seront informées de l'étude par des infirmières ou des médecins travaillant dans des cliniques antituberculeuses ou des cliniques de santé au travail, qui effectuent un dépistage de la tuberculose dans le cadre des soins cliniques habituels. Ceux qui expriment un intérêt pour l'étude recevront une fiche d'information du participant par un membre de l'équipe de soins cliniques. Celui-ci expliquera les objectifs, les méthodes, les avantages attendus et les dangers potentiels de l'étude, et sera présenté dans un langage non technique, soit en anglais, soit dans d'autres langues si nécessaire. Il sera demandé aux personnes prenant une fiche d'information du participant de remplir une « fiche de contact » fournissant leurs coordonnées et autorisant l'équipe de recherche à prendre contact avec eux une fois qu'ils auront eu l'occasion de lire les informations ; ce « Contact Slip » sera transmis à l'équipe de recherche par l'équipe de soins habituelle du participant.

Procédures de consentement éclairé

Le consentement éclairé sera effectué conformément aux procédures opérationnelles standard de JRMO. Le consentement éclairé sera recueilli dans une salle privée par du personnel ayant reçu une formation spécifique aux bonnes pratiques cliniques et à la prise du consentement éclairé, qui peut être des médecins, des infirmiers ou des assistants de recherche. Au cours du processus de consentement, les participants seront informés que la participation est volontaire et qu'ils peuvent refuser de participer à l'étude ou se retirer à tout moment pendant le suivi, pour quelque raison que ce soit.

Les participants seront invités à indiquer leur consentement à participer en signant et en imprimant leur nom. Un témoin impartial devra contresigner le consentement pour ceux qui ont besoin d'un interprète pendant le processus de consentement. Les participants seront financièrement compensés pour les frais de déplacement associés à chaque visite.

Modalités d'inscription et de suivi

Recrutement au départ

Les participants potentiels seront évalués pour leur éligibilité sur la base des critères d'inclusion et d'exclusion énoncés ci-dessus. Suite au processus de consentement et après qu'un participant ait donné son consentement éclairé écrit pour participer, un numéro d'identification unique sera attribué. L'évaluation de l'éligibilité à participer sera effectuée par du personnel dûment formé qui peut être des médecins, des infirmières ou des assistants de recherche.

Procédure de collecte de données

À l'aide d'un CRF, lors de la visite 1 (V1), tous les participants seront invités à fournir des informations sociodémographiques et leurs antécédents médicaux, y compris leurs antécédents médicamenteux. Il sera demandé aux personnes dépistées pour la LTBI de fournir des détails sur leur exposition récente et antérieure à des patients tuberculeux, leurs antécédents de tuberculose et d'autres déterminants potentiels de la LTBI, tels que la proximité physique avec des patients tuberculeux actifs, la durée quotidienne moyenne d'exposition ainsi que la durée totale de l'exposition aux cas index. . Les CRF comprendront également les données suivantes : liste de contrôle des critères d'éligibilité, résultats des examens cliniques de base et des tests de laboratoire, et informations collectées au cours du suivi, y compris les détails du retrait, le cas échéant. Les membres de l'équipe de projet chargés de réaliser les CRF, qui peuvent être des chercheurs ou des agents de terrain, seront répertoriés dans un journal de délégation.

Collecte d’échantillons de base et évaluations en laboratoire

Des échantillons seront collectés comme détaillé dans la figure 1 et dans les tableaux 1 et 2, et des analyses en laboratoire seront effectuées comme détaillé dans les tableaux 3 et 4. Lorsque les tests sont effectués dans le cadre des soins de routine (par ex. formule sanguine complète pour les patients atteints de tuberculose active, sérologie VIH pour les patients atteints de tuberculose active et les personnes dépistées pour la LTBI TLIG-positives), les résultats seront accessibles via le CRS et documentés sur le CRF. Les personnes dépistées pour la LTBI et les participants non exposés se verront proposer un test de dépistage du VIH lors de la visite 1.

