Evaluación de una nueva prueba de diagnóstico microbiológico para la infección latente por Mycobacterium tuberculosis (MICRO-LTBI)

Objetivos:

i) Determinar si el ADN de M. tuberculosis (Mtb) se puede detectar en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) CD34+ aisladas de

• adultos asintomáticos sometidos a pruebas de detección de LTBI (evaluados por LTBI)
• adultos con tuberculosis activa recién diagnosticada (casos activos) ii) Determinar si las cepas de Mtb aisladas de PBMC CD34+ de contactos recientes con tuberculosis en el hogar son genéticamente idénticas a las aisladas del esputo de casos índice con tuberculosis pulmonar a los que han estado expuestos iii ) Caracterizar los correlatos inmunológicos, clínicos y epidemiológicos de la capacidad de detectar Mtb en PBMC CD34+ en una población heterogénea de IGRA positivos y negativos. Examinadores de LTBI.

iv) Determinar si la presencia de ADN de Mtb en PBMC CD34+ de pacientes con LTBI positivo para IGRA se asocia con la presencia de una firma transcripcional de sangre periférica que recientemente se informó que predice el riesgo de progresión a TB activa v) Evaluar el cambio longitudinal en los resultados del ensayo de PCR de CD34+ en

- Los examinados de LTBI completan la quimioprofilaxis para LTBI.

• Pacientes con LTBI que no reciben quimioprofilaxis
• Pacientes que completan el tratamiento para la tuberculosis activa

4.1. Fondo

La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa causada por organismos del complejo M. tuberculosis (MTBC). El principal patógeno en humanos es M.tuberculosis (Mtb). La tuberculosis comúnmente afecta los pulmones y se transmite mediante la inhalación de gotitas infecciosas expectoradas por un paciente con tuberculosis pulmonar activa. La tuberculosis ha sido una causa importante de morbilidad y mortalidad a lo largo de la historia de la humanidad. En Europa y América del Norte, un aumento de los casos de tuberculosis en los siglos XVII y XVIII fue seguido por una rápida disminución atribuida principalmente a la mejora de las condiciones socioeconómicas, la aplicación de medidas de salud pública y el aislamiento de los pacientes con tuberculosis.1 Hacia finales del siglo XIX, Después de la tendencia a la baja de los casos y muertes por tuberculosis en Europa y América del Norte, dos acontecimientos importantes, el descubrimiento de la Mtb y los rayos X, se volvieron clave en el diagnóstico y tratamiento de la tuberculosis.1 Posteriormente, la vacunación con el bacilo M. bovis Calmette-Guérin (BCG) y el tratamiento con antibióticos en la primera mitad del siglo XX llevaron al optimismo mundial de que el control y la eliminación de la tuberculosis estaban al alcance de la mano. Sin embargo, la tuberculosis sigue siendo una grave amenaza para la salud pública hasta el día de hoy y es la segunda causa infecciosa de muerte a nivel mundial. 2, 3 Según el informe de la OMS de 2015, se estima que en 2014 se produjeron en todo el mundo 9,6 millones de nuevos casos de tuberculosis (el 12% de los cuales estaban coinfectados por el VIH) y 1,5 millones de muertes (de las cuales 0,4 millones ocurrieron entre personas coinfectadas por el VIH).4 Además, se estima que un tercio de la población mundial tiene infección latente por tuberculosis (LTBI), de la cual alrededor del 10% desarrollará tuberculosis activa a lo largo de su vida.5

Aunque sólo 22 países de ingresos bajos o medios (PIBM) representan el 80% de la carga mundial, la tuberculosis sigue siendo una enfermedad importante entre las poblaciones inmigrantes de los países de ingresos altos. En el Reino Unido, las reducciones en la incidencia de tuberculosis logradas en el siglo XX se han revertido con un aumento del 50% en las notificaciones de tuberculosis entre 1998 y 2009.6 En 2013, se notificaron un total de 7.892 casos de tuberculosis, equivalente a una incidencia de 12,3 por 100.000 habitantes al año, la más alta entre los países de ingresos altos.7 Una alta proporción (37,8%) de los casos de tuberculosis en el Reino Unido se encuentra en Londres, donde la tasa de incidencia de tuberculosis es de 35,5 por 100.000 habitantes por año; inmigrantes de la India (30%), Pakistán (20%) y Somalia (5%) representaron la mayoría de estos casos.7

