Vyhodnocení nového mikrobiologického diagnostického testu na latentní infekci Mycobacterium tuberculosis (MICRO-LTBI)

Cíle:

i) Stanovit, zda lze DNA M. tuberculosis (Mtb) detekovat v CD34+ mononukleárních buňkách periferní krve (PBMC) izolovaných z

• asymptomatičtí dospělí, kteří jsou vyšetřováni na LTBI (kontrolovaní LTBI)
• dospělí s nově diagnostikovanou aktivní tuberkulózou (aktivní případy) ii) Zjistit, zda kmeny Mtb izolované z CD34+ PBMC nedávných kontaktů s TBC v domácnosti jsou geneticky identické s kmeny izolovanými ze sputa indexových případů s plicní TBC, kterým byly vystaveny iii ) Charakterizovat imunologické, klinické a epidemiologické koreláty schopnosti detekovat Mtb v CD34+ PBMC v heterogenní populaci IGRA-pozitivních a -negativní LTBI screenovaní.

iv) Zjistit, zda přítomnost Mtb DNA v CD34+ PBMC u IGRA-pozitivních LTBI screeningů souvisí s přítomností transkripčního podpisu periferní krve, o kterém se nedávno uvádělo, že předpovídá riziko progrese k aktivní TB v) Zhodnotit longitudinální změnu ve výsledcích CD34+ PCR testu

- Osoby screeningu LTBI dokončující chemoprofylaxi pro LTBI

• Osoby screeningu LTBI, které nedostávají chemoprofylaxi
• Pacienti dokončující léčbu aktivní TBC

4.1. Pozadí

Tuberkulóza (TBC) je infekční onemocnění způsobené organismy komplexu M. tuberculosis (MTBC). Primárním patogenem u lidí je M. tuberculosis (Mtb). TBC běžně postihuje plíce a přenáší se vdechováním infekčních kapének vykašlávaných pacientem s aktivní plicní TBC. Tuberkulóza byla hlavní příčinou nemocnosti a úmrtnosti v celé historii lidstva. V Evropě a Severní Americe byl prudký nárůst případů TBC v 17. a 18. století následován rychlým poklesem způsobeným především zlepšenými socioekonomickými podmínkami, aplikací opatření veřejného zdraví a izolací pacientů s TBC.1 Ke konci 19. po sestupném trendu případů TBC a úmrtí v Evropě a Severní Americe se dvě významné události, objev Mtb a rentgen, staly klíčovými v diagnostice a léčbě TBC. s M. bovis bacille Calmette-Guérin (BCG) a léčba antibiotiky v první polovině 20. století vedla ke globálnímu optimismu, že kontrola a eliminace TBC je na dosah. TBC však dodnes zůstává vážnou hrozbou pro veřejné zdraví a je celosvětově druhou hlavní infekční příčinou úmrtí. 2, 3 Podle zprávy WHO z roku 2015 se v roce 2014 celosvětově vyskytlo odhadem 9,6 milionu nových případů TBC (12 % z nich bylo koinfikovaných HIV) a 1,5 milionu úmrtí (z toho 0,4 milionu bylo mezi lidmi koinfikovanými HIV). Kromě toho se odhaduje, že jedna třetina celosvětové populace má latentní Mtb infekci (LTBI), z nichž se asi u 10 % rozvine aktivní TBC během svého života.5

Ačkoli pouze 22 zemí s nízkými nebo středními příjmy (LMIC) představuje 80 % celosvětové zátěže, je TBC stále důležitou nemocí mezi přistěhovaleckou populací v zemích s vysokými příjmy. Ve Spojeném království (UK) se snížení výskytu TBC dosažené ve 20. století obrátilo s 50% nárůstem hlášení TBC mezi lety 1998 a 2009.6 V roce 2013 bylo hlášeno celkem 7 892 případů TBC, což odpovídá incidenci 12,3 na 100 000 obyvatel za rok, což je nejvyšší mezi zeměmi s vysokými příjmy. Vysoký podíl (37,8 %) případů TBC ve Spojeném království se nachází v Londýně, kde je míra výskytu TBC 35,5 na 100 000 obyvatel za rok; Většinu těchto případů představovali přistěhovalci z Indie (30 %), Pákistánu (20 %) a Somálska (5 %).7