Pour déterminer si les souches de Mtb isolées des PBMC CD34+ de contacts tuberculeux correspondent à celles isolées des crachats des cas index auxquels ils ont été exposés, des échantillons d'expectorations seront collectés auprès de 10 patients tuberculeux actifs index qui ont des contacts positifs au test PCR CD34+ inscrits dans l'étude, et une analyse de séquençage du génome entier sera effectuée sur des isolats cultivés à partir de ces échantillons. Sur la base de cette analyse, des amorces permettant de créer des bibliothèques d'amplicons Mtb seront conçues à l'aide d'approches bioinformatiques pour capturer la diversité des souches. Ces amorces seront ensuite utilisées pour générer des bibliothèques d'amplicons Mtb à partir de cellules CD34+ hébergeant l'ADN génomique de Mtb isolé de contacts tuberculeux. Ces bibliothèques seront ensuite séquencées et comparées au génome Mtb du cas index pour déterminer si les souches isolées des cas index et des contacts correspondent.

Les participants dont les tests VIH/TLIG sont positifs seront référés respectivement aux cliniques VIH/TB pour une évaluation plus approfondie. Lorsque des tests de dépistage du VIH et des TLIG ont été effectués à des fins de recherche (c.-à-d. lorsqu'ils ne font pas partie des soins de routine), le personnel de recherche communiquera ces résultats aux participants dès qu'ils seront disponibles.

Procédures de suivi

• Personnes dépistées pour la LTBI : les visites et les évaluations de suivi sont détaillées dans la figure 1, le tableau 1 et le tableau 3. Les participants assisteront à la visite 2 à 3 mois (visite 2, V2). Les participants qui ont terminé la chimioprophylaxie subiront une évaluation clinique de routine à la fin de leur traitement. Ceux qui ne prennent pas de chimioprophylaxie seront également suivis 3 mois après V1. En plus de remplir un CRF détaillant les symptômes de la tuberculose active (tous les participants) et l'observance de la chimioprophylaxie (ceux recevant la chimioprophylaxie), un échantillon de sang de 117 ml sera collecté pour une analyse immunologique et moléculaire comme détaillé dans la section 13.3 ci-dessous. À la fin de la deuxième visite, la participation à l'étude prendra fin.
• Patients atteints de tuberculose active : les visites et le suivi sont détaillés dans la figure 1, le tableau 2 et le tableau 4. Les participants prenant un traitement antituberculeux subiront une évaluation clinique de routine à la fin de leur traitement et un deuxième échantillon de sang de 114 ml sera prélevé pendant cette visite pour analyse immunologique et moléculaire comme détaillé dans la section 13.3 ci-dessous. À la fin de la deuxième visite, la participation à l'étude prendra fin.

Les résultats du test CD34+ PCR ne seront pas utilisés pour guider la prise en charge clinique, car ce test est un outil de recherche dans les premières phases de développement et ses résultats n'ont été corrélés à aucun résultat clinique.

Retrait des participants

Les participants seront retirés s'ils retirent leur consentement à participer ou s'il est conclu que le retrait est dans le meilleur intérêt du participant. Les participants seront également considérés comme s'étant retirés s'ils ne se présentent pas à leur deuxième visite d'étude prévue malgré des rappels écrits et téléphoniques. Si un participant se retire de l'étude, la raison du retrait sera enregistrée dans le CRF.

Les données collectées jusqu'au moment du retrait seront incluses dans les analyses de l'étude, sauf demande contraire d'un participant. Tous les échantillons cliniques prélevés avant le retrait d'un participant seront utilisés pour les analyses de l'étude.

Définition de fin d’études

L'étude se terminera lorsque toutes les évaluations cliniques et de laboratoire seront terminées pour tous les participants participant au suivi.