Actualmente, las estrategias clave en el control de la tuberculosis son el diagnóstico rápido y preciso de la enfermedad activa junto con un tratamiento eficaz para interrumpir la transmisión. Sin embargo, el diagnóstico tardío es un desafío importante que facilita la transmisión en las comunidades.8 Generalmente, pasan varios meses desde la aparición de los síntomas hasta que un paciente con tuberculosis inicia el tratamiento. Por ejemplo, en el Reino Unido, casi un tercio de los pacientes con tuberculosis pulmonar comienzan el tratamiento 4 meses después de la aparición de los síntomas.7 Estos largos retrasos, junto con la gran cantidad de LTBI, sugieren la necesidad de intervenciones para identificar y tratar a las personas con LTBI para lograr el control de la tuberculosis. El tratamiento antimicrobiano de la LTBI (quimioprofilaxis) es eficaz para reducir el riesgo de reactivación y se implementa de forma rutinaria en entornos de altos ingresos y baja incidencia. Sin embargo, la implementación de esta política, particularmente en entornos de alta carga, se ve obstaculizada por la falta de una prueba de diagnóstico para identificar el subconjunto de personas sensibilizadas a Mtb que están en riesgo de desarrollar tuberculosis activa, a quienes se debe dirigir la quimioprofilaxis.

Actualmente, el diagnóstico de LTBI se realiza mediante la detección de una respuesta inmune adaptativa a la infección por Mtb, ya sea in vivo (mediante la prueba cutánea de tuberculina) o ex vivo (mediante ensayos de liberación de interferón gamma [IGRA]). Este enfoque, que no detecta Mtb directamente, tiene la limitación de que no puede distinguir el 10% de los individuos sensibilizados que están en riesgo de reactivación (en quienes la quimioprofilaxis puede ser beneficiosa) del 90% que están inmunológicamente sensibilizados pero que no lo hacen. progresar a la enfermedad activa (en quienes la quimioprofilaxis no confiere ningún beneficio). Este último grupo es potencialmente heterogéneo: algunos pueden haber eliminado la infección, mientras que otros pueden tener ITBL pero ser capaces de contenerla indefinidamente.9 Las herramientas para analizar estos posibles fenotipos podrían permitir una orientación más precisa de la quimioprofilaxis, pero actualmente no existen. En este estudio, los investigadores investigarán si Mtb se puede detectar en células CD34 + aisladas de sangre periférica de a) adultos sometidos a pruebas de detección de LTBI (evaluados por LTBI) y b) adultos con tuberculosis activa recién diagnosticada (casos activos).

4.2. Justificación del estudio

Este estudio se basa en una observación reciente de uno de los co-investigadores (Stephen Reece), que formó parte de un grupo en el Instituto Max Planck de Biología de Infecciones, Berlín, que detectó ADN de Mtb en células madre hematopoyéticas pluripotentes CD34+ que se repoblan a largo plazo. (LTpHSC) aisladas de 100 ml de sangre periférica de siete adultos sanos con LTBI (IGRA positivo, TB activa excluida); No se detectó ADN de Mtb en LTpHSC de siete adultos sanos IGRA negativos. 10 Si este notable hallazgo puede replicarse en otro entorno, podría conducir al desarrollo de una nueva prueba microbiológica ('el ensayo de PCR CD34+') con varias aplicaciones potenciales:

a) identificar personas que están infectadas de forma latente con Mtb resistente a los antibióticos (lo que permite seleccionar un régimen de quimioprofilaxis apropiado), b) monitorear la eficacia de la quimioprofilaxis y las intervenciones diseñadas para prevenir la adquisición de LTBI, como vacunas y programas de suplementación con micronutrientes, c ) rastrear la propagación de cepas particulares a través de una población (proporcionando una herramienta para la intervención de salud pública), d) discriminar entre individuos sensibilizados con Mtb que están en riesgo de progresión a una enfermedad activa versus aquellos que no lo son, permitiendo que la quimioprofilaxis se dirija a poblaciones que pueden beneficiarse de ella, y e) proporcionar nuevos conocimientos sobre la inmunobiología de la LTBI y la patogénesis de la tuberculosis humana.

4.3. Hipótesis

i) El ADN de Mtb se puede detectar en PBMC CD34+ de adultos asintomáticos con IGRA positivo y en casos activos de tuberculosis en el momento del diagnóstico, pero no en adultos con IGRA negativo.

ii) Las cepas de Mtb aisladas de PBMC CD34+ de contactos asintomáticos con tuberculosis IGRA positiva serán genéticamente idénticas a las aisladas del esputo de casos índice de tuberculosis pulmonar a los que han estado expuestos recientemente.

iii) La capacidad de detectar ADN de Mtb en PBMC CD34+ de examinados de LTBI se asocia con resultados de IGRA, así como factores de riesgo clínicos y epidemiológicos reconocidos para LTBI. iv) Capacidad de detectar ADN de Mtb en PBMC CD34+ de examinados de LTBI positivos para IGRA se asocia con firmas transcriptómicas de sangre periférica. previamente definido como asociado con la progresión a TB activa v) La terapia antimicrobiana es efectiva para eliminar Mtb de PBMC CD34+ aislado de individuos con LTBI o TB activa en quienes era detectable al inicio del estudio; y que los resultados del ensayo de PCR CD34+ son reproducibles al repetirse en pacientes con LTBI que no han recibido quimioprofilaxis.

5. Objetivos

5.1. Objetivo principal

Para determinar si el ADN de M. tuberculosis (Mtb) se puede detectar en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) CD34+ aisladas de

• adultos asintomáticos sometidos a exámenes de detección de LTBI de rutina (evaluados por LTBI)
• adultos con tuberculosis activa recién diagnosticada (casos activos)

5.2. Objetivos secundarios

• Determinar si las cepas de Mtb aisladas de PBMC CD34+ de contactos con tuberculosis son genéticamente idénticas a las aisladas del esputo de casos índice con tuberculosis pulmonar a los que han estado expuestos.
• Caracterizar los correlatos inmunológicos, clínicos y epidemiológicos de la capacidad para detectar Mtb en PBMC CD34 + en una población heterogénea de pacientes con LTBI positivos y negativos para IGRA.
• Determinar si la presencia de ADN de Mtb en PBMC CD34+ de examinados IGRA positivos se asocia con la presencia de una firma transcripcional de sangre periférica que recientemente se informó que predice el riesgo de progresión a TB activa11
• Evaluar el cambio longitudinal en los resultados del ensayo de PCR CD34+ en
• Cribados de LTBI que completan quimioprofilaxis para LTBI
• Pacientes con LTBI que no reciben quimioprofilaxis
• pacientes que completan el tratamiento para la tuberculosis activa

Diseño de estudios y visitas de estudio

Los investigadores realizarán un estudio longitudinal. Se reclutarán dos grupos de participantes: adultos sometidos a pruebas de detección de LTBI (evaluados por LTBI) y pacientes a punto de iniciar el tratamiento para la tuberculosis activa (casos activos). Los examinados por LTBI son aquellos que se someten a pruebas de LTBI como parte de la atención estándar: incluyen contactos recientes de un caso de tuberculosis con índice infeccioso, nuevos ingresantes de países con una alta carga de tuberculosis, trabajadores de la salud que se someten a exámenes de salud ocupacional y pacientes que están a punto de someterse a una terapia inmunosupresora. . Los pacientes con tuberculosis activa son aquellos a quienes se les ha diagnosticado tuberculosis activa y están a punto de comenzar a tomar una terapia antituberculosa.

Al inicio (Visita 1), a los participantes que cumplan con los criterios de inclusión y den su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio se les pedirá que proporcionen información sociodemográfica, incluidos detalles de edad, sexo y origen étnico, así como detalles de su historial de exposición a la tuberculosis (incluida la exposición específica). a los participantes con tuberculosis activa inscritos en el estudio) y otros datos clínicamente relevantes, todos los cuales se registrarán en un formulario de informe de caso (CRF). Se realizará una prueba de serología del VIH si aún no se realiza como parte de la atención de rutina. Se recolectará una muestra de sangre de 120 ml (117 ml si ya se realizó la prueba del VIH como parte de la atención de rutina) para IGRA (QFT-Plus), hemocultivo para Mtb, análisis de firma de riesgo de transcriptoma de sangre periférica y ensayo de PCR CD34+ para ADN de Mtb. al inicio. A los participantes IGRA positivos en quienes se haya excluido la tuberculosis activa mediante evaluación clínica y radiografía de tórax (parte de la atención estándar) se les ofrecerá un ciclo de 3 meses de quimioprofilaxis con rifampicina e isoniazida si cumplen con los criterios para esta terapia (también parte de la atención estándar). cuidado).12

La comunicación de resultados positivos de la prueba del VIH se manejará de acuerdo con las recomendaciones de las Directrices Nacionales para las Pruebas del VIH del Reino Unido de 2008. Los resultados positivos de la prueba de VIH se comunicarán en una entrevista cara a cara con un médico del estudio, en presencia de una enfermera de la clínica Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) (el servicio local de VIH). Los participantes que resulten VIH positivos serán remitidos a su clínica GUM más cercana para confirmar sus resultados y realizar un tratamiento adicional según corresponda.

A los 3 meses (Visita 2), se registrarán los detalles de prescripción y cumplimiento de la quimioprofilaxis y se tomará una segunda muestra de sangre (117 ml) para repetir IGRA (QFT-Plus), hemocultivo y ensayo de PCR CD34+. Para los participantes que recibieron quimioprofilaxis, también se les quitará un tubo Tempus en la Visita 2.

Al inicio (Visita 1), a los participantes que cumplan con los criterios de inclusión y den su consentimiento informado por escrito para participar en el estudio se les pedirá que proporcionen información sociodemográfica básica, incluidos detalles de edad, sexo y origen étnico, así como la duración de sus síntomas, contacto con cualquier evaluador de LTBI inscrito y otros datos clínicamente relevantes, todos los cuales se registrarán en un CRF. La serología del VIH, el hemograma completo y la baciloscopia de esputo y la cutlure para M.tuberculosis se realizan como parte de la atención de rutina en este grupo de pacientes. Se recolectará una muestra de sangre de 114 ml para IGRA (QFT-Plus), hemocultivo para Mtb y ensayo de PCR CD34 + para ADN de Mtb al inicio del estudio. Los pacientes con tuberculosis serán tratados por enfermedad activa de acuerdo con las directrices del Reino Unido. 12

Una vez finalizada la quimioterapia (visita 2, generalmente a los 6 meses), se registrarán los detalles de la prescripción y el cumplimiento del tratamiento antituberculoso y se recolectará una segunda muestra de sangre (114 ml) para IGRA (QFT-Plus), hemocultivo para Mtb y el ensayo de PCR CD34+.

Procedimientos de estudio

Procedimientos de invitación y consentimiento informado

Invitación

En Londres, la detección de LTBI mediante un IGRA se realiza comúnmente en cuatro grupos: contactos recientes de pacientes con tuberculosis activa; nuevos ingresantes de países con alta carga de tuberculosis; pacientes que están por iniciar terapias inmunosupresoras; y trabajadores de la salud sometidos a exámenes de salud ocupacional. Los grupos en riesgo de LTBI pueden identificarse inicialmente en varios entornos diferentes (clínica de tuberculosis, atención primaria, clínicas de reumatología, servicios de salud ocupacional), pero todos son remitidos a una clínica de tuberculosis (contactos, nuevos ingresantes, pacientes a punto de iniciar terapia inmunosupresora). ) o a la Clínica de Salud Ocupacional (trabajadores de salud sometidos a exámenes de salud ocupacional) para que se les realice el examen de LTBI. Por lo tanto, los examinados de LTBI potencialmente elegibles serán identificados y reclutados para el estudio en clínicas de tuberculosis o en la Clínica de Salud Ocupacional. Los pacientes con tuberculosis activa serán identificados y reclutados en las clínicas de tuberculosis Barts Health NHS Trust.

Las personas potencialmente elegibles serán informadas sobre el estudio por enfermeras o médicos que trabajan en clínicas de tuberculosis o clínicas de salud ocupacional, quienes realizan pruebas de detección de tuberculosis como parte de la atención clínica habitual. Aquellos que expresen interés en el estudio recibirán una Hoja de información para el participante de parte de un miembro del equipo de atención clínica. Esto explicará los objetivos, métodos, beneficios anticipados y peligros potenciales del estudio, y se presentará en un lenguaje no técnico, ya sea en inglés u otros idiomas cuando sea necesario. A quienes tomen una Hoja de información del participante se les pedirá que completen una 'Hoja de contacto' que proporcione sus datos de contacto y autorice al equipo de investigación a comunicarse con ellos una vez que hayan tenido la oportunidad de leer la información; Este 'Hoja de contacto' será enviado al equipo de investigación por el equipo de atención habitual del participante.

Procedimientos de consentimiento informado

El consentimiento informado se realizará de acuerdo con los procedimientos operativos estándar de la JRMO. El consentimiento informado será tomado en una sala privada por personal que haya recibido formación específica en Buenas Prácticas Clínicas y toma de consentimiento informado, que podrán ser médicos, enfermeras o asistentes de investigación. Durante el proceso de consentimiento, se informará a los participantes que la participación es voluntaria y que pueden negarse a ingresar al estudio o retirarse en cualquier momento durante el seguimiento, por cualquier motivo.

Se pedirá a los participantes que indiquen su consentimiento para participar firmando e imprimiendo su nombre. Se requerirá un testigo imparcial para refrendar el consentimiento para aquellos que requieran un intérprete durante el proceso de consentimiento. Los participantes recibirán una compensación económica por los gastos de viaje asociados con cada visita.

Procedimientos de inscripción y seguimiento

Reclutamiento al inicio

Se evaluará la elegibilidad de los participantes potenciales según los criterios de inclusión y exclusión establecidos anteriormente. Después del proceso de consentimiento y después de que un participante dé su consentimiento informado por escrito para participar, se asignará un número de identificación único. La evaluación de la elegibilidad para participar será realizada por personal debidamente capacitado que puede ser médicos, enfermeras o asistentes de investigación.

Procedimiento de recogida de datos

Utilizando un CRF, en la Visita 1 (V1), se pedirá a todos los participantes que brinden información sociodemográfica e historial médico, incluido el historial de medicación. A los examinados de LTBI se les pedirá que proporcionen detalles de la exposición reciente y previa a pacientes con tuberculosis, antecedentes de tuberculosis y otros posibles determinantes de LTBI, como la proximidad física a pacientes con tuberculosis activa, la duración promedio diaria de la exposición y la duración total de la exposición a los casos índice. . Los CRF también incluirán los siguientes datos: lista de verificación de criterios de elegibilidad, resultados de exámenes clínicos y pruebas de laboratorio iniciales, e información recopilada durante el seguimiento, incluidos los detalles de los retiros, si corresponde. Los miembros del equipo del proyecto responsables de completar los CRF, que pueden ser becarios de investigación o trabajadores de campo, se incluirán en un registro de delegación.

Recogida de muestras de referencia y evaluaciones de laboratorio.

Las muestras se recolectarán como se detalla en la Figura 1 y las Tablas 1 y 2, y los análisis de laboratorio se realizarán como se detalla en las Tablas 3 y 4. Cuando se realizan pruebas como parte de la atención de rutina (p. ej. hemograma completo para pacientes con tuberculosis activa, serología de VIH para pacientes con tuberculosis activa y examinados de LTBI con IGRA positivo), se accederá a los resultados a través de CRS y se documentarán en el CRF. A los examinados de LTBI con IGRA negativo y a los participantes no expuestos se les ofrecerá una prueba de VIH en la Visita 1.

Para investigar si las cepas de Mtb aisladas de PBMC CD34+ de contactos de TB coinciden con las aisladas del esputo de casos índice a los que han estado expuestos, se recolectarán muestras de esputo de 10 pacientes índice de TB activa que tengan contactos positivos en el ensayo de PCR CD34+ inscritos en el estudio. y se realizará un análisis de secuenciación del genoma completo en aislados cultivados a partir de estas muestras. Con base en este análisis, se diseñarán cebadores para crear bibliotecas de amplicones de Mtb utilizando enfoques bioinformáticos para capturar la diversidad de cepas. Estos cebadores luego se utilizarán para generar bibliotecas de amplicones de Mtb a partir de células CD34+ que albergan ADN genómico de Mtb aislado de contactos de TB. Luego, estas bibliotecas se secuenciarán y se compararán con el genoma de Mtb del caso índice para determinar si las cepas aisladas de los casos índice y los contactos coinciden.

Los participantes con pruebas de VIH/IGRA positivas serán remitidos a clínicas de VIH/TB respectivamente para una evaluación adicional. Cuando se hayan realizado pruebas de VIH e IGRA con fines de investigación (es decir, cuando no formen parte de la atención de rutina), el personal de investigación comunicará estos resultados a los participantes cuando estén disponibles.

Procedimientos de seguimiento

• Cribados de LTBI: las visitas y las evaluaciones de seguimiento se detallan en la Figura 1, Tabla 1 y Tabla 3. Los participantes asistirán a la visita 2 a los 3 meses (visita 2, V2). Los participantes que hayan completado la quimioprofilaxis tendrán una evaluación clínica de rutina al finalizar su tratamiento. Aquellos que no toman quimioprofilaxis también serán seguidos a los 3 meses después de la V1. Además de completar un CRF que detalla los síntomas de tuberculosis activa (todos los participantes) y el cumplimiento de la quimioprofilaxis (aquellos que reciben quimioprofilaxis), se recolectará una muestra de sangre de 117 ml para análisis inmunológico y molecular como se detalla en la sección 13.3 a continuación. Al finalizar la segunda visita, finalizará la participación en el estudio.
• Pacientes con TB activa: Las visitas y el seguimiento se detallan en la Figura 1, Tabla 2 y Tabla 4. Los participantes que toman tratamiento anti-TB tendrán una evaluación clínica de rutina al finalizar su tratamiento y se recolectará una segunda muestra de sangre de 114 ml durante esta visita para análisis inmunológicos y moleculares como se detalla en la sección 13.3 a continuación. Al completar la segunda visita, finalizará la participación en el estudio.

Los resultados de la prueba de PCR CD34+ no se utilizarán para guiar el manejo clínico, ya que esta prueba es una herramienta de investigación en las primeras fases de desarrollo y sus resultados no se han correlacionado con ningún resultado clínico.

Retiro de participante

Los participantes serán retirados si retiran su consentimiento para participar o si se concluye que la retirada es lo mejor para el participante. También se considerará que los participantes se han retirado si no asisten a su segunda visita de estudio programada a pesar de los recordatorios escritos y telefónicos. Si un participante se retira del estudio, el motivo del retiro se registrará en el CRF.

Los datos recopilados hasta el momento del retiro se incluirán en los análisis del estudio, a menos que un participante solicite lo contrario. Cualquier muestra clínica tomada antes del retiro de un participante se utilizará para los análisis del estudio.

Definición de fin de estudio

El estudio finalizará cuando se completen todas las evaluaciones clínicas y de laboratorio de todos los participantes que asistan al seguimiento.

9. Consideraciones estadísticas

9.1 Tamaño de la muestra

El objetivo principal de este estudio es validar y ampliar los hallazgos de otro entorno en el que se detectó ADN genómico de Mtb en células CD34+ aisladas de la sangre periférica de siete adultos asintomáticos positivos para IGRA.10 Para abordar este objetivo, se reclutará un total de 100 personas examinadas por LTBI para el estudio transversal (20 participantes por variable independiente que se probará en el análisis de regresión). Se anticipa que aproximadamente cincuenta de estos participantes serán IGRA positivos, de los cuales aproximadamente a cuarenta se les prescribirá quimioprofilaxis: el seguimiento de 25 de estos participantes dará >80% de potencia al nivel de significancia del 5% para demostrar una reducción en la proporción de individuos CD34+ PCR positivos del 80% al inicio al 30% en el seguimiento.

10. Consideraciones éticas

Antes del inicio del estudio, se solicitará la aprobación del NHS REC para el protocolo del estudio, los formularios de consentimiento informado y otros documentos relevantes. El estudio no comenzará hasta que se obtengan las aprobaciones necesarias del comité de ética y el patrocinador dé "luz verde" para activar los sitios. La CI garantizará que este estudio se realice de acuerdo con la Declaración de Helsinki (2013) y los principios éticos del Marco de Gobernanza de la Investigación para la Atención Social y de Salud, Segunda Edición, 2005 y sus enmiendas posteriores. Las decisiones sobre si una enmienda constituye una enmienda menor o sustancial recaerán en el patrocinador. Las modificaciones sustanciales que requieran revisión por parte del REC no se implementarán hasta que sean aprobadas por el organismo correspondiente. Toda la correspondencia con el Patrocinador y el REC se conservará en el Archivo Maestro del estudio. El CI notificará al REC y al Patrocinador al final del estudio.

Una persona debidamente capacitada (que puede ser un médico, una enfermera o un asistente de investigación) obtendrá el consentimiento informado por escrito de los participantes antes de participar en este estudio. Las hojas de información estarán disponibles en inglés y en otros idiomas cuando sea necesario. A los participantes potenciales se les proporcionará la hoja de información y se explicarán los objetivos, métodos, beneficios previstos y peligros potenciales del estudio. Durante el proceso de consentimiento, se explicará a los participantes que la participación es voluntaria y que pueden negarse a ingresar al estudio o retirarse en cualquier momento durante el seguimiento, por cualquier motivo.

Incompatibilidad

No se han identificado intereses financieros o de otro tipo en competencia para la CI ni para ningún co-investigador.

11. Consideraciones de seguridad

Dado que el estudio es observacional, el riesgo de eventos adversos relacionados con el estudio es insignificante. Sin embargo, cualquier evento adverso que se considere relacionado con el estudio se informará al patrocinador dentro de las 24 horas. Algunos participantes pueden percibir que el volumen de sangre que se va a extraer (hasta 120 ml) es grande, pero los adultos que donan sangre suelen donar 500 ml a la vez sin sufrir anemia. Por lo tanto, los investigadores no anticipan ningún evento adverso relacionado con la extracción de este volumen de sangre. La información sobre el volumen de la muestra de sangre y si esto tendrá consecuencias para la salud no deseadas se explicará a los participantes en la hoja de información. A todos los pacientes con tuberculosis se les realizarán pruebas de detección de anemia como parte de su atención clínica habitual y se excluirá a aquellos con un nivel de hemoglobina inferior a 10 g/dl al ingresar. Además, se tomarán las siguientes medidas para minimizar posibles inconvenientes, molestias y riesgos que los participantes puedan experimentar durante el curso de este estudio:

- uso de personal debidamente capacitado para realizar la flebotomía

12. Manejo de datos y mantenimiento de registros

12.1. Confidencialidad

Se recopilará la información médica protegida (PHI) necesaria para la realización y el análisis del estudio de todos los participantes seleccionados para el estudio; esta información incluirá el nombre de cada participante, fecha de nacimiento, sexo, dirección, número de teléfono, número de registro médico si corresponde, dirección de correo electrónico si corresponde y origen étnico. El personal del estudio que requiera acceso a la PHI para realizar o analizar el estudio se incluirá en un registro de delegación. La PHI permanecerá confidencial y será manejada, procesada, almacenada y destruida de acuerdo con la Ley de Protección de Datos de 1998. Los participantes conservarán el derecho de revocar su autorización para el uso de su PHI en cualquier momento durante el estudio. Todos los participantes serán anónimos en las publicaciones que surjan de este estudio. Los datos serán pseudoanonimizados de la siguiente manera. La PHI se guardará en una base de datos segura vinculada a un código de identificación único. La información clínica se mantendrá en una base de datos segura separada, vinculada al mismo código de identificación único. El CI y los coinvestigadores tendrán acceso al conjunto de datos del estudio final pseudoanonimizado.

Durante el curso de la investigación, todos los registros serán responsabilidad del CI y se mantendrán en condiciones seguras. Cuando se completa el estudio, el patrocinador exige que los registros y datos se conserven durante 20 años más. El CI actuará como "custodio" de los datos de la investigación. El acceso a la PHI se limitará al número mínimo de personas necesarias para realizar el estudio, el control de calidad, la auditoría y el análisis. Lo siguiente comprenderá los documentos fuente: registros de selección, consentimiento informado y CRF en papel. Todos los documentos originales se almacenarán de forma segura en archivadores cerrados con llave. La transferencia y el transporte de datos se realizarán de conformidad con la Ley de Protección de Datos del Reino Unido de 1998. La información de identificación personal no se almacenará, transportará ni enviará hacia o desde ningún dispositivo portátil a menos que ese dispositivo esté cifrado.

12.2. Recolección, registro y manejo de datos

Los formularios de consentimiento firmados y los documentos en papel que contengan datos de origen se almacenarán de forma segura. Los datos del estudio se ingresarán en una base de datos en el software EpiData Entry. El personal recibirá capacitación adecuada para utilizar la base de datos para el ingreso de datos. Los datos de laboratorio se ingresarán en la base de datos.

El CI y los coinvestigadores tendrán acceso a los datos del estudio durante el estudio. El personal del estudio que requiera dicho acceso para realizar el estudio también recibirá el acceso que sea necesario. También se otorgará acceso a los datos del estudio durante el estudio a los representantes autorizados del patrocinador, la institución anfitriona y las autoridades reguladoras, según sea necesario.

12.3. Control de calidad y garantía de calidad

La documentación del estudio se pondrá a disposición de los representantes del Patrocinador y del REC para control y garantía de calidad según lo solicitado.

13. Laboratorios

13.1. Recogida, etiquetado y procesamiento de muestras.

El personal del estudio recolectará muestras de sangre, las etiquetará con la identificación del participante y las fechará. Los tubos Tempus se agitarán vigorosamente inmediatamente después de su recolección según las recomendaciones del fabricante. Las muestras para hemocultivo y serología de VIH se transportarán a los Laboratorios Centrales para su procesamiento. Las muestras de sangre restantes se transportarán al Instituto Blizard, donde se indicará la fecha y hora de recepción de la muestra, así como el estado de la misma (p. ej. no coagulado) se registrará en un registro de laboratorio. Las muestras para la prueba QFT-Plus se incubarán a 37 °C poco después de recibirlas durante 18 horas, antes de la centrifugación y aspiración de los sobrenadantes que se almacenarán a -80 °C en espera del análisis de la concentración de IFN-gamma. Las muestras de sangre en tubos Tempus se almacenarán a -80 °C en una rejilla etiquetada en espera de su transporte a la División de Infección e Inmunidad del University College de Londres para la extracción de ARN y el perfil de expresión génica. Las PBMC se separarán de la muestra restante (100 ml), con el posterior aislamiento de las células CD34+ mediante clasificación de perlas magnéticas. La pureza de las células CD34+ aisladas se comprobará mediante citometría de flujo.