V současnosti jsou klíčovými strategiemi kontroly TBC přesná a rychlá diagnostika aktivního onemocnění spolu s účinnou léčbou k přerušení přenosu. Opožděná diagnóza je však hlavní výzvou usnadňující přenos v komunitách.8 Obecně trvá několik měsíců od nástupu příznaků, než pacient s TBC zahájí léčbu. Například ve Spojeném království téměř třetina pacientů s plicní TBC zahájí léčbu 4 měsíce po nástupu příznaků.7 Tak dlouhé prodlevy ve spojení s velkým množstvím LTBI naznačují potřebu intervencí k identifikaci a léčbě jedinců s LTBI k dosažení kontroly TBC. Antimikrobiální léčba LTBI (chemoprofylaxe) je účinná při snižování rizika reaktivace a je rutinně zaváděna v prostředích s vysokým příjmem a nízkým výskytem. Implementaci této politiky, zejména v prostředí s vysokou zátěží, však brání chybějící diagnostický test k identifikaci podskupiny jedinců senzibilizovaných na Mtb, kteří jsou ohroženi rozvojem aktivní TBC, na něž by měla být zaměřena chemoprofylaxe.

V současné době se diagnostika LTBI provádí detekcí adaptivní imunitní reakce na infekci Mtb, a to buď in vivo (za použití tuberkulinového kožního testu) nebo ex vivo (za použití testů uvolňování interferonu-gama [IGRA]). Tento přístup, který nedetekuje Mtb přímo, je omezený tím, že nedokáže rozlišit 10 % senzibilizovaných jedinců, kteří jsou ohroženi reaktivací (u kterých může být přínosem chemoprofylaxe) od 90 % imunologicky senzibilizovaných, ale ne přejít do aktivního onemocnění (u kterého chemoprofylaxe nepřináší žádný přínos). Tato druhá skupina je potenciálně heterogenní: někteří mohli odstranit infekci, zatímco jiní mohou mít LTBI, ale mohou ji neomezeně obsahovat.9 Nástroje k rozebrání těchto možných fenotypů by mohly umožnit přesnější zacílení chemoprofylaxe, ale v současnosti chybí. V této studii budou vyšetřovatelé zkoumat, zda lze Mtb detekovat v CD34+ buňkách izolovaných z periferní krve a) dospělých, kteří jsou vyšetřováni na LTBI (LTBI screenovaní), ab) dospělých s nově diagnostikovanou aktivní TBC (aktivní případy).

4.2. Zdůvodnění studie

Tato studie staví na nedávném pozorování jednoho ze spoluřešitelů (Stephen Reece), který byl součástí skupiny v Institutu Maxe Plancka pro infekční biologii v Berlíně, která detekovala Mtb DNA v CD34+ dlouhodobě repopulačních pluripotentních hematopoetických kmenových buňkách. (LTpHSCs) izolované ze 100 ml periferní krve sedmi zdravých dospělých s LTBI (pozitivní IGRA, aktivní TBC vyloučena); Mtb DNA nebyla detekována v LTpHSC sedmi IGRA-negativních zdravých dospělých. 10 Pokud bude možné toto pozoruhodné zjištění zopakovat v jiném prostředí, mohlo by to vést k vývoji nového mikrobiologického testu („test CD34+ PCR“) s několika potenciálními aplikacemi:

a) k identifikaci jedinců, kteří jsou latentně infikováni Mtb rezistentním na antibiotika (což umožňuje výběr vhodného režimu chemoprofylaxe), b) ke sledování účinnosti chemoprofylaxe a intervencí určených k prevenci získání LTBI, jako jsou vakcíny a programy doplňování mikroživin, c ) sledovat šíření konkrétních kmenů v populaci (poskytnout nástroj pro intervenci v oblasti veřejného zdraví), d) rozlišovat mezi jedinci citlivými na Mtb, kteří jsou vystaveni riziku progrese do aktivního onemocnění oproti těm, kteří nejsou, což umožňuje zacílení chemoprofylaxe na populace, které z ní mohou mít prospěch, a e) poskytnout nové poznatky o imunobiologii LTBI a patogenezi lidské tuberkulózy.