9. Considérations statistiques

9.1 Taille de l'échantillon

L'objectif principal de cette étude est de valider et d'étendre les résultats d'un autre contexte dans lequel l'ADN génomique de Mtb a été détecté dans des cellules CD34+ isolées du sang périphérique de sept adultes asymptomatiques TLIG-positifs.10 Pour atteindre cet objectif, un total de 100 personnes dépistées pour la LTBI seront recrutées pour l'étude transversale (20 participants par variable indépendante à tester dans l'analyse de régression). Il est prévu qu'environ cinquante de ces participants seront TLIG-positifs, dont une quarantaine se verront prescrire une chimioprophylaxie : le suivi de 25 de ces participants donnera une puissance > 80 % au niveau de signification de 5 % pour démontrer une réduction du proportion d’individus CD34+ PCR-positifs de 80 % au départ à 30 % au suivi.

10. Considérations éthiques

Avant le début de l'étude, l'approbation sera demandée auprès du NHS REC pour le protocole d'étude, les formulaires de consentement éclairé et autres documents pertinents. L'étude ne commencera pas tant que les approbations nécessaires n'auront pas été obtenues du comité d'éthique et qu'un « feu vert » n'aura pas été donné pour activer les sites par le sponsor. L'IC veillera à ce que cette étude soit menée conformément à la Déclaration d'Helsinki (2013) et aux principes éthiques du Cadre de gouvernance de la recherche pour la santé et les services sociaux, deuxième édition, 2005 et ses modifications ultérieures. Il appartient au promoteur de décider si un amendement constitue une modification mineure ou substantielle. Les amendements substantiels qui nécessitent un examen par la CER ne seront pas mis en œuvre tant qu'ils n'auront pas été approuvés par l'organisme compétent. Toute correspondance avec le sponsor et le REC sera conservée dans le dossier principal de l'étude. Le CI informera le REC et le sponsor à la fin de l'étude.

Le consentement éclairé écrit sera obtenu des participants par une personne dûment formée (qui peut être un médecin, une infirmière ou un assistant de recherche) avant de participer à cette étude. Des fiches d'information seront mises à disposition en anglais et dans d'autres langues si nécessaire. Les participants potentiels recevront la fiche d'information et les objectifs, les méthodes, les avantages attendus et les dangers potentiels de l'étude seront expliqués. Au cours du processus de consentement, il sera expliqué aux participants que la participation est volontaire et qu'ils peuvent refuser de participer à l'étude ou se retirer à tout moment pendant le suivi, pour quelque raison que ce soit.

Conflit d'intérêt

Aucun intérêt financier ou autre intérêt concurrent n'a été identifié pour l'IC ou tout co-investigateur.

11. Considérations de sécurité

Étant donné que l'étude est observationnelle, le risque d'événements indésirables liés à l'étude est négligeable. Cependant, tout événement indésirable jugé lié à l'étude sera signalé au promoteur dans les 24 heures. Le volume de sang à collecter (jusqu'à 120 ml) peut être perçu comme important par certains participants, mais les adultes qui donnent du sang en donnent généralement 500 ml à la fois sans souffrir d'anémie. Les enquêteurs n'anticipent donc aucun événement indésirable lié au prélèvement de ce volume de sang. Les informations concernant le volume de l'échantillon de sang et si cela aura des conséquences indésirables sur la santé seront expliquées aux participants dans la fiche d'information. Tous les patients tuberculeux seront dépistés pour l'anémie dans le cadre de leurs soins cliniques habituels et ceux dont le taux d'hémoglobine est inférieur à 10 g/dl à l'entrée seront exclus. De plus, les mesures suivantes seront prises pour minimiser les inconvénients, l'inconfort et les risques potentiels que les participants pourraient rencontrer au cours de cette étude :

