A látens mycobacterium tuberculosis fertőzés új mikrobiológiai diagnosztikai tesztjének értékelése (MICRO-LTBI)

Célok:

i) Annak megállapítása, hogy a M. tuberculosis (Mtb) DNS kimutatható-e olyan CD34+ perifériás vér mononukleáris sejtekben (PBMC)

• tünetmentes felnőttek LTBI-szűrésen (LTBI-szűrések)
• újonnan diagnosztizált aktív tuberkulózisban szenvedő felnőttek (aktív esetek) ii) Annak megállapítása, hogy a közelmúltban háztartási tbc-vel érintkezett CD34+ PBMC-ből izolált Mtb törzsek genetikailag azonosak-e azokkal az indexes tüdőtbc-es esetek köpetéből izolált törzsekkel, amelyeknek ki voltak téve iii. ) A CD34+ PBMC-ben lévő Mtb kimutatási képességének immunológiai, klinikai és epidemiológiai összefüggéseinek jellemzése IGRA-pozitív és -negatív LTBI-szűrések heterogén populációja.

iv) Annak megállapítása, hogy az Mtb DNS jelenléte az IGRA-pozitív LTBI szűrések CD34+ PBMC-jében összefüggésben van-e a perifériás vér transzkripciós aláírásával, amelyről nemrégiben jelentették, hogy előre jelezze az aktív TB-vé való progresszió kockázatát. v) A CD34+ PCR vizsgálati eredmények longitudinális változásának értékelése

- Az LTBI szűri az LTBI kemoprofilaxisának befejezését

• A kemoprofilaxisban nem részesülő LTBI-szűrések
• Az aktív tuberkulózis kezelését befejező betegek

4.1. Háttér

A tuberkulózis (TB) az M. tuberculosis komplex (MTBC) szervezetei által okozott fertőző betegség. Az elsődleges kórokozó emberben a M.tuberculosis (Mtb). A tbc általában a tüdőt érinti, és az aktív tüdőtbc-ben szenvedő beteg által köpött fertőző cseppek belélegzésével terjed. A tuberkulózis az emberiség történelme során a megbetegedések és halálozások egyik fő oka. Európában és Észak-Amerikában a tbc-s esetek 17. és 18. századi megugrását gyors csökkenés követte, ami elsősorban a javuló társadalmi-gazdasági feltételeknek, a közegészségügyi intézkedések alkalmazásának és a tbc-s betegek izolációjának tulajdonítható.1 A 19. század vége felé az európai és észak-amerikai tbc-s esetek és halálozások csökkenő tendenciája után két jelentős esemény, az Mtb és a röntgen felfedezése kulcsfontosságúvá vált a tbc diagnosztizálásában és kezelésében. TB.1 Ezt követően a 20. század első felében a M. bovis Calmette-Guérin bacillával (BCG) végzett vakcinázás és az antibiotikumos kezelés globális optimizmushoz vezetett, miszerint a tbc ellenőrzése és megszüntetése elérhető közelségben van. A tuberkulózis azonban a mai napig komoly közegészségügyi fenyegetést jelent, és világszerte a második vezető fertőző halálok. 2, 3 A WHO 2015-ös jelentése szerint 2014-ben a becslések szerint 9,6 millió új tbc-s eset (amelyek 12%-a HIV társfertőzött volt) és 1,5 millió haláleset (ebből 0,4 millió HIV-fertőzöttek között volt) történt világszerte.4 Ezenkívül a becslések szerint a világ népességének egyharmada szenved látens Mtb-fertőzésben (LTBI), akiknek körülbelül 10%-ánál alakul ki aktív tbc élete során.5

Bár csak 22 alacsony vagy közepes jövedelmű ország (LMIC) teszi ki a globális terhek 80%-át, a tbc még mindig fontos betegség a magas jövedelmű országok bevándorlói körében. Az Egyesült Királyságban (Egyesült Királyság) a tbc előfordulásának a 20. században elért csökkenése megfordult: 1998 és 2009 között 50%-kal nőtt a TB-értesítések száma.6 2013-ban összesen 7892 tbc-s esetet jelentettek, ami évi 12,3-nak felel meg 100 000 lakosra vetítve, ami a legmagasabb a magas jövedelmű országok között.7 Az Egyesült Királyságban a tbc-s esetek magas aránya (37,8%) Londonban található, ahol a tbc előfordulási aránya 35,5/100 000 lakos évente; Az indiai (30%), pakisztáni (20%) és szomáliai (5%) bevándorlók tették ki az esetek többségét.7

Jelenleg a tuberkulózis elleni védekezés kulcsfontosságú stratégiája az aktív betegség pontos és gyors diagnosztizálása, valamint az átvitel megszakítására szolgáló hatékony kezelés. A késleltetett diagnózis azonban nagy kihívást jelent, amely megkönnyíti a közösségekben a terjedést.8 Általában több hónap is eltelhet a tünetek megjelenésétől a tbc-s beteg kezelésének megkezdéséig. Például az Egyesült Királyságban a tüdő-tbc-s betegek közel egyharmada a tünetek megjelenése után 4 hónappal kezdi meg a kezelést.7 Az ilyen hosszú késések, valamint az LTBI nagy készlete azt sugallja, hogy beavatkozásokra van szükség az LTBI-ben szenvedő egyének azonosítása és kezelése érdekében a TB kontroll elérése érdekében. Az LTBI antimikrobiális kezelése (kemoprofilaxis) hatékonyan csökkenti a reaktiváció kockázatát, és rutinszerűen alkalmazzák magas jövedelmű, alacsony előfordulási gyakoriságú környezetben. Ennek az irányelvnek a végrehajtását azonban – különösen a nagy terhelésű körülmények között – hátráltatja, hogy nincs olyan diagnosztikai teszt, amely azonosítaná az Mtb-érzékeny személyek azon alcsoportját, akiknél fennáll az aktív tbc kialakulásának kockázata, és akiket meg kell célozni a kemoprofilaxissal.

Jelenleg az LTBI diagnózisa az Mtb fertőzésre adott adaptív immunválasz kimutatásával történik, akár in vivo (tuberkulin-bőrteszt segítségével), akár ex vivo (interferon-gamma felszabadulási tesztek [IGRA-k] segítségével). Ez a megközelítés, amely nem detektálja közvetlenül az Mtb-t, korlátozott abban, hogy nem tudja megkülönböztetni az érzékeny személyek 10%-át, akiknél fennáll a reaktiváció veszélye (akiknél a kemoprofilaxis előnyös lehet) az immunológiailag szenzitizált, de nem szenzitizált egyének 90%-ától. aktív betegséggé fejlődik (akiknél a kemoprofilaxis nem jár előnyökkel). Ez utóbbi csoport potenciálisan heterogén: egyesek megszüntették a fertőzést, míg másoknak LTBI-ja van, de korlátlan ideig képesek megfékezni.9 E lehetséges fenotípusok feltárására szolgáló eszközök lehetővé tennék a kemoprofilaxis pontosabb célzását, de ezek jelenleg hiányoznak. Ebben a vizsgálatban a kutatók azt vizsgálják, hogy az Mtb kimutatható-e a) LTBI-szűrés alatt álló felnőttek (LTBI-szűrések), és b) újonnan diagnosztizált aktív tbc-s felnőttek (aktív esetek) perifériás véréből izolált CD34+ sejtekben.

4.2. A tanulmány indoklása

Ez a tanulmány az egyik kutatótárs (Stephen Reece) közelmúltbeli megfigyelésén alapul, aki a berlini Max Planck Infection Biology Intézet egy csoportjának tagja volt, akik Mtb DNS-t mutattak ki CD34+ hosszú távú újratelepülő, pluripotens vérképző őssejtekben. (LTpHSC-k), amelyeket hét egészséges felnőtt LTBI-s (pozitív IGRA, aktív tbc kizárva); Mtb DNS-t nem mutattak ki hét IGRA-negatív egészséges felnőtt LTpHSC-jében. 10 Ha ez a figyelemre méltó eredmény megismételhető egy másik környezetben, az egy új mikrobiológiai teszt (a CD34+ PCR vizsgálat) kifejlesztéséhez vezethet, amely számos lehetséges alkalmazást tartalmaz:

a) az antibiotikum-rezisztens Mtb-vel látensen fertőzött egyének azonosítása (lehetővé teszi a megfelelő kemoprofilaxis kiválasztását), b) a kemoprofilaxis és az LTBI megszerzését megakadályozó beavatkozások hatékonyságának monitorozása, például vakcinák és mikrotápanyag-kiegészítő programok, c) ) nyomon követni bizonyos törzsek populáción keresztüli terjedését (eszközt biztosítva a közegészségügyi beavatkozáshoz), d) megkülönböztetni Mtb-szenzitizált egyének, akiknél fennáll az aktív betegség progressziójának kockázata, szemben azokkal, akik nem, lehetővé téve a kemoprofilaxis célzott populációit, amelyek számára előnyös lehet, és e) új betekintést nyújtani az LTBI immunbiológiájába és az emberi patogenezisbe tuberkulózis.

4.3. Hipotézisek

i) Az Mtb DNS kimutatható a tünetmentes IGRA-pozitív felnőttek CD34+ PBMC-jében és a diagnóziskor aktív tbc esetekben, de az IGRA-negatív felnőttekben nem.

ii) A tünetmentes IGRA-pozitív tbc-s betegek CD34+ PBMC-jéből izolált Mtb törzsek genetikailag azonosak lesznek azokkal a tüdőtbc-s esetek köpetéből izolált törzsekkel, amelyeknek nemrégiben voltak kitéve.

iii) Az Mtb DNS kimutatásának képessége LTBI-szűrt személyek CD34+ PBMC-jében az IGRA eredményekkel, valamint az LTBI elismert klinikai és epidemiológiai kockázati tényezőivel jár együtt korábban úgy határozták meg, hogy összefüggésbe hozható az aktív TB-vé való progresszióval v) Az antimikrobiális terápia hatékony Mtb eliminálásában olyan LTBI-s vagy aktív TB-s egyénekből izolált CD34+ PBMC-ből, akiknél a kiinduláskor kimutatható volt; és hogy a CD34+ PCR vizsgálat eredményei ismételten reprodukálhatók olyan LTBI-szűrt személyeknél, akik nem részesültek kemoprofilaxisban

5. Célok

5.1. Elsődleges cél

Annak megállapítására, hogy az M. tuberculosis (Mtb) DNS kimutatható-e a CD34+ perifériás vér mononukleáris sejtjeiben (PBMC)

• tünetmentes felnőttek, akik rutin LTBI-szűrésen esnek át (LTBI-szűrések)
• újonnan diagnosztizált aktív tuberkulózisban szenvedő felnőttek (aktív esetek)

5.2. Másodlagos célok

• Annak megállapítása, hogy a tbc kontaktusok CD34+ PBMC-jéből izolált Mtb törzsek genetikailag azonosak-e azokkal az indexes esetek köpetéből izolált törzsekkel, amelyeknek ki voltak téve.
• Az IGRA-pozitív és -negatív LTBI szűrések heterogén populációjában a CD34+ PBMC-ben lévő Mtb kimutatási képességének immunológiai, klinikai és epidemiológiai összefüggéseinek jellemzése.
• Annak megállapítására, hogy az Mtb DNS jelenléte az IGRA-pozitív szűrt személyek CD34+ PBMC-jében összefügg-e a perifériás vér transzkripciós aláírásának jelenlétével, amelyről a közelmúltban jelentették, hogy megjósolja az aktív TB11-be való progresszió kockázatát.
• A CD34+ PCR vizsgálat eredményeinek longitudinális változásának értékeléséhez
• Az LTBI szűri az LTBI kemoprofilaxisának befejezését
• A kemoprofilaxisban nem részesülő LTBI-szűrések
• aktív tbc-s kezelést befejező betegek

Tanulmánytervezés és tanulmányi látogatások

A kutatók longitudinális vizsgálatot fognak végezni. A résztvevők két csoportját toborozzák: az LTBI-szűrés alatt álló felnőtteket (LTBI-szűrések), valamint az aktív tbc-s kezelés megkezdése előtt álló betegeket (aktív esetek). Az LTBI-szűrések azok, akiket a standard ellátás részeként szűrnek LTBI-re: ide tartoznak a közelmúltban egy fertőző indexű tbc esettel kapcsolatba kerültek, a magas tbc-terheltségű országokból új belépők, foglalkozás-egészségügyi szűrésen áteső egészségügyi dolgozók és immunszuppresszív kezelés előtt álló betegek. . Az aktív tbc-s betegek azok, akiknél aktív tbc-t diagnosztizáltak, és hamarosan elkezdik az anti-TB kezelést.

Kiinduláskor (1. látogatás) azokat a résztvevőket, akik megfelelnek a felvételi kritériumoknak, és írásos beleegyező nyilatkozatot adtak a vizsgálatban való részvételhez, felkérik, hogy adjanak meg szociodemográfiai adatokat, ideértve az életkor, a nem és az etnikai származás részleteit, valamint a tuberkulózis expozíciós előzményeinek részleteit (beleértve a konkrét expozíciót is). a vizsgálatba bevont aktív tbc-s résztvevőknek) és egyéb klinikailag releváns adatok, amelyek mindegyikét egy esetjelentési űrlapon (CRF) rögzítik. HIV-szerológiai tesztet végeznek, ha ezt még nem végzik el a rutin ellátás részeként. 120 ml-es (117 ml-es, ha a HIV-teszt a rutin ellátás részeként már megtörtént) vérmintát veszünk az IGRA-hoz (QFT-Plus), vértenyészetet az Mtb-hez, a perifériás vér transzkriptom kockázati aláírás elemzéséhez és a CD34+ PCR vizsgálathoz Mtb DNS-hez. alapvonalon. Azok az IGRA-pozitív résztvevők, akiknél az aktív tbc-t klinikai értékelés és mellkasröntgen (a standard ellátás része) kizárták, 3 hónapos rifampicin és izoniazid kemoprofilaxis kúrát kapnak, ha megfelelnek a terápia kritériumainak (szintén a standard része). ellátás).12

A pozitív HIV-teszt eredményeinek közlése az Egyesült Királyság 2008. évi Nemzeti HIV-tesztelési irányelveinek ajánlásai szerint történik. A pozitív HIV-teszt eredményeit személyes interjú során közöljük egy vizsgálati orvossal, a Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) klinikáján (a helyi HIV-szolgálat) dolgozó nővér jelenlétében. A HIV-pozitív tesztet végző résztvevőket a legközelebbi GUM-klinikájukra irányítják, hogy megerősítsék eredményeiket és szükség szerint további kezelést kapjanak.

3 hónap elteltével (2. látogatás) rögzítik a kemoprofilaxis felírásának és betartásának részleteit, és egy második vérmintát (117 ml) vesznek az ismételt IGRA (QFT-Plus), vértenyészet és CD34+ PCR vizsgálathoz. Azon résztvevők számára, akik kemoprofilaxist kaptak, a 2. látogatás alkalmával Tempus csövet is vesznek.

Kiinduláskor (1. látogatás) azokat a résztvevőket, akik megfelelnek a felvételi kritériumoknak, és írásos beleegyező nyilatkozatot adnak a vizsgálatban való részvételhez, meg kell adniuk alapvető szociodemográfiai információkat, beleértve az életkor, nem és etnikai származás részleteit, valamint tüneteik időtartamát, kapcsolattartásukat beiratkozott LTBI-szűrés és egyéb klinikailag releváns adatok, amelyek mindegyike CRF-en lesz rögzítve. Ebben a betegcsoportban a rutin ellátás részeként HIV-szerológiát, teljes vérképet és köpetkenet-mikroszkópos vizsgálatot végeznek, valamint M.tuberculosis kimetszését. Kiinduláskor 114 ml-es vérmintát veszünk az IGRA-hoz (QFT-Plus), az Mtb-hez vértenyészetet és a CD34+ PCR-tesztet az Mtb DNS-hez. A tbc-s betegeket az Egyesült Királyság irányelveinek megfelelően kezelik az aktív betegség miatt. 12

A kemoterápia befejezését követően (2. látogatás, általában 6 hónapos korban) rögzítik a tuberkulózisellenes kezelés felírásának és betartásának részleteit, és egy második vérmintát (114 ml) vesznek az IGRA (QFT-Plus) vértenyészethez. Mtb és CD34+ PCR vizsgálathoz.

Tanulmányi eljárások

Meghívási és tájékozott hozzájárulási eljárások

Meghívás

Londonban az LTBI-szűrést IGRA-val általában négy csoportban végzik: aktív tbc-s betegek közelmúltbeli kapcsolatai; új belépők a magas TB-terheltségű országokból; immunszuppresszív terápia megkezdése előtt álló betegek; valamint a foglalkozás-egészségügyi szűrővizsgálaton részt vevő egészségügyi dolgozók. Az LTBI kockázatának kitett csoportok kezdetben különböző helyszíneken azonosíthatók (tbc-klinika, alapellátás, reumatológiai klinikák, foglalkozás-egészségügyi szolgálatok), de mindegyiket vagy egy tbc-klinikára utalják (kapcsolattartók, új belépők, immunszuppresszív terápia megkezdése előtt álló betegek). ) vagy a Foglalkozás-egészségügyi Klinikára (foglalkozás-egészségügyi szűrővizsgálaton részt vevő egészségügyi dolgozók) LTBI szűrés elvégzésére. Ezért a potenciálisan jogosult LTBI-szűrt személyeket a TB-klinikán vagy a Foglalkozás-egészségügyi Klinikán azonosítják és toborozzák a vizsgálatba. Az aktív tbc-ben szenvedő betegeket a Barts Health NHS Trust TB Clinics azonosítja és toborozza.

A potenciálisan jogosult személyeket a tbc-klinikákon vagy foglalkozás-egészségügyi klinikákon dolgozó ápolónők vagy orvosok tájékoztatják a vizsgálatról, akik a szokásos klinikai ellátás részeként TB-szűrést végeznek. Azok, akik érdeklődésüket fejezik ki a vizsgálat iránt, a klinikai gondozási csoport egyik tagja egy résztvevői tájékoztatót kap. Ez elmagyarázza a tanulmány céljait, módszereit, várható előnyeit és lehetséges veszélyeit, és nem szaknyelven kerül bemutatásra, akár angolul, akár más nyelveken, ahol szükséges. A résztvevői tájékoztatót kitöltőket felkérik, hogy töltsenek ki egy „Kapcsolatfelvételi lapot”, amelyben megadják elérhetőségeiket, és felhatalmazzák a kutatócsoportot, hogy kapcsolatba léphessen velük, amint lehetőségük volt elolvasni az információkat; ezt a „Kapcsolattartó szelvényt” a résztvevő szokásos gondozási csoportja továbbítja a kutatócsoportnak.

Tájékozott hozzájárulási eljárások

A tájékoztatáson alapuló beleegyezés a JRMO szabványos működési eljárásai szerint történik. A tájékoztatáson alapuló beleegyezést egy zárt helyiségben a Jó Klinikai Gyakorlattal kapcsolatos speciális képzésben részesült és a tájékozott beleegyezés megszerzésében részesült személyzet veszi át, akik lehetnek orvosok, nővérek vagy kutatási asszisztensek. A hozzájárulási eljárás során a résztvevőket tájékoztatni kell arról, hogy a részvétel önkéntes, és a nyomon követés során bármikor, bármilyen okból megtagadhatják a vizsgálatba való belépést vagy kiléphetnek.

A résztvevők aláírásával és nevük kinyomtatásával jelezzék részvételi szándékukat. Pártatlan tanúnak kell ellenjegyeznie a hozzájárulást azoknak, akiknek tolmácsra van szükségük a hozzájárulási eljárás során. A résztvevők minden egyes látogatáshoz kapcsolódó utazási költségeit anyagilag kompenzálják.

Beiratkozási és nyomon követési eljárások

Toborzás alaphelyzetben

A potenciális résztvevők alkalmasságát a fent említett felvételi és kizárási kritériumok alapján értékelik. A hozzájárulási eljárást követően, és miután a résztvevő írásos beleegyezését adta a részvételhez, egyedi azonosítószám kerül hozzárendelésre. A részvételi jogosultság értékelését megfelelően képzett személyzet végzi, akik lehetnek orvosok, ápolók vagy kutatási asszisztensek.

Adatgyűjtési eljárás

CRF segítségével az 1. látogatáskor (V1) minden résztvevőtől szociodemográfiai információkat és kórtörténetet kell megadni, beleértve a gyógyszeres kezelést is. Az LTBI-szűrőket felkérik, hogy adjanak meg részleteket a tbc-s betegek közelmúltbeli és korábbi expozíciójáról, a tbc-ről és az LTBI egyéb lehetséges meghatározóiról, például az aktív tbc-s betegek fizikai közelségéről, az expozíció átlagos napi időtartamáról, valamint az indexes eseteknek való kitettség teljes időtartamáról. . A CRF-ek a következő adatokat is tartalmazzák: a jogosultsági kritériumok ellenőrző listája, az alapszintű klinikai vizsgálatok és laboratóriumi vizsgálatok eredményei, valamint a nyomon követés során gyűjtött információk, beleértve a visszavonás részleteit is, ha vannak. A projektcsapatnak a CRF-ek kitöltéséért felelős tagjai, akik lehetnek kutatók vagy terepmunkások, egy delegációs naplóban szerepelnek.

Kiindulási mintagyűjtés és laboratóriumi értékelések

A mintákat az 1. ábrán, valamint az 1. és 2. táblázatban leírtak szerint gyűjtik, a laboratóriumi elemzéseket pedig a 3. és 4. táblázatban leírtak szerint végzik el. Ha a vizsgálatokat a rutin ellátás részeként végzik (pl. teljes vérkép aktív tbc-s betegeknél, HIV-szerológia aktív tbc-s betegeknél és IGRA-pozitív LTBI-szűrések), az eredmények a CRS-en keresztül érhetők el, és a CRF-en dokumentálják. Az IGRA-negatív LTBI-szűrések és a nem exponált résztvevők HIV-tesztet kínálnak az 1. látogatás alkalmával.

Annak megvizsgálására, hogy a tbc-s betegek CD34+ PBMC-jéből izolált Mtb-törzsek egyeznek-e azokkal az indexes esetek köpetéből izolált törzsekkel, amelyeknek exponáltak, köpetmintát vesznek 10 indexes aktív tbc-s betegtől, akiknél a CD34+ PCR vizsgálat pozitív kontaktusai vannak a vizsgálatban. és az ezekből a mintákból tenyésztett izolátumokon teljes genom szekvenálási elemzést végeznek. Ezen elemzés alapján az Mtb amplikon könyvtárak létrehozásához szükséges primereket bioinformatikai megközelítésekkel tervezik meg a törzsek sokféleségének rögzítésére. Ezeket a primereket ezután Mtb amplikon könyvtárak létrehozására használjuk fel olyan CD34+ sejtekből, amelyek TB-kontaktusokból izolált Mtb genomiális DNS-t tartalmaznak. Ezeket a könyvtárakat ezután szekvenálják, és összehasonlítják az indexeset Mtb genomjával, hogy meghatározzák, hogy az indexes esetekből izolált törzsek és a kontaktusok egyeznek-e.

A pozitív HIV-teszttel / IGRA-val rendelkező résztvevőket HIV-/TB-klinikákra irányítják további értékelés céljából. Ahol HIV-teszteket és IGRA-kat végeztek kutatási célból (pl. ahol nem részei a rutin ellátásnak), a kutatók közölni fogják ezeket az eredményeket a résztvevőkkel, amint elérhetővé válnak.

Nyomon követési eljárások

• LTBI-szűrések: A látogatásokat és a nyomon követési értékeléseket az 1. ábra, az 1. és a 3. táblázat részletezi. A résztvevők 3 hónap elteltével a 2. látogatáson vesznek részt (2. látogatás, V2). A kemoprofilaxist befejező résztvevők rutinszerű klinikai kivizsgáláson vesznek részt a kezelés befejezése után. Azokat, akik nem szednek kemoprofilaxist, szintén nyomon követik a V1 után 3 hónappal. Az aktív tuberkulózis tüneteit (minden résztvevő) és a kemoprofilaxishoz való ragaszkodást (kemoprofilaxisban részesülők) részletező CRF kitöltése mellett 117 ml-es vérmintát veszünk immunológiai és molekuláris analízishez az alábbi 13.3. szakaszban részletezettek szerint. A második látogatás befejeztével a vizsgálatban való részvétel véget ér.
• Aktív tbc-s betegek: A viziteket és a nyomon követést az 1. ábra, a 2. és a 4. táblázat részletezi. Az anti-TB kezelésben részesülő résztvevők a kezelés befejezése után rutin klinikai kivizsgáláson vesznek részt, és egy második, 114 ml-es vérmintát vesznek ezt a látogatást immunológiai és molekuláris analízis céljából, az alábbi 13.3. szakaszban részletezettek szerint. A második látogatás befejeztével a vizsgálatban való részvétel véget ér.

A CD34+ PCR teszt eredményeit nem használjuk fel a klinikai menedzsment iránymutatására, mivel ez a teszt a fejlesztés korai szakaszában lévő kutatási eszköz, és eredményeit semmilyen klinikai eredménnyel nem korrelálták.

Résztvevő visszavonása

A résztvevők visszavonásra kerülnek, ha visszavonják részvételi hozzájárulásukat, vagy ha úgy ítélik meg, hogy a kilépés a résztvevő mindenek felett álló érdekét szolgálja. A résztvevőket akkor is visszalépőnek kell tekinteni, ha az írásos és telefonos emlékeztető ellenére sem vesznek részt a második tervezett tanulmányi látogatásukon. Ha egy résztvevő kilép a vizsgálatból, a visszalépés okát rögzítik a CRF-ben.

A visszavonásig gyűjtött adatok a vizsgálati elemzésekbe bekerülnek, hacsak egy résztvevő másként nem kéri. Minden olyan klinikai mintát, amelyet a résztvevő kilépése előtt vettek, felhasználnak a vizsgálati elemzésekhez.

A tanulmány végének meghatározása

A vizsgálat akkor fejeződik be, amikor az összes klinikai és laboratóriumi értékelés befejeződött az utánkövetésen részt vevő összes résztvevő esetében.

9. Statisztikai megfontolások

9.1 Mintaméret

Ennek a tanulmánynak a fő célja egy másik környezetből származó eredmények validálása és kiterjesztése, amelyben hét IGRA-pozitív tünetmentes felnőtt perifériás véréből izolált CD34+ sejtekben Mtb genomiális DNS-ét mutatták ki.10 E cél elérése érdekében összesen 100 LTBI-szűrt személyt vesznek fel a keresztmetszeti vizsgálatba (20 résztvevő független változónként, amelyet a regressziós elemzésben kell tesztelni). Várhatóan ezek közül a résztvevők közül körülbelül ötven lesz IGRA-pozitív, közülük körülbelül negyvennek írnak fel kemoprofilaxist: 25 résztvevő utánkövetése 5%-os szignifikancia szinten >80%-os teljesítményt ad, hogy igazolja a a CD34+ PCR-pozitív egyének aránya a kiindulási állapot 80%-áról a követéskori 30%-ra.

10. Etikai megfontolások

A vizsgálat megkezdése előtt jóváhagyást kell kérni az NHS REC-től a vizsgálati protokollhoz, a tájékoztatáson alapuló hozzájárulási űrlapokhoz és egyéb releváns dokumentumokhoz. A vizsgálat addig nem kezdődik meg, amíg az etikai bizottságtól meg nem szerzik a szükséges jóváhagyásokat, és a szponzor nem ad „zöld utat” a webhelyek aktiválására. A CI biztosítja, hogy ezt a tanulmányt a Helsinki Nyilatkozat (2013) és az Egészségügyi és Szociális Care Kutatásirányítási Keretrendszer, 2005. évi második kiadás és annak későbbi módosításaiban foglalt etikai alapelvekkel összhangban végezzék. A szponzor dönt arról, hogy egy módosítás kisebb vagy lényeges módosításnak minősül-e. A REC általi felülvizsgálatot igénylő lényeges módosításokat addig nem hajtják végre, amíg azokat az illetékes testület jóvá nem hagyja. A szponzorral és a REC-vel folytatott minden levelezést a tanulmány törzsfájlja tárolja. A CI a vizsgálat végén értesíti a REC-t és a szponzort.

A résztvevők írásos, tájékozott beleegyezését egy megfelelően képzett személy (aki lehet orvos, ápolónő vagy kutatási asszisztens) beszerzi a vizsgálatban való részvétel előtt. Az információs lapokat angolul és szükség esetén más nyelveken is elérhetővé teszik. A potenciális résztvevők megkapják az információs lapot, és elmagyarázzák a vizsgálat céljait, módszereit, várható előnyeit és lehetséges veszélyeit. A hozzájárulási eljárás során a résztvevőknek elmagyarázzák, hogy a részvétel önkéntes, és a vizsgálat során bármikor, bármilyen okból megtagadhatják a vizsgálatba való belépést, vagy kiléphetnek.

Összeférhetetlenség

Nem azonosítottak pénzügyi vagy egyéb versengő érdekeltséget a CI-vel vagy bármely társvizsgálóval kapcsolatban.

11. Biztonsági szempontok

Mivel a vizsgálat megfigyeléses, a vizsgálattal összefüggő nemkívánatos események kockázata elhanyagolható. Mindazonáltal minden olyan nemkívánatos eseményt, amely a vizsgálattal összefüggésbe hozható, 24 órán belül jelenteni kell a megbízónak. A gyűjtendő vérmennyiséget (120 ml-ig) egyes résztvevők nagynak érzékelhetik, de a véradó felnőttek általában 500 ml-t adnak egyszerre anélkül, hogy vérszegénységben szenvednének. A vizsgálók ezért nem számolnak ezzel a vérmennyiséggel kapcsolatos nemkívánatos eseményre. A vérminta mennyiségére vonatkozó információkat és azt, hogy ez nemkívánatos egészségügyi következményekkel jár-e, a résztvevők tájékoztatást kapnak a tájékoztatón. A szokásos klinikai ellátás részeként minden tbc-s beteget vérszegénységre szűrnek, és kizárják azokat, akiknek hemoglobinszintje a belépéskor 10 g/dl alatt van. Ezen túlmenően a következő intézkedéseket hozzuk annak érdekében, hogy minimálisra csökkentsük a résztvevők által a vizsgálat során tapasztalt esetleges kényelmetlenséget, kényelmetlenséget és kockázatot:

- megfelelően képzett személyzet alkalmazása a phlebotomia elvégzéséhez

12. Adatkezelés és nyilvántartás

12.1. Titoktartás

A vizsgálat lefolytatásához és elemzéséhez szükséges védett egészségügyi információkat (PHI) gyűjtik a vizsgálatra szűrt valamennyi résztvevőről; ez az információ tartalmazza az egyes résztvevők nevét, születési idejét, nemét, címét, telefonszámát, orvosi nyilvántartási számát, ha van, e-mail címét és etnikai származását. A vizsgálat elvégzéséhez vagy elemzéséhez a PHI-hez hozzáférést igénylő vizsgálati személyzet szerepel a delegálási naplóban. A PHI bizalmas marad, kezelése, feldolgozása, tárolása és megsemmisítése az 1998. évi adatvédelmi törvény szerint történik. A résztvevők fenntartják a jogot arra, hogy a vizsgálat során bármikor visszavonják PHI-jük használatára vonatkozó engedélyüket. A tanulmányból származó publikációkban minden résztvevő névtelen lesz. Az adatok pszeudoanonimizálása a következőképpen történik. A PHI-t egy biztonságos adatbázisban tárolják, amely egyedi azonosító kódhoz kapcsolódik. A klinikai információkat egy különálló, biztonságos adatbázisban tárolják, ugyanazon egyedi azonosító kódhoz kapcsolva. A CI és a társkutatók hozzáférhetnek a pszeudoanonimizált végső vizsgálati adatkészlethez.

A kutatás során minden nyilvántartás a CI felelőssége, és azokat biztonságos körülmények között tárolják. A vizsgálat befejeztével a szponzor követelménye, hogy a nyilvántartásokat és az adatokat további 20 évig megőrizze. A KI a kutatási adatok „őrzőjeként” fog eljárni. A PHI-hez való hozzáférés a vizsgálat, a minőség-ellenőrzés, az audit és az elemzés elvégzéséhez szükséges minimális számú személyre korlátozódik. A forrásdokumentumok a következők: szűrési naplók, tájékozott hozzájárulás és papíralapú CRF. Minden forrásdokumentumot biztonságosan, zárt iratszekrényekben tárolunk. Az adattovábbítás és -szállítás az Egyesült Királyság 1998. évi adatvédelmi törvényének megfelelően történik. Személyazonosításra alkalmas információkat nem tárolunk, szállítunk vagy küldünk semmilyen hordozható eszközre vagy onnan, kivéve, ha az eszköz titkosított.

12.2. Adatgyűjtés, rögzítés és kezelés

Az aláírt hozzájárulási űrlapokat és a forrásadatokat tartalmazó papíralapú dokumentumokat biztonságosan tároljuk. A vizsgálati adatok egy adatbázisba kerülnek az EpiData Entry szoftverben. A munkatársak megfelelő képzésben részesülnek az adatbázis adatbevitelre való használatához. A laboratóriumi adatok bekerülnek az adatbázisba.

A CI és a társkutatók hozzáférhetnek a vizsgálati adatokhoz a vizsgálat során. Azok a vizsgálati személyzet, akiknek a vizsgálat elvégzéséhez ilyen hozzáférésre van szükségük, szintén megkapják a szükséges hozzáférést. A vizsgálat során a vizsgálati adatokhoz szükség szerint a szponzor, a fogadó intézmény és a szabályozó hatóságok felhatalmazott képviselői is hozzáférhetnek.

12.3. Minőségellenőrzés és minőségbiztosítás

A tanulmányi dokumentációt igény szerint a szponzor és a REC képviselői rendelkezésére bocsátják minőség-ellenőrzés és minőségbiztosítás céljából.

13. Laboratóriumok

13.1. Mintagyűjtés, címkézés és feldolgozás

A vérmintákat a vizsgálati személyzet gyűjti, a résztvevő azonosítójával ellátja és dátummal látja el. A Tempus csöveket a begyűjtés után azonnal erőteljesen fel kell rázni a gyártó ajánlásainak megfelelően. A vértenyésztéshez és a HIV-szerológiához szükséges mintákat a Központi Laboratóriumokba szállítják feldolgozásra. A fennmaradó vérmintákat a The Blizard Institute-ba szállítják, ahol a minta beérkezésének dátuma és időpontja, valamint a minta állapota (pl. nem alvadt) laboratóriumi naplóba kell rögzíteni. A QFT-Plus teszt mintáit 37 °C-on inkubáljuk röviddel a minták átvétele után 18 órán keresztül, a centrifugálás és a felülúszók leszívása előtt, amelyeket -80 C-on tárolunk az IFN-gamma-koncentráció elemzéséig. A Tempus-csövekben lévő vérmintákat -80 °C-on egy felcímkézett állványban tárolják, amíg a University College London fertőzési és immunitási osztályába szállítják az RNS-kivonás és a génexpresszió-profilok meghatározására. A PBMC-t elválasztjuk a fennmaradó mintától (100 ml), majd a CD34+ sejteket mágneses gyöngyválogatással izoláljuk. Az izolált CD34+ sejtek tisztaságát áramlási citometriával ellenőrizzük.