4.3. Hypotézy

i) Mtb DNA lze detekovat v CD34+ PBMC asymptomatických IGRA-pozitivních dospělých a aktivních případů TBC při diagnóze, ale ne u IGRA-negativních dospělých.

ii) Kmeny Mtb izolované z CD34+ PBMC asymptomatických IGRA-pozitivních TB kontaktů budou geneticky identické s kmeny izolovanými ze sputa indexových případů plicní TBC, kterým byly nedávno vystaveny.

iii) Schopnost detekovat Mtb DNA v CD34+ PBMC osob screeningu LTBI souvisí s výsledky IGRA a také s uznávanými klinickými a epidemiologickými rizikovými faktory pro LTBI iv) Schopnost detekovat Mtb DNA v CD34+ PBMC IGRA-pozitivních osob screeningu LTBI asociovaných s transkriptomickými signaturami periferní krve dříve definované jako spojené s progresí do aktivní TBC v) Antimikrobiální terapie je účinná při eliminaci Mtb z CD34+ PBMC izolovaných z jedinců s LTBI nebo aktivní TB, u kterých byl detekovatelný na začátku; a že výsledky testu CD34+ PCR jsou reprodukovatelné při opakování u osob se screeningem LTBI, kteří nepodstoupili chemoprofylaxi

5. Cíle

5.1. Primární cíl

Stanovit, zda lze DNA M. tuberculosis (Mtb) detekovat v CD34+ mononukleárních buňkách periferní krve (PBMC) izolovaných z

• asymptomatičtí dospělí podstupující rutinní screening na LTBI (LTBI screenovaní)
• dospělí s nově diagnostikovanou aktivní tuberkulózou (aktivní případy)

5.2. Sekundární cíle

• Zjistit, zda kmeny Mtb izolované z CD34+ PBMC kontaktů TBC jsou geneticky identické s kmeny izolovanými ze sputa indexových případů s plicní TBC, kterým byly vystaveny
• Charakterizovat imunologické, klinické a epidemiologické koreláty schopnosti detekovat Mtb v CD34+ PBMC v heterogenní populaci IGRA-pozitivních a -negativních LTBI screeningů.
• Zjistit, zda přítomnost Mtb DNA v CD34+ PBMC IGRA-pozitivních screeningů souvisí s přítomností transkripčního podpisu periferní krve, o kterém se nedávno uvádělo, že předpovídá riziko progrese na aktivní TB11
• Pro posouzení longitudinální změny ve výsledcích CD34+ PCR testu v
• Osoby screeningu LTBI dokončující chemoprofylaxi pro LTBI
• Osoby screeningu LTBI, které nedostávají chemoprofylaxi
• pacientů, kteří dokončili léčbu aktivní TBC

Návrh studie a studijní návštěvy

Vyšetřovatelé provedou longitudinální studii. Budou vybrány dvě skupiny účastníků: dospělí, kteří jsou vyšetřováni na LTBI (LTBI screenovaní), a pacienti, kteří se chystají zahájit léčbu aktivní TBC (aktivní případy). Screeningové LTBI jsou ti, kteří jsou vyšetřováni na LTBI jako součást standardní péče: zahrnují nedávné kontakty s případem infekčního indexu TBC, nově příchozí ze zemí s vysokou zátěží TBC, zdravotníky podstupující pracovnělékařské vyšetření a pacienty, kteří se chystají podstoupit imunosupresivní léčbu. . Pacienti s aktivní TBC jsou ti, u kterých byla diagnostikována aktivní TBC, kteří se chystají začít užívat léčbu proti TBC.

Na začátku (návštěva 1) budou účastníci, kteří splňují kritéria pro zařazení a dají písemný informovaný souhlas s účastí ve studii, požádáni, aby poskytli sociodemografické informace včetně podrobností o věku, pohlaví a etnickém původu a také podrobnosti o historii expozice TBC (včetně konkrétní expozice účastníkům s aktivní TBC zapsaným do studie) a další klinicky relevantní údaje, které budou všechny zaznamenány na formuláři Case Report Form (CRF). Sérologický test HIV bude proveden, pokud již není prováděn jako součást běžné péče. Bude odebrán vzorek krve o objemu 120 ml (117 ml, pokud je HIV test již prováděn jako součást běžné péče) pro IGRA (QFT-Plus), hemokultura pro Mtb, analýza rizikových signatur periferního transkriptomu a test CD34+ PCR pro Mtb DNA na základní linii. IGRA-pozitivním účastníkům, u nichž byla aktivní TBC vyloučena pomocí klinického hodnocení a rentgenu hrudníku (součást standardní péče), bude nabídnuta 3měsíční kúry chemoprofylaxe rifampicinem a isoniazidem, pokud splní kritéria pro tuto léčbu (také součást standardní péče). péče).12

Sdělování pozitivních výsledků HIV testů bude řešeno v souladu s doporučeními britských národních směrnic pro testování HIV 2008. Pozitivní výsledky testu HIV budou sděleny v osobním rozhovoru s lékařem studie za přítomnosti sestry z kliniky Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) (místní služba pro HIV). Účastníci, kteří testují HIV-pozitivní, budou posláni na jejich nejbližší kliniku GUM pro potvrzení jejich výsledků a případnou další léčbu.

Po 3 měsících (návštěva 2) budou zaznamenány podrobnosti o předepisování a dodržování chemoprofylaxe a bude odebrán druhý vzorek krve (117 ml) pro opakování testu IGRA (QFT-Plus), hemokultury a CD34+ PCR. Účastníkům, kteří podstoupili chemoprofylaxi, bude při návštěvě 2 odebrána také zkumavka Tempus.

Na začátku (návštěva 1) budou účastníci, kteří splňují kritéria pro zařazení a dají písemný informovaný souhlas s účastí ve studii, požádáni, aby poskytli základní sociodemografické informace včetně podrobností o věku, pohlaví a etnickém původu, jakož i o délce trvání jejich symptomů, kontaktu s jakýmikoli zapsaných LTBI screenovaných a další klinicky relevantní údaje, které budou všechny zaznamenány na CRF. U této skupiny pacientů je v rámci rutinní péče prováděna sérologie HIV, kompletní krevní obraz a mikroskopie stěru ze sputa a cutlure pro M.tuberculosis. Vzorek krve o objemu 114 ml bude odebrán pro IGRA (QFT-Plus), krevní kultura pro Mtb a test CD34+ PCR pro Mtb DNA na začátku. Pacienti s TBC budou léčeni pro aktivní onemocnění podle doporučení Spojeného království. 12

Po ukončení chemoterapie (návštěva 2, obvykle po 6 měsících) budou zaznamenány podrobnosti o předepisování a dodržování anti-TB léčby a bude odebrán druhý vzorek krve (114 ml) pro IGRA (QFT-Plus), hemokultura pro Mtb a test CD34+ PCR.

Studijní postupy

Postupy pro pozvání a informovaný souhlas

Pozvání

V Londýně se screening na LTBI pomocí IGRA běžně provádí ve čtyřech skupinách: nedávné kontakty s aktivními pacienty s TBC; nově příchozí ze zemí s vysokým zatížením TBC; pacientů, kteří se chystají zahájit imunosupresivní léčbu; a zdravotníci podstupující pracovnělékařské prohlídky. Skupiny ohrožené LTBI mohou být zpočátku identifikovány v různých prostředích (klinika TBC, primární péče, revmatologické ambulance, pracovnělékařské služby), ale všechny jsou odeslány buď na kliniku TBC (kontakty, nově příchozí, pacienti před zahájením imunosupresivní léčby ) nebo na Kliniku pracovnělékařské péče (zdravotníci podstupující pracovnělékařské vyšetření) k provedení screeningu LTBI. Potenciálně způsobilí pacienti pro screening LTBI budou proto identifikováni a přijati do studie na klinikách TBC nebo na Klinice pracovního lékařství. Pacienti s aktivní TBC budou identifikováni a přijati na Barts Health NHS Trust TB Clinics.

Potenciálně způsobilí jedinci budou o studii informováni zdravotními sestrami nebo lékaři pracujícími na TBC klinikách nebo Klinice pracovního lékařství, kteří provádějí screening TBC jako součást běžné klinické péče. Těm, kteří projeví zájem o studii, poskytne člen týmu klinické péče Informační list pro účastníky. To vysvětlí cíle, metody, očekávané přínosy a potenciální rizika studie a bude prezentováno v netechnickém jazyce buď v angličtině nebo v případě potřeby v jiných jazycích. Ti, kteří odebírají informační list účastníka, budou požádáni, aby vyplnili „kontaktní list“, kde budou uvedeny jejich kontaktní údaje a zmocnění výzkumného týmu, aby je kontaktoval, jakmile budou mít možnost si informace přečíst; tento „kontaktní list“ předá výzkumnému týmu obvyklý tým péče o účastníka.

Postupy informovaného souhlasu

Informovaný souhlas bude veden podle standardních provozních postupů JRMO. Informovaný souhlas obdrží v soukromé místnosti personál, který prošel specifickým školením v oblasti správné klinické praxe a přijímáním informovaného souhlasu, což mohou být lékaři, zdravotní sestry nebo výzkumní asistenti. Během procesu souhlasu budou účastníci informováni, že účast je dobrovolná a že mohou odmítnout vstup do studie nebo odstoupit kdykoli během sledování, a to z jakéhokoli důvodu.

Účastníci budou požádáni, aby vyjádřili svůj souhlas s účastí podpisem a vytištěním svého jména. Nestranný svědek bude muset spolupodepsat souhlas pro ty, kteří během procesu souhlasu vyžadují tlumočníka. Účastníkům budou finančně kompenzovány cestovní náklady spojené s každou návštěvou.

Zápis a následné postupy

Nábor na základní linii

Potenciální účastníci budou posouzeni z hlediska způsobilosti na základě výše uvedených kritérií pro zařazení a vyloučení. Po procesu souhlasu a poté, co účastník dá písemný informovaný souhlas s účastí, bude přiděleno jedinečné identifikační číslo. Posouzení způsobilosti k účasti bude provádět vhodně vyškolený personál, kterým mohou být lékaři, zdravotní sestry nebo výzkumní asistenti.

Postup sběru dat

Pomocí CRF budou při návštěvě 1 (V1) všichni účastníci požádáni, aby poskytli sociodemografické informace a anamnézu včetně anamnézy léků. Účastníci screeningu LTBI budou požádáni, aby poskytli podrobnosti o nedávné a předchozí expozici pacientům s TBC, historii TBC a dalších potenciálních determinantech LTBI, jako je fyzická blízkost k aktivním pacientům s TBC, průměrná denní doba expozice a také celková doba expozice indexovým případům . CRF budou také obsahovat následující údaje: kontrolní seznam kritérií způsobilosti, výsledky základních klinických vyšetření a laboratorních testů a informace shromážděné během sledování včetně podrobností o vysazení, je-li to vhodné. Členové projektového týmu odpovědní za vyplnění CRF, kterými mohou být výzkumní pracovníci nebo terénní pracovníci, budou uvedeni v deníku delegování.

Základní odběr vzorků a laboratorní hodnocení

Vzorky budou odebírány, jak je podrobně uvedeno na obrázku 1 a v tabulkách 1 a 2, a laboratorní analýzy budou provedeny tak, jak je podrobně uvedeno v tabulkách 3 a 4. Tam, kde se testy provádějí jako součást běžné péče (např. úplný krevní obraz u pacientů s aktivní TBC, sérologie HIV u pacientů s aktivní TBC a IGRA-pozitivní LTBI screeningové), výsledky budou zpřístupněny prostřednictvím CRS a zdokumentovány na CRF. IGRA-negativním LTBI screeningům a neexponovaným účastníkům bude při návštěvě 1 nabídnut test na HIV.

Aby bylo možné zjistit, zda se kmeny Mtb izolované z CD34+ PBMC kontaktů s TB shodují s kmeny izolovanými ze sputa indexových případů, kterým byly vystaveny, budou vzorky sputa odebrány od 10 pacientů s indexově aktivní tuberkulózou, kteří mají pozitivní kontakty na test CD34+ PCR zařazené do studie. a celogenomová sekvenační analýza bude provedena na izolátech kultivovaných z těchto vzorků. Na základě této analýzy budou navrženy primery pro vytvoření Mtb amplikonových knihoven pomocí bioinformatických přístupů k zachycení diverzity kmenů. Tyto primery pak budou použity k vytvoření Mtb amplikonových knihoven z CD34+ buněk obsahujících Mtb genomickou DNA izolovanou z TB kontaktů. Tyto knihovny pak budou sekvenovány a porovnány s Mtb genomem případu indexu, aby se určilo, zda se kmeny izolované z případů indexu a kontaktů shodují.

Účastníci s pozitivními testy na HIV / IGRA budou odesláni na kliniku HIV / TBC k dalšímu posouzení. Tam, kde byly testy HIV a IGRA provedeny pro výzkumné účely (tj. pokud nejsou součástí rutinní péče), výzkumní pracovníci sdělí tyto výsledky účastníkům, jakmile budou k dispozici.

Následné postupy

• Účastníci screeningu LTBI: Návštěvy a následná hodnocení jsou podrobně popsána na obrázku 1, tabulce 1 a tabulce 3. Účastníci se zúčastní návštěvy 2 ve 3 měsících (návštěva 2, V2). Účastníci, kteří dokončili chemoprofylaxi, budou mít po ukončení léčby rutinní klinické vyšetření. Ti, kteří neužívají chemoprofylaxi, budou také sledováni 3 měsíce po V1. Kromě vyplnění CRF s podrobnostmi o symptomech aktivní TBC (všichni účastníci) a dodržování chemoprofylaxe (ti, kteří dostávají chemoprofylaxi), bude odebrán vzorek krve o objemu 117 ml pro imunologickou a molekulární analýzu, jak je podrobně uvedeno v části 13.3 níže. Po dokončení druhé návštěvy bude účast ve studii ukončena.
• Pacienti s aktivní TBC: Návštěvy a sledování jsou podrobně uvedeny na obrázku 1, tabulce 2 a tabulce 4. Účastníci, kteří užívají léčbu proti TBC, budou po dokončení léčby absolvovat rutinní klinické vyšetření a během léčby bude odebrán druhý vzorek krve o objemu 114 ml. tuto návštěvu za účelem imunologické a molekulární analýzy, jak je podrobně uvedeno v části 13.3 níže. Po dokončení druhé návštěvy bude účast ve studii ukončena.

Výsledky testu CD34+ PCR nebudou použity jako vodítko pro klinický management, protože tento test je výzkumným nástrojem v raných fázích vývoje a jeho výsledky nebyly korelovány s žádným klinickým výsledkem.

Odstoupení účastníka

Účastníci budou odvoláni, pokud odvolají svůj souhlas s účastí nebo pokud dojde k závěru, že odvolání je v nejlepším zájmu účastníka. Účastníci budou také považováni za odhlášené, pokud se nezúčastní své druhé plánované studijní návštěvy navzdory písemným a telefonickým upomínkám. Pokud účastník odstoupí ze studie, důvod odstoupení bude zaznamenán v CRF.

Údaje shromážděné do doby odstoupení budou zahrnuty do analýz studie, pokud účastník nepožádá jinak. Jakékoli klinické vzorky odebrané před odstoupením účastníka budou použity pro analýzy studie.

Definice konce studia

Studie bude ukončena, jakmile budou dokončena všechna klinická a laboratorní hodnocení všech účastníků účastnících se sledování.

9. Statistické úvahy

9.1 Velikost vzorku

Hlavním cílem této studie je ověřit a rozšířit poznatky z jiného prostředí, ve kterém byla genomová DNA Mtb detekována v CD34+ buňkách izolovaných z periferní krve sedmi IGRA-pozitivních asymptomatických dospělých.10 K dosažení tohoto cíle bude do průřezové studie přijato celkem 100 osob screeningu LTBI (20 účastníků na nezávislou proměnnou, která bude testována v regresní analýze). Předpokládá se, že přibližně padesát z těchto účastníků bude IGRA-pozitivních, z nichž přibližně čtyřiceti bude předepsána chemoprofylaxe: sledování 25 z těchto účastníků poskytne >80% sílu na 5% hladině významnosti k prokázání snížení podíl CD34+ PCR-pozitivních jedinců od 80 % na začátku do 30 % při sledování.

10. Etická hlediska

Před zahájením studie bude požádáno NHS REC o schválení protokolu studie, formulářů informovaného souhlasu a dalších relevantních dokumentů. Studie nebude zahájena, dokud nebudou získána potřebná schválení od etické komise a nebude dána „zelená“ k aktivaci stránek sponzorem. KI zajistí, aby tato studie byla provedena v souladu s Helsinskou deklarací (2013) a etickými principy Rámce pro řízení výzkumu pro zdravotní a sociální péči, druhé vydání, 2005 a jeho následných dodatků. Rozhodnutí o tom, zda změna představuje malou nebo podstatnou změnu, bude spočívat na zadavateli. Podstatné změny, které vyžadují přezkoumání EK, nebudou provedeny, dokud nebudou schváleny příslušným orgánem. Veškerá korespondence se sponzorem a REC bude uchována ve studijním kmenovém spisu. KI oznámí REC a sponzora na konci studie.

Před účastí v této studii bude od účastníků získán písemný informovaný souhlas vhodně vyškolenou osobou (kterou může být lékař, sestra nebo výzkumný asistent). Informační listy budou v případě potřeby k dispozici v angličtině a dalších jazycích. Potenciálním účastníkům bude poskytnut informační list a budou vysvětleny cíle, metody, očekávané přínosy a potenciální rizika studie. Během procesu souhlasu bude účastníkům vysvětleno, že účast je dobrovolná a mohou odmítnout vstup do studie nebo odstoupit kdykoli během sledování, z jakéhokoli důvodu.

Střet zájmů

Nebyly identifikovány žádné finanční nebo jiné konkurenční zájmy pro KI ani žádného spoluřešitele.

11. Bezpečnostní aspekty

Vzhledem k tomu, že studie je observační, riziko nežádoucích účinků souvisejících se studií je zanedbatelné. Jakákoli nežádoucí příhoda, která je považována za související se studií, však bude do 24 hodin hlášena zadavateli. Objem odebrané krve (až 120 ml) může být některými účastníky vnímán jako velký, ale dospělí darující krev běžně dávají 500 ml najednou, aniž by utrpěli anémii. Vyšetřovatelé proto nepředpokládají žádné nežádoucí účinky související s odběrem tohoto objemu krve. Informace o objemu odebrané krve a o tom, zda to nebude mít nežádoucí zdravotní následky, budou účastníkům vysvětleny v informačním listu. Všichni pacienti s TBC budou vyšetřeni na anémii jako součást jejich obvyklé klinické péče a ti, kteří mají při vstupu hladinu hemoglobinu pod 10 g/dl, budou vyloučeni. Kromě toho budou přijata následující opatření, aby se minimalizovaly potenciální nepříjemnosti, nepohodlí a riziko, které mohou účastníci zažít v průběhu této studie:

- použití vhodně vyškoleného personálu k provádění flebotomie

12. Manipulace s daty a vedení záznamů

12.1. Důvěrnost

Chráněné zdravotní informace (PHI) nezbytné pro provádění a analýzu studie budou shromažďovány pro všechny účastníky, kteří byli pro účely studie podrobeni screeningu; tyto informace budou obsahovat jméno každého účastníka, datum narození, pohlaví, adresu, telefonní číslo, případně číslo lékařského záznamu, případně e-mailovou adresu a etnický původ. Zaměstnanci studie vyžadující přístup k PHI za účelem provedení nebo analýzy studie budou uvedeni v deníku delegování. PHI zůstane důvěrný a bude s ním nakládáno, zpracováváno, ukládáno a ničeno v souladu se zákonem o ochraně dat z roku 1998. Účastníci si ponechají právo odvolat své oprávnění k používání jejich PHI kdykoli během studie. Všichni účastníci budou v publikacích vyplývajících z této studie anonymizováni. Údaje budou pseudoanonymizovány následovně. PHI bude držena v zabezpečené databázi spojené s jedinečným identifikačním kódem. Klinické informace budou uchovávány v samostatné zabezpečené databázi spojené se stejným jedinečným identifikačním kódem. KI a spoluřešitelé budou mít přístup k pseudoanonymizovanému souboru dat závěrečné studie.

V průběhu výzkumu budou všechny záznamy v odpovědnosti CI a budou uchovávány v bezpečných podmínkách. Po dokončení studie je požadavkem zadavatele, aby byly záznamy a údaje uchovávány po dobu dalších 20 let. KI bude působit jako „správce“ výzkumných dat. Přístup k PHI bude omezen na minimální počet osob nezbytných pro provedení studie, kontrolu kvality, audit a analýzu. Následující dokumenty budou obsahovat zdrojové dokumenty: protokoly prověřování, informovaný souhlas a papírový CRF. Všechny zdrojové dokumenty budou bezpečně uloženy v uzamčených kartotékách. Přenos a přeprava dat bude probíhat v souladu se zákonem Spojeného království o ochraně dat z roku 1998. Informace umožňující identifikaci osob nebudou ukládány, přepravovány ani odesílány do nebo z jakéhokoli přenosného zařízení, pokud toto zařízení není zašifrováno.

12.2. Sběr, záznam a manipulace s daty

Podepsané formuláře souhlasu a papírové dokumenty obsahující zdrojová data budou bezpečně uloženy. Data studie budou vložena do databáze v softwaru EpiData Entry. Zaměstnanci absolvují odpovídající školení k používání databáze pro zadávání dat. Laboratorní data budou vložena do databáze.

CI a spoluřešitelé budou mít během studie přístup k datům studie. Zaměstnanci studie, kteří takový přístup potřebují k provedení studie, budou mít také takový přístup, jaký je nezbytný. Přístup k údajům studie v průběhu studie bude v případě potřeby umožněn také oprávněným zástupcům sponzora, hostitelské instituce a regulačních orgánů.

12.3. Kontrola kvality a zajištění kvality

Dokumentace studie bude dána k dispozici zástupcům zadavatele a EK pro kontrolu kvality a zajištění kvality, jak je požadováno.

13. Laboratoře

13.1. Odběr vzorků, značení a zpracování

Vzorky krve budou odebrány zaměstnanci studie, označeny ID účastníka a datovány. Zkumavky Tempus budou ihned po odběru důkladně protřepány podle doporučení výrobce. Vzorky pro hemokulturu a sérologii HIV budou převezeny ke zpracování do Centrálních laboratoří. Zbývající vzorky krve budou převezeny do The Blizard Institute, kde bude uvedeno datum a čas přijetí vzorku a také stav vzorku (např. nesražený) bude zaznamenán do laboratorního deníku. Vzorky pro test QFT-Plus budou inkubovány při 37 °C krátce po obdržení vzorků po dobu 18 hodin, před centrifugací a aspirací supernatantů, které budou skladovány při -80 °C až do analýzy koncentrace IFN-gama. Vzorky krve ve zkumavkách Tempus budou skladovány při -80 °C v označeném stojanu až do transportu do Divize infekce a imunity, University College London pro extrakci RNA a profilování genové exprese. Ze zbývajícího vzorku (100 ml) budou separovány PBMC s následnou izolací CD34+ buněk pomocí magnetického třídění. Čistota izolovaných CD34+ buněk bude kontrolována průtokovou cytometrií.