- recours à du personnel dûment formé pour effectuer la phlébotomie

12. Traitement des données et tenue des dossiers

12.1. Confidentialité

Les informations de santé protégées (PHI) nécessaires à la conduite et à l'analyse de l'étude seront collectées pour tous les participants sélectionnés pour l'étude ; ces informations comprendront le nom, la date de naissance, le sexe, l'adresse, le numéro de téléphone, le numéro de dossier médical le cas échéant, l'adresse e-mail le cas échéant et l'origine ethnique de chaque participant. Le personnel de l'étude ayant besoin d'accéder aux PHI afin de mener ou d'analyser l'étude sera répertorié sur un journal de délégation. Les PHI resteront confidentielles et seront traitées, traitées, stockées et détruites conformément à la loi sur la protection des données de 1998. Les participants conserveront le droit de révoquer leur autorisation d'utilisation de leurs PHI à tout moment pendant l'étude. Tous les participants seront anonymisés dans les publications découlant de cette étude. Les données seront pseudo-anonymisées comme suit. Les PHI seront conservés dans une base de données sécurisée liée à un code d’identification unique. Les informations cliniques seront conservées dans une base de données sécurisée distincte, liée au même code d'identification unique. L'IC et les co-investigateurs auront accès à l'ensemble de données final pseudo-anonymisé de l'étude.

Au cours de la recherche, tous les dossiers relèveront de la responsabilité du CI et seront conservés dans des conditions sécurisées. Une fois l'étude terminée, le promoteur exige que les dossiers et les données soient conservés pendant 20 ans supplémentaires. L'IC agira en tant que « dépositaire » des données de recherche. L'accès aux PHI sera limité au nombre minimum de personnes nécessaire à la conduite de l'étude, au contrôle qualité, à l'audit et à l'analyse. Les éléments suivants comprendront les documents sources : journaux de dépistage, consentement éclairé et CRF papier. Tous les documents sources seront conservés en toute sécurité dans des classeurs verrouillés. Le transfert et le transport des données seront effectués conformément à la loi britannique sur la protection des données de 1998. Les informations permettant d'identifier une personne ne seront pas stockées, transportées ou envoyées vers ou depuis un appareil portable à moins que cet appareil ne soit crypté.

12.2. Collecte, enregistrement et traitement des données

Les formulaires de consentement signés et les documents papier contenant les données sources seront stockés en toute sécurité. Les données de l'étude seront saisies dans une base de données dans le logiciel EpiData Entry. Le personnel recevra une formation appropriée pour utiliser la base de données pour la saisie des données. Les données du laboratoire seront saisies dans la base de données.

L'IC et les co-investigateurs auront accès aux données de l'étude pendant l'étude. Le personnel de l'étude qui a besoin d'un tel accès pour mener l'étude se verra également accorder l'accès nécessaire. L'accès aux données de l'étude pendant l'étude sera également accordé aux représentants autorisés du promoteur, de l'établissement hôte et des autorités de réglementation, selon les besoins.

12.3. Contrôle qualité et assurance qualité

La documentation de l'étude sera mise à la disposition des représentants du promoteur et du REC pour le contrôle qualité et l'assurance qualité, sur demande.

13. Laboratoires

13.1. Collecte, étiquetage et traitement des échantillons

Des échantillons de sang seront prélevés par le personnel de l'étude, étiquetés avec l'identifiant du participant et datés. Les tubes Tempus seront vigoureusement agités immédiatement après le prélèvement selon les recommandations du fabricant. Les échantillons destinés à l'hémoculture et à la sérologie du VIH seront transportés vers les laboratoires centraux pour traitement. Les échantillons de sang restants seront transportés au Blizard Institute, où la date et l'heure de réception de l'échantillon ainsi que l'état de l'échantillon (par ex. non coagulé) sera enregistré dans un journal de laboratoire. Les échantillons pour le test QFT-Plus seront incubés à 37 °C peu de temps après la réception des échantillons pendant 18 heures, avant la centrifugation et l'aspiration des surnageants qui seront conservés à -80 °C en attendant l'analyse de la concentration en IFN-gamma. Les échantillons de sang dans les tubes Tempus seront conservés à -80 °C dans un portoir étiqueté en attendant leur transport vers la Division des infections et de l'immunité de l'University College de Londres pour l'extraction de l'ARN et le profilage de l'expression génique. Les PBMC seront séparées de l'échantillon restant (100 ml), avec isolement ultérieur des cellules CD34+ par tri par billes magnétiques. La pureté des cellules CD34+ isolées sera vérifiée par cytométrie en